考马斯亮蓝R250斑点法检测猪脾转移因子分离液中蛋白的研究

考马斯亮蓝R250斑点法检测猪脾转移因子分离液中蛋白的研究 Vol . 10 ,No . 5 第 10 卷第 5 期生 物 技 术 2000 年 10 月 B IOTECHNOLOGY Oct ,2000 + () 中图分类号 :Q593 . 1 文章编号 :1004 - 311X200005 - 0012 - 02 文献标识码 :A 考马斯亮蓝 R250 斑点法检测猪脾 转移因子分离液中蛋白的研究 丁明文 ,李海群 () 沈阳生物技术研究所 ,辽宁 沈阳 ,110034 ( ) () 摘 要 :考马斯亮蓝 CBB斑点法检测猪脾转移因子分离液中蛋白 ,以牛血清白蛋白 BSA作阳性对 R250 照 ,结果显示该方法灵敏度高 、操作简便 ,耗时短 ,可以代替 PAGE 法 。 关键词 :CBB斑点法 ;转移因子 ;蛋白检测 R250 3 11213 CBB法灵敏度测定实验 :取中速 ( R250TF 分离液中蛋白检测多采用 PAGE 或 1 滤纸 ,用微量进样器加不同体积上述 3 种不 ) SDS - PAGE法,以不出现蛋白区带为蛋白 μμμμ同 BSA 液 于 其 上 , 分 别 为 5l 、4l 、3l 、2l 、 阴性标志 ,该法灵敏度较高 ,但操作繁琐 ,费 时 费 力 且 需 较 复 杂 的 仪 器 设 备 , 本 室 将 μ1l 。以蒸馏水为对照 , 室温下 待 滤 纸 干 后 , CBB斑点 法 应 用 于 TF 分 离 液 蛋 白 检 测 , 4 R250( ) 用 0125 %CBB含 45 % 、10 %乙酸染色 R250 旨在寻求高灵敏度的快速简便的 TF 分离液 30s ,回收染液 ,以蒸馏水冲洗滤纸 ,然后用脱 蛋白检测法 。 4 色液脱色至底色显白色为止 。 11214 CBB法检测 TF 分离液中的蛋白 : R250 以蒸馏水作为阴性对照 ,BSA 为阳性对照 ,方 1 与方法 法同 11213 。 111 材料及设备 ( 11111 材料 : TF 分离液为本室制备 猪脾为 2 结果 ) 市售。 μ( 11112 器 材 : 015 , 20l 微 量 进 样 器 Gilson 211 CBB灵敏度检测结果 :图 1 、2 、3 明 R250) ( 公司 产 品, 20/ 320 型 透 析 袋 Serua 公 司 产 CBB斑点法检测对蛋白非常灵敏 ,BSA 样 R250) ( ) 品,脱色摇床 江苏海门其林医用仪器厂, μμ品为 0105g, 1 . 25g 增 呈 现 清 晰 可 辨 蓝 色 () 中速滤纸 国产。 斑点 ,且斑点直径与样品浓度有一定线性关 () 11113 试 剂 : 牛 血 清 白 蛋 白 BSAAerva 产 系 ,可以粗略表征样品蛋白量的多少 ,该方法 () () 品 ,CBBL KB 产品,甲醇 、乙酸 纯。 具有很好的重现性 。 R250 112 方法 212 TF 分 离 液 蛋 白 的 检 测 : 图 4 表 明2 ,稍改11211 猪脾 TF 分离 :用常规透析法 CBB斑点法检测常规透析法所制备的 TF R250进 。 分离液结果为阴性 ,BSA 阳性对照很鲜明 。 11212 BSA 浓度配制 : 250mg/ ml 、100mg/ ml 、 50mg/ ml 。 收稿日期 :2000 - 04 - 25 Vol . 10 ,No . 5 第 10 卷第 5 期生 物 技 术 2000 年 10 月 B IOTECHNOLOGY Oct ,2000 简便 ,不需要复杂的仪器设备 ,是一种值得推 广的 TF 分离液中蛋白的定性检测方法 。 3 讨论 参考文献 : 1 卢锦汉 ,章以浩 ,赵铠 1 医学生物制品学 M 1 北京 : 人 由以上结果 可 以 得 出 CBB斑 点 法 以 R250 民卫生出版社 ,1996 :967 - 9681 μBSA 为实验材料 ,样品为 0105g 时仍可出现 2 张广英 ,杨永福 ,等 1 猪转移因子的提取及其特性鉴定 ( )清晰 可 辨 的 蓝 色 斑 点 。PAGE SDS - PAGE J 1 中国畜禽传染病 ,1991 ,3 :53 - 551 5 μ用考马斯亮蓝染色法可染出 0125g 蛋白, 3 朱平 ,冯书章 1 抗体实验技术 M 1 长春 : 长春出版社 , 1994 :4721 虽然银染法可染出 1ng 蛋白 ,但操作较考马 4 金冬雁 ,黎孟枫 ,等译 ,分子克隆实验指南M 1 北京 : 科 斯亮蓝染色法更为复杂 ,在一般实验室及生 学出版社 ,1992 :885 . 产现场不易推广 。而 CBB斑点 法 对 蛋 白 R250 5 周顺伍 1 生物化学实验技术 M 1 北京 : 北京农业大学 ( μ) 的定性检测不仅灵敏度高 0 . 05g, 且操作 出版社 ,1991 :1041 Detecting the protein of p - TF isolating liquid with CBBspot R250 DING Ming - wen ,L I Hai - qun ( )Shenyang Institute of Biotechnology ,Shenyang 110034 ,China Abstract :The protein of p - TF isolating liquid was detected with CBBspot . BSA was used as positive R250 control . The result showed that this method was rapid sensitive and uncomplicated ,instead of protein - PAGE. Key Words :CBBspot ; TF ; detecting protein R250 + () 中图分类号 :Q539 . 7 文章编号 :1004 - 311X200005 - 0013 - 04 文献标识码 :A 从栀子细胞培养物中分离多糖最佳工艺条件的研究 1 2 3 3石若夫,李建国,李洪艳,王关林 (11 大连理工大学化工学院 ,辽宁 大连 116012 ; 21 大连市高新园区城管处 ,辽宁 大连 116021 ; ) 31 辽宁师范大学生物工程研究所 ,辽宁 大连 116029 摘 要 :对栀子细胞培养物多糖的提取 、纯化条件进行优化研究 ,结果表明 ,提取的最佳工艺是 80 ?下的 (碱性水中浸提 2h ,加水量为 50 倍 ,醇析用乙醇的浓度为 70 % - 80 % ,蛋白质去除过程中氯仿/ 正丁醇 V/ ) () V,样品/ 氯仿 - 正丁醇 V/ V分别为 1?014 和 1?0124 时 ,效果最好 。 关键词 :栀子 ;多糖分离 ;细胞培养 ( ) 药保健行业中得到更广泛的应用 。栀子 Gardenia jasminodes eills 为茜草科 植物 ,亦称山栀子 、黄栀子 。其果实是传统的 栀子的繁殖有种子 、扦插 、嫁接 、分株等 2 中药 ,有清热泻火 、凉血散阏之功效 ,主治热 ,但繁育技术都不完善,而且有很强的 方法 病心烦 、目赤 、黄疸 、吐血 、热毒疮疡等症 ,在 季节性 ,每年只能采收一次果实 。植物细胞 中医处方中应用甚广 。近年来 ,随着人们对 培养技术克服了这些弊病 ,具有植物材料繁 多糖功效认识的增多 ,已有人发现栀子多糖 殖迅速 ,易于调控出大量目的物质等优点 ,已 1 具有抗肿瘤的生物活性,这将使栀子在医 有一些中药植物在运用细胞培养技术后细胞 中生物活性物质的含量得到了提高 。至今 , 收稿日期 :1999 - 12 - 15