奶牛胎衣不下与乳中孕酮、雌二醇含量的关系
奶牛胎衣不下与乳中孕酮、雌二醇含量的关
系
第28卷第1期
2006年2月
江西农业大学
ActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensis Vo1.28,No.1
Feb.,2006
文章编号:1000—2286(2006)Ol—Oll9一O3
奶牛胎衣不下与乳中孕酮,
雌二醇含量的关系
叶选怡,陈海燕,傅衍
(1.浙江丽水学院生物系,浙江丽水323000;2.浙江大学动物科学学院,浙江杭州310029)
摘要:用放射免疫法测定了5O头中国荷斯坦牛分娩当天及第2d乳中的孕酮(P)和雌二醇(E.)的含量.结果
表明:胎衣不下牛产后的孕酮含量与正常牛无显着差异;而雌二醇则比正常牛低,在分娩当天低将近1/3.但,
检验的结果差异均未达显着.
关键词:胎衣不下;孕酮;雌二醇
中图分类号:Q492.5;s814.1文献标识码:A
TheRelationshipBetweenAfterbirthNon—exuviationof ChineseHolsteinCOWSandtheContentsofProgesterone
andOestradiolinTheirMilk
YEXuan—yi,CHENHai—yan,FUYan
(1.DepartmentofBiology,LishuiCollege,ZhejiangProvince,Lishui323000,China;2.Coll
egeofAni—
realScience,Zh~iangUniversity,Hangzhou310029,China)
Abstract:Thecontentsofprogesteroneandoestradiolinthemilkof50ChineseHolsteinCowsweremeas—
uredatthedayoftheircalvingandthenextdaybymeansofradi0immun0assay.Theresultindicated:the
differencebetweenthecontentofprogesteroneinthemilkoftheCOWSwhoseafterbirthsdidnotexuviateand
tllatofthenormalCOWSwasnotsignificant.butthecontentofoestradiolinthemilkoftheCOWSwhoseafter—
birthsdidnotexuviatewaslowerthanthatofthenormalCOWS;andontheverydayofcalvingitwas1/3times
lower,butT—testdidn'tshowsignificantdifference.
Keywords:afterbirthnon—exuviation;progesterone;oestradiol
荷斯坦牛在我国畜牧业生产中占有重要的地位,对其进行生殖激素的研究十分必
要.自放射免疫
激素测定技术出现后,国内外在生殖内分泌领域的研究取得了巨大的进展?.本试
验对荷斯坦牛的
胎衣不下现象与乳中孕酮(P),雌二醇(E)含量的关系进行了研究,这对研究母牛的
卵巢机能,提高奶
牛的生产力均具有重要意义.
1材料与方法
1.1材料.
本研究在余杭县南湖农场奶牛二队进行,试验牛为中国荷斯坦牛,共50头,全部采
用机器采奶.自
收稿日期:2005—08—29
基金项目:国家自然科学基金资助(39670533)
作者简介:叶选怡(1965一),女,副教授,研究方向:生物学.
?
120?江西农业大学第28卷
产犊当天(0)开始采乳样,接着第1d,第2d均采样.采样时间为上午08:00—10:00,采样方法是直接
从奶桶中取奶1OmL左右,奶样以0.1%叠氮钠防腐,采后立即放人0—4?冰箱内保存,奶样在一周内
经脱脂后再测定孕酮(P)含量.
1.2测定方法
雌二醇放射免疫测定法的操作程序为:取1mL脱脂乳于抽提管中,加6mL二氯甲烷抽提5min:
取2mL抽提液,加入10LH一雌二醇,45?水浴蒸干.在45?水浴中,加1X10mol/L磷酸缓冲
液0.2mL,回旋振荡15min,冷却.力?0.1mL的抗血清,37?水浴45rain,再放冰水中20rain;加0.5%
明胶一磷酸缓冲液0.1mL,摇匀.再在冰水浴条件下加0.5%葡萄糖加膜活性炭0.5mL,摇匀,冰水浴
中15rain,再离心10min.取上清液倒人闪烁瓶中,加8mI闪烁液,隔夜后测定放射活性,即每分钟脉
冲数(cpm).同时制作H一雌二醇标准曲线,并根据标准曲线计算所测的雌二醇含量.
孕酮放射免疫测定法的操作程序为:在盛有10LH一孕酮试管中加被测牛奶50L,再加0.2mL
的抗血清,37?水浴45rain,再在冰水中20min.以后步骤同雌二醇测定法. 1.3方法学鉴定
灵敏度:雌二醇和孕酮标准曲线范围分别是0,400Pg和0,600Pg.根据实验的标准曲线,用
2XSD方法计算雌二醇.孕酮测定方法的灵敏度分别为6Pg(n=7)和l0pg(n=7). 精密度:2次雌二醇测定平均反应误差关系(RER)为0.035,2次孕酮测平均RER为0.038.孕酮
标准曲线各点平均变异系数为(1.90土1.85)%.雌二醇标准曲线各点平均变异系数
为(3.97士
2.59)%.孕酮样品测定批内变异系数为6.2%(n=5),批问变异系数为14.4%(n3).雌二醇样品
测定批内变异系数为6.8%(n=5),批间变异系数为14.1%(rL=3). 特异性:用常见的类固醇激素进行交叉反应试验,在试管中分别加入不同的交叉物1Ong,吹干后
按PRIA或E,RIA测定其结合的cpm,检验其结果与0标准管的差异显着性,对差异显着的再用Abra—
ham法测定交叉反应百分率.结果为:孕酮抗血清与皮质素,11一脱氧皮质醇,皮质酮及17一OH孕酮
有较小的交叉,而与另外l0种类固醇激素(雌醇,雌三醇,雄酮,脱氧异雄酮,11一脱氧皮质醇,皮质醇,
醛固酮,双氧睾酮,原胆烷醇酮,睾酮)没有明显的交叉反应.雌二醇抗血清仅与雌酮,雌三醇有3.3%
和2.9%的交叉,而另外12种类固醇激素没有明显的交叉反应.所以干扰物质对孕酮及雌二醇测定的
影响基本上可以忽略.
2结果与讨论
5O头牛中有6头胎衣不下,占12%.胎衣不下牛与正常牛在分娩当天及第2d的孕酮,雌二醇含
量比较见表1.
表1胎农不下牛与正常牛P,E:含量的比较
Tab.1ThecomparativeanalysisbetweenthecontentofprogesteroneandoestradiolInthemil
k
fromtheafterbirthnon—exuvlatlonCOwSandthatofthenormalCOWS
由表1中可见,胎衣不下牛产后的孕酮含量与正常牛基本无差异;而雌二醇则比正常牛低,在分娩
当天低将近1/3.但t检验的结果差异均未达显着.
胎衣不下与牛胎盘的结构特性及母子胎盘相互结合的特点有很大关系,但与激素
关系怎样?由表
1可知胎衣不下牛与正常牛其产犊当天及第2d孕酮含量基本无差异.Erb等曾经报道将怀孕牛切
第1期叶选怡等:奶牛胎衣不下与乳中孕酮,雌二醇含量的关系?121? 除卵巢而造成产前低孕酮,会引起胎衣不下,并且外源孕酮能代替内源孕酮防止胎衣不下,Johnson及
Estergreen等也证实怀孕后期黄体对防止胎衣不下是必需的.本试验结果与他们的发现并不矛盾,因
为本试验测定的仅是产后的孕酮含量,并不表明在产前也不存在差异,因为孕酮在产前2,3d就已开
始下降],下降速度也可能有不同,所以本结果并不能否认关于胎衣不下与产前孕酮不足有关的假设,
而只是提示我们必须进一步研究胎衣不下牛的产前孕酮含量.本试验发现胎衣不下牛分娩当天雌二醇
比正常牛低将近三分之一(但由于头数少,个体差异大,t检验结果P>0.05),与Asthe和Kolm的结
果恰恰相反.他们的试验结果是:胎衣不下牛产后血浆雌激素高于正常牛,并解释为,因牛不下的胎衣
也是雌激素的一个来源,从而推断产前雌激素水平上升的增加,孕酮含量下降的减少可能是胎衣不下的
原因.另外从Agthe和Kolm本身实验结果也可以看出胎衣不下牛其雌激素在产前即比正常牛高lng/
ml左右,可见并不是由于产后胎衣不下而使雌激素高于正常.本试验结果认为胎衣不下与分娩及雌二
醇未达峰值有关.
参考文献:
[1]B~emaDH.UseofCOW—sideprogesleroneteststoimprovereproductiveperformanceofhigh—producingdairyCOWS[J].
Theriogenology,1994,42:765—771.
[2]RajamahendranR.Afieldstudyontheusefulnessofmilkprogesteronedeterminationtoconfirmoestrusandpregnancyof
dairyCOWinthefracervalleyareaofBritishColumbia[J].CanVetJ,1993,34:394—352.
[3]石放雄,吴兰生.用ELISA测乳汁孕酮进行奶牛的发情检查和早孕诊断的研究
[J].中国畜牧杂志,1987,23(5):3—
5.
[4]蔡正华,卢雁平,程金华,等.奶孕酮放射免疫测定改善奶牛受胎力[J].核
农,1998,12(3):3—5.
[5]徐直,蒋振国,徐一树,等.黑白花奶牛发情周期血液中促卵泡素,促黄体素,促乳
素,孕酮,雌二醇的含量及变化规律
[J].华北农,1996,11(3):121—127.
[6]ErbRE.Effectofovariectomyonconcentrationofprogesteroneinbloodplasmaandurinaryestrogenexcretionrateinthe
pregnantbovine[J].JPairySci,1968,51:420.
[7]JohnsonKR.ErbRE.Maintenanceofpregnancyinovariectomozedcattlewithprogestincompoundsandtheireffectonpro—
gestinlevelsintheco~usluteum[J].JDairySci,1962,45:633.
[8]EstergreenVLEffectofovariectomyonpregnancymaintenanceandparturitionindairyCOWS[J].JDairySci,1967,50:
l293.
[9]SuithVG.Bovineserumestrogens,progestinsandglueoeorticoidsduringlatepregnancy,parturitionandearlylactation[J].
JAnimSci,1973,36:390.
[10]AgtheO,KolmHP.OeslrogenandprogesteronelevelsinthebloodplasmaofCOWSwithnormalparturitionorwithare—
tainedplacenta[J].JReprodFert,1975,43:163.