唾液抗PAc抗体对变形链球菌和茸链球粘附的抑制作用

唾液抗PAc抗体对变形链球菌和茸链球粘附的抑制作用 唾液抗PAc抗体对变形链球菌和茸链球粘 附的抑制作用 ?148?北京口腔医学1997年第5卷第4期 f一/,唾液抗PAc抗体对变形链球菌 .和茸毛链球菌粘附的抑制作用 刘建国0 边专 擒夏作者采用同位紊标记液闪技术研究唾液抗变形链球菌表面蛋白(PAc)抗体对变形链球菌和茸毛链 球菌在全唾液包被的羟基磷灰石(SHA)上粘附的抑制作用.结果显示,古有高效价的特异性抗PAc抗体的兔唾液 使变形链球菌]ngbritt在SHA土的粘附数明显减少,而对茸毛链球菌6715的粘附无影响提示抗PAc抗体能抑制 变形链球菌在唾檀获得性膜上的粘附.这可能是特异性抗体抗龋作用的机制之一 关t调唾液变形链球菌茸毛链球萱.表面蛋白抗原粘附幸盖一一—————一 细菌对牙面的粘附是致龋菌斑形成的先决 条件.细菌在牙面的粘附和集聚是其表面粘附 素(adhesins)与牙面受体相互作用的结果.表 面蛋白抗原(PAc)是变形链球菌(Streptococ— CUSmutans)的主要粘附素,在变形链球菌与牙 面获得性膜的初始粘附中起着重要作用.研 究抗PAc抗体对细菌粘附的影响,有助于了解 特异性抗体的防龋机理.本研究观察了含高效 价抗PAc抗体的兔唾液对变形链球菌和茸毛 链球菌(StreptococcusSobrinus)在全唾液包被 的羟基磷灰石(SHA)上的粘附有无抑制作用. 材料和方法 1抗愿制备携带有变形链球菌表面蛋 ?嗣搴自热科学暮盘崭助项目(392?720号) I乍者单位?(563003)?义医学院口腔摹(观为华西医科大学 口睦压学豌博士研究生) ?'|3OO70)期北医科太学口腔医学院} @(650~$2)昆明医学院附一院口腔内科. 白抗原PAc编码基因的重组乳链球菌(recom binantStreptococcusLactis)HL107(湖北医科 大学口腔医学院中心实验室提供)活化鉴定后 接种于含5~-g/ml红霉素的LM17液体培养基 中,30?培养48h.离心洗涤(重复三次)后将菌 细胞悬浮于无菌生理盐水中.比浊法确定其 OD..一1.o0制备成浓度为8x10.菌落形成单 位/mlCFU/m1)菌悬液,4?保存,备用. 2免疫动物于日本长耳白兔(湖北医学 科学院实验动物中心提供)饮水中每日加入 20ml重组乳链球菌HL107菌悬液,采集免疫前 唾液和免疫后3—4周时唾液,离心,取上清.4C 保存,备检 3粘附抑制实验 3.1变形链球菌lngbritt(血清C型),茸 毛链球菌6715(血清g型)菌悬藏的制备:活化 鉴定变形链球菌Ingbritt和茸毛链球菌6715 (湖北医科大学口腔医学院中心实验室提供)后 接种于脑心浸液培养基中,同时加入.H一胸腺 嘧啶,至终浓度lO/~ci/ml,经80N:.10CO, l0H.,混合37?培养18h后KCI缓冲液(1m . 京口腔医学1997年第5卷第4期 mol/LK2HPO_一KHzPO.缓冲体系,pH7.2.内 含50mmol/LKCL,lmmol/LCaCl2,lmmol/L MgCI)洗菌,离心,用0.5BSA—KCI缓冲液 稀释至2×10CFU/ml(OD一1.5). 3.2收集正常人全唾液:选择一名无龋成 人,收集咀嚼石蜡刺激的全唾液于放置在冰块 上的无菌试管中,离心(8000r/rain×l5rain, 4C),取上清,加热至6o?,30min,加入NaN 至终浓度0.04. 3.3SHA的制备:用精密电子天平称取 羟基磷灰石微玮,10rag/伤,置于1.5mlEppen— dorf管中,每管加入200~1正常人全唾液包被 羟基磷灰石形成获得性膜.温育2h后,KCI 缓冲液洗涤,加入3O0B1o.5BSA—KC1缓冲 液封闭未完全包被的区域,37?温育lh. 3.4加样和测取待测样品中H每分钟释 放p粒子的次数(cpm):分别加入免疫和未免 疫唾液(1OOtB/管,一式六份)和H标记的变形 链球菌Ingbritt或茸毛链球菌6715菌悬液 (100~1/管),温育2h,离心,吸干,将取出的羟基 磷灰石放入装有闪烁液的测试瓶中,充分混匀 后在TRICARB一2000A液闪计数器(美国 Packard公司)测取各管cpm值.取100~1浓度 为2×10'cFu/m1菌悬液用KCI缓冲液稀释至 1000~1,取此稀释的菌悬液(100~1/瓶,一式六 份)放入闪烁瓶中,测其cpm,并计算单个菌细 胞的cpm值. 4统计学处理用两样本均数问比较的 t检验免疫唾液和未免疫唾液抗PAc抗体 对细菌粘附的影响. 结果 1单个菌体细胞的cpm值经测试六管 只加H标记变形链球菌Ingbritt菌细胞的样 品,其cpm均值为21744-436.06.每个菌体细 胞的cpm值则为1.087+0.22×10,,1~o.867 ? 149? ,1.3O7×10 2粘附抑制作用测取各组样品的cpm 值,计算出均数,并换算成粘附于10mgSHA的 细菌数.结果显示,变形链球菌Ingbritt在 SHA上的粘附数重组乳链球菌HL107免疫后 兔唾液组(2.1l土0.35×10)与未免疫组(4.26 土0.61×10)相比,具有高度显着性差异(P< 0.001),茸毛链球菌6715在SHA上的粘附数 免疫唾液组(O.84土0.28×10)和未免疫唾液 组(1.O4土0.39x10)相互闻无明显差异(P> 0.05).在免疫唾液组和未免疫唾液组中.变形 链球菌Ingbritt在SHA的粘附数明显高于茸 毛链球菌6715(P<O.01),见下页表1,2. 讨论 变形链球菌和茸毛链球菌是人类龋病的主 要致病菌.PAc是位于变形链球菌(血清C型) 胞壁菌毛的一种高分子糖蛋白.是其致病的重 要毒力因子之一.能直接介导变形链球菌粘附 于获得性膜上,是变形链球菌主要的粘结素.而 且,PAc与变形链球菌的疏水性密切相关,它 同唾液中的疏水蛋白成分形成疏水键而促进变 形链球菌在牙面的粘附.PAc在变链球菌族 (MutansStreptococcus)菌株中具有较大普遍 性,又被称之为抗原PI,I/I,SR.IF等.茸毛 链球菌产生的表面蛋白被命名为SpaA和 PAg,遗传学研究表明,它们具有广泛的同源 性[,. PAc具有高度免疫原性,经局部和/或全 身免疫,可刺激机体产生特异性的抗PAc抗 体.许多学者证实了抗PAc抗体的抗龋作用. CzerkinSy用PAc和霍乱毒素B亚单位一起 免疫动物,观察到免疫后动物口腔的菌斑数,菌 斑中变形链球菌计数及龋病的发生明显减少. Douglas等人的研究证实血清抗PAc抗体能 抑制变形链球菌在SHA表面的粘附.重组乳 ? 150? 衰1不同实验组pm值 北京口腔医学1997年第5卷第4期 免疫组2.ii士0.35084士028 来免疫组4.26士0.611.04士0.39 链球菌HL107是利用遗传工程手段构建的携 带有变形链球菌表面蛋白抗原PAc编码基因 的基因工程防龋疫苗,经胃肠道免疫后可诱到 机体产生明显的免疫应答,免疫3,4周后唾液 中特异性抗PAc抗体效价最高].本文采用 含高教价抗PAc抗体的兔唾液(即免疫后3,4 周时的唾液)进行的体外粘附抑制实验中变形 链球菌Ingbritt在SHA的粘附数明显减少,亦 说明抗PAc抗体具有抑制变形链球菌粘附的 作用. 由血清C型变形链球菌表面蛋白PAc诱 导机体产生的抗体可与多种血清型变链球菌发 生交叉反应.本研究中,抗PAc抗体仅抑制 血清C型变形链球菌Ingbritt在SHA上的粘 附,而对血清g型茸毛链球菌的粘附力没有影 响,免疫组和未免疫组变形链球菌Ingbritt在 SHA的粘附数均高于茸毛链球菌6715,可能与 不同血清型变链球菌表面蛋白与牙面粘附的机 制不同有关.许多学者的研究表明,变形链球菌 表面蛋白在获得性膜上的受体是大分子的粘蛋 白,富脯蛋白,淀粉酶等,而茸毛链球菌表面蛋 白主要与膜上的萄聚糖特异结合].Gibbons【8] 研究表明,变形链球菌在唾液获得性膜上的粘 附量显着大于茸毛链球菌,且唾液膜能促进变 形链球菌的粘附.而对茸毛链球菌没影响.当唾 液中加入萄糖基转移酶后形成获得性膜,在糖 或萄聚糖存在时.茸毛链球菌粘附数明显增加, 而对变形链球菌无影响.本研究是用全唾液包 被羟基磷灰石,未加入其他成分,没有观察到抗 PAc抗体对茸毛链球菌粘附的抑制作用可能 与此有关. 参考文献 lkogaT,OkahashiN,TakahashiJ,eta1.Surfacehy- drophobleity,adherenceandagregationofeel[sllr- faceproteinofstreptococcusmutansserotypeC. Infect]mmun,1990;58(1):289 2凌均启.樊明文.变形链球菌Pac基因在乳链球菌 中的表达中华口腔医学杂志,1996t31(4):241 3刘建国.樊明文.边专等.基因重组乳链球菌口服免 疫孕兔的实验研究.口腔医学纵横.1996I12(4): 195 4Vacca—SmithAM.VanWayckhuyseBC.Tabak LA,eta1.TheeffectofmilkandcaseJnproteins ontheadherenceofstreptococcusillutanstosati— vacoatedhyaroxyapatite.ArchOralBio[,1994'39 (12):1063 5詹玲,刘天佳.岳抡龄.变形链球菌对牙面粘附机理 的研究进展牙体牙髓牙周病学杂志.1995;5(4): 240 6CzerkinskyC,RussellMW,LyckeN,eta1.Oral adiministrationofaStreptococc~[antigencoupled (下转第169页) 恕眚谚,2前丢 北京口腔医学1997年第5卷第4期 b,/J钛镍固定矫正器在矫治前牙反骀中的应用 /郎东方 7 前牙反碚是正畸工作中最为常见的一种错类颌向牵引,安氏I类错碚可不作牵引.若上下 黯畸形,在牙牙台畸形中发病率较高.前牙反黯的前牙拥挤可减数或减径,在排齐上下前牙的同 矫治具有重要的生理和美学意义.笔者认为使时作三类颁问牵引.皮圈24小时使用,3—4天 用TN固定矫正器矫治前牙反碚,在缩短疗程更换一次,3—4周复诊一次.每次复诊清洁牙 和提高疗效上临床效果最为显着.它是高效易面,调整唇弓,打开上颌弓簧0.5—1.0ram,使 行的矫正方法.本文就使用T—N固定矫正器矫结扎后的上前牙有往前开展之感一般复诊 治18例前牙反黯的临床经验如下;2—4次可解除反胎.若覆碚覆盖较浅可作反向 1临床资料与方法:唇弓.达到正常覆碚,覆盖后保持3—6个月左 1.1一般资料:右. 前牙反黯18例,其中男性10倒,女性82结果; 例一年龄最小8岁,最大20岁,平均年龄13岁18例前牙反胎患者,矫治完成最短1个 反胎牙数;2,3颗上前牙反黯者5倒,3—4颗月,最长5个月,平均3个月,后牙咬殆基本中 上前牙反骀者6例,5—6颗上前牙反暗者7性,随访观察矫治效果稳定,无一复发者. 例.3讨论; 1.2材料; TiNi弓丝(钛镍弓形丝),双园管托槽,带 环或颊面管及釉质粘合剂,附件;弹力圈. 1.3方法: 1.3.1按常规取模,制作带环,并在 带环侧焊0.6ram的颊面管,选择弯制与牙弓 弧度一致的上下唇弓各一根,制作弓簧u曲 (曲高5,6mm).U曲的远中紧靠第一磨牙颊 面管,近中与唇弓焊固. 1?3?2常规戴入616带环(术前先分牙), 粘贴碧笺托槽,托槽位置,暗—离切缘 4mm,其余均为3.5ram.且托槽中央与切缀平 行.弓丝纳入托槽后用0.25ram.不锈钢结扎丝 固定结扎,用200--300g力的橡皮圈双侧作三 扦单位:(2613oo)山东省昌邑市人民医院 3.IT—N矫正器特点;它充分发挥了钛 镇合金丝的高弹性和形状记忆特性,使矫治力 柔和准确和持久,它对开展上前牙,快速排齐拥 挤错位牙和打开咬合有独到之处.这是T—N矫 正法的最突出的特点.因此,应用T—N矫正法, 一 般只用1,2根弓丝就能达到矫正的目的.根 据临床统计,对反昭等矫正可缩短疗程50. 3.2T—N矫正器原理:因钛镇合金丝具 有以上特性,所以产生的矫治力柔和而且持续. 正常人多有息止顾间隙2,4mm,一天之内,只 有咀嚼和说话的短暂时间,牙齿处于咬梏状态, 而大部分时间处于息止黯位,具有超弹性的T— N弓丝利用这一息止黯位,产生"跳咬梏"的原 理,解除反胎. 3.3T—N矫正器是无昭垫矫正器,故不 会像碚垫式活动矫正器,而产生后牙压低等现 象.前牙反胎一旦解除,不易复发.作三类牵引 杈一