左卡尼汀对脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制研究

左卡尼汀对脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制研究 左卡尼汀对脑缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制研究 【摘要】 目的:观察左卡尼汀对脑缺血再灌注损伤的保护作用，探 讨其作用机制。:健康雄性Wistar大鼠40只，随机分成4组: 假手术组、生理盐水对照组、左卡尼汀100 mg/kg治疗组及左卡尼汀 200 mg/kg治疗组，每组10只。采用线栓法制备大脑中动脉缺血再 灌注模型，缺血2 h，再灌注24 h，观察左卡尼汀对脑组织丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响，HE染色观察大鼠脑组织 的病理改变。结果:左卡尼汀可明显减少MDA的含量，升高SOD活性， 同生理盐水对照组相比，P0.01。结论:左卡尼汀对脑缺血再灌注损 伤有保护作用，与提高脑组织中抗氧化酶活性、抑制氧自由基产生及 脑缺血再灌注;丙二醛;脂质过氧化反应有关。 【关键词】 左卡尼汀; 超氧化物歧化酶 Abstract Objective:To investigate the protective effects of levocarnitine on cerebral ischemiareperfusion(I/R)injury in rats and analyze the mechanism of action of levocarnitine in preventing and treating ischemic cerebrovascular disease.Methods:Forty healthy male wistar rats were randomly allocated into four groups:sham operation group，salinecontroled group，treated with 100 mg/kg of levocarnitine group and treated with 200 mg/kg of levocarnitine group，each of ten rats.The models of the focal cerebral I/R rats were made by the middle cerebral artery occlusion(MCAO)except shamoperation group.After ischemia for 2 h and reperfusion for 24 h，malondialdehyde(MDA)levels and superoxide dismutase(SOD) activity were measured in the cerebral tissues.The pathological feature of cerebral tissue was detected by HE staining.Results:Levocarnitine injection significantly suppressed MDA levels，prevented reduction of SOD activity in comparison with the salinecontroled group(P0.01).Conclusion:The results demonstrated that levocarnitine has a potent neuroprotective effect against cerebral I/R induced injury to enhance the activity of the antioxidant system and decrease the incidence of free radical induced lipid peroxidation in rat brain. Key words levocarnitine;cerebral ischemia reperfusion;malondialdehyde;superoxide dismutase 本实验通过观察左卡尼汀对大鼠脑缺血再灌注脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平的影响，探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能的作用机制，为临床应用左卡尼汀治疗脑梗死提供理论依据。 1 资料与方法 1.1 动物与试剂 选健康雄性Wistar大鼠(山西医科大学生理实验室提供)40只，鼠龄3,4个月，体重200,250 g。注射用左卡尼汀(珠海亿邦制药有限公司，批号:0102);SOD和MDA试剂盒(南京建成生物研究所);普通试剂由山西医科大学实验中心提供。 1.2 方法 1.2.1 实验分组及给药方法 40只Wistar大鼠，随机分为假手术组(A组)、对照组(B组)、左卡尼汀100 mg/kg治疗组(C组)、左卡尼汀200 mg/kg治疗组(D组)，每组10只。B组制作模型前30 min予生理盐水1 mL腹腔注射;C组、D组制作模型前30 min分别以100 mg/kg、200 mg/kg左卡尼汀腹腔注射。 1.2.2 大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注模型制作 用改良Longa法[1]建立大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型。将大鼠用10%水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉，颈正中右旁开0.5,1 cm切口，钝性分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，结扎颈外动脉、颈总动脉近心端，在颈总动脉距离分岔口大约5 cm处用眼科剪剪开一小口，将直径0.236 mm的进口鱼线插入，以分岔口处开始测量距离，插入1.8,2 cm后固定鱼线，缝合。缺血2 h后将线栓拉出1 cm左右即可，形成再灌注。其中假手术组插入1.0 cm鱼线，其余步骤同实验组。神经功能缺陷按照Longa等[1]的5级4分法标准。 1.2.3 脑组织病理切片的制备及MDA和SOD含量的测定 各组大鼠缺血2 h再灌注24 h后行神经功能评分后颈椎脱臼处死，在冰盘上快速取脑，置0,4?生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，各组随机取2只大鼠右侧脑组织迅速固定，石蜡包埋后，在海马部位做矢状切片，厚约5 μm，HE染色，观察组织学变化。剩余右侧脑组织加入9倍量的0,4?生 理盐水，在冰水浴中用玻璃匀浆器制成10%的脑匀浆，3 000 r/min离心15 min，取上清液检测MDA和SOD。严格按试剂盒说明步骤要求操作，计算出MDA和SOD含量。 1.2.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件包，数据以?s示，采用单因素方差进行统计学处理。P0.05为差异有统计学意义。