白色假丝酵母性乳房炎的病原分离鉴定及治疗

白色假丝酵母性乳房炎的病原分离鉴定及治疗 推荐:购买《养牛技术》VCD光盘，请到365农业网VCD商城 (1.山东农业大学动科院，山东泰安271018;2.山东省实验动物中心，山东济南250002)) 摘要:对使用中药和多种常规抗生素治疗均无效的患乳房炎奶牛，无菌采集奶样进行病原学鉴定，病原菌为白色假丝酵母菌;药敏试验发现酮康唑敏感，用敏感药物酮康唑对患牛治疗后，症状明显减轻，产奶量回升。 关键词:白色假丝酵母菌;酮康唑;治疗 白色假丝酵母菌又名白色念珠菌，是一种人类和动物共患的深部条件致病性真菌[1]。抗生素、皮质激素和免疫抑制剂等药物的广泛使用，促进了致病真菌在动物体内的生长繁殖机会,因而导致近年来我国动物真菌病的发病率急剧升高 [2]。 泰安地区某个体奶牛场患乳房炎的2头奶牛患乳房炎2个多月的所有乳区，5胎牛的两个乳区均表现为有散布的硬块，有红、热、痛的表现，产奶量已降至每天5 kg,15 kg。在患乳房炎期间曾用青霉素、链霉素、氧氟沙星、甲磺酸培沙星、先锋9号、氨苄青霉素治疗，均无效。后使用中药制剂(乳房炎消肿散、消炎散)及静脉注射203，治疗一段时间后，乳房变软，红、热现象消失，但产奶量仍很低，一直未痊愈，并反复发作。 对患病奶牛乳样进行了病原学，经鉴定为白色假丝酵母菌。用敏感药物治疗后，病情明显减轻。 1 材料 1.1培养基与试剂 TATC培养基[3]、玉米土温培养基、沙堡罗氏培养基、普通营养琼脂、葡萄糖蛋白胨水、营养肉汤、吖啶橙、TTC。 1.2标准药敏纸片 购自杭州天和微生物试剂有限公司，盐酸多西环素、酮康唑、宫乳康、乳炎必治药敏纸片按常规方法自制。 2 方法 2.1病原学鉴定 2.1.1病原菌分离培养将乳样接于普通培养基，沙堡罗氏培养基，37 ?培养48 h，挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检。 2.1.2病原菌鉴别试验挑取纯化培养物接种于玉米吐温80培养基，葡萄糖蛋白胨水、营养肉汤。TCTA培养基显色试验，参照文献[3]中方法。牙管试验，参照文献[4]中的方法。荧光染色，参照文献[5]中的方法。厚壁孢子试验，用小培养法。 2.2药敏试验与治疗 按照Kirby-Bauer琼脂扩散法操作[6] ,将标准药敏纸片和自制药敏纸片无菌操作贴于涂有病原菌的普通营养琼脂培养基上。选择敏感药乳房内灌注，治疗一个疗程后，根据病牛的表现情况再增加治疗疗程。 3结果 3.1培养特性 普通培养基上生长良好，培养48 h后菌落为乳白色，圆形凸起，表面光滑湿润。继续培养2 d后菌落变大，仍为乳白色。沙堡罗氏培养基上培养24 h后已长出，但菌落较小，继续培养3 d后，菌落变大为乳白色圆形菌落，表面光滑。玉米吐温80培养基培养基上，为乳白色圆形隆起，表面光滑。革兰氏染色镜检，可见卵圆形、瓜子形的革兰氏阳性菌。 3.2鉴别试验 在10 mL/L吐温玉米琼脂上镜检可见到假菌丝、厚壁孢子。葡萄糖蛋白胨水、营养肉汤静置培养均无菌膜生长，菌体乳白色、沉于管底，上层液体澄清。芽管试验，可见到明显的牙管。TCTA培养基上培养24 h出现红色,培养48 h红色加深,镜检见到假菌丝，厚壁孢子。吖啶橙染色，荧光显微镜下可见黄绿色菌体。 3.3药敏试验 洁霉素、麦迪霉素、卡那霉素、丁氨卡那霉素、四环素、妥布霉素、庆大霉素、新霉素、红霉素、羧苄青霉素、万古霉素、氟哌酸、头孢哌酮、头孢呋新、呋喃妥因、宫乳康、乳炎必治、多黏菌素B、氯林可霉素等均无抑菌作用;盐酸多西环素为中度敏感(抑菌直径18 mm);酮康唑为高度敏感(抑菌直径30 mm)。 3.4治疗结果 使用敏感药酮康唑乳房内注射进行治疗后，症状明显减轻，精神状况明显好转，日产奶量回升至15 kg,25 kg,但仍未回复到患乳房炎前的日产奶量。 4 讨论 4.1病原学鉴定表明该乳房炎是由白色假丝酵母菌引起的或者是最初由细菌感染引发的乳房炎，经抗生素治疗后，细菌被杀灭或被抑制，而抗生素对酵母菌性乳房炎病原菌无效，畜主连续使用抗生素或联合使用抗生素更有利于酵母菌的感染。 4.22头奶牛均分离到了相同的病原菌，其原因可能是医源性引起的。畜主在进行乳房炎治疗时，注射器和针头不能保证无菌，酵母样真菌通过污染的灌注导管，注射器进入乳房定植、增值。因此，酵母菌性乳房炎几乎总是继发于畜主参与治疗的急性细菌性乳房炎。多次剂量的乳房灌注，也能增加真菌进入乳房的机会[7]。 4.3乳房炎常造成巨大的经济损失，特别是酵母菌性乳房炎，目前还没有很好的治疗。因此，快速、准确的确定病原，对于减少经济损失、指导临床的治疗具有重要意义。不确定病原，盲目使用一般抗生素，往往贻误治疗时机，花费大量的药费却收不到良好的治疗效果。通过药敏试验、牙管试验、鉴别培养基试验、荧光镜检试验，快速、准确的鉴定分离菌株为白色念珠菌。避免了使用糖发酵试验、糖同化试验等费时费力的传统方法。 4.4现在国内外主要使用抗生素进行乳房炎的治疗[8]，而大量抗生素的使用，特别是青霉素、链霉素、四环素、金霉素、土霉素会增加酵母菌乳房炎。因此，在使用抗生素进行治疗时，还要考虑到是否有真菌感染引起，及早确定病原，使用抗真菌药物进行治疗，以免造成更大的损失。 4.5目前，我国的奶牛养殖业主要是小规模养殖，以农户散养的居多。因此提高基层兽医人员的专业素质、奶牛养殖户的环境卫生、严格消毒意识，遵守适当的挤奶程序，以及进行乳头药浴等是避免酵母菌性乳房炎发生的前提。 中华小吃论坛www.ku162.com 学习中国所有美味小吃技术就上www.ku162.com