HPLC法测定复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵的含量

HPLC法测定复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵的含量 HPLC法测定复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴 铵的含量 ? 168?黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL24No.22011 HPLC法测定复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵的含量 刘利群,白政忠,姜连阁,金涛 1.黑龙江省食品药品检验检测所(哈尔滨150001);2.黑龙江大学(哈尔滨150086) 摘要目的:建立HPI.E法测定复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵的含量.方法:采用cIs 柱(4.6ram×150ram, 5p皿);以乙腈:0.07mol/l醋酸铵溶液(含三乙胺l%,冰醋酸调pH至5.0)(70:30)为流 动相;检测波长为262nm,流 速:1.Oml?rain,.结果:复方牛磺酸中苯扎溴铵浓度在39.12t~/ml一782.4t~e,/ml范 围内,与峰面积呈良好线性(r =1.oooo).最小检出量约为3.9oe,/,,a,平均回收率为99.72%,RSD为D.75%.结论:本 法简便,快速,准确,灵敏度 高,重复性好,可用于复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵的含量测定. 关键词:}iPLC法;苯扎溴铵;含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—2882f2011)02—168—02 DeterminationoftheContentofBenzalkoniumBromide inCompoundTaurineEyeDropsbyHPLC LiuLiqun,etal 1.HeUongjiangProvincialInstituteForFood&DrugControl(Harbin150001) Abstract:Objective:ToestablishanHPLcmethodfordeterminationofthecontentofbenzalk oniumbromideincorn- poundtattrlneeyedrops.Methods:TheSymme~yCl8colunm(4.6mm×150ram,5肌)WaSused,1hemobilephaseconsisted ofacetonitrile-0.07moi?Lammoniumacetatesolution(1%triethylamineandregulatepHto 5.0byglacialaceticacid) (70:30).Thedetectionwavelengthwas262nmandflowratewas1.0mL?min 一.Results:11hecalibrationcurveofthe benzalkoniumbromidewaslinearbetween39.12gtg/ml,782.4?ral-I(r=1.0000).ThedetectionlineWaS3.9p.g/ m1.TheaveragerecoveriesofthemethodWas99.72%andRSD0.75%.Conclusion:Thismet hodtodeterminethecontentof thebenzalkoniumbromidebyHPLCissimpleandaccurate. Keywords:HPLC:benzalkoniumbromide:contentdetermination 复方牛磺酸滴跟液收载于国家食品药品监督管理 局新药转正标准第42册第114页(WS1一(x一260)一 2003Z),质量标准中未对防腐剂苯扎溴铵的含量进行控制. 目前眼用制剂大多数为多剂量包装,为保证其在使用过程 中保持无菌,防止被微生物污染,制剂中添加了抑菌剂,但 使用的抑菌剂对眼部均有不同程度的刺激性或副作用"_2J, 本文就复方牛磺酸滴 为了更好的保证滴眼液的用药安全, 眼液中抑菌剂苯扎溴铵(BAB)进行了含量测定. 1仪器,试药及样品 岛津10AT高效液相色谱仪(色谱柱WatersC4.6mm ×150ram,5岬);苯扎溴铵对照品(中国药品生物制品检定 所批号);乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯.样品:自制三 批复方牛磺酸滴眼液(批号:090401,090402,090403). 2.1色谱条件照高效液相色谱法(中国药典2005年版二 部附录?A)测定. 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;乙腈:o.07mol/l乙酸铵溶液(含三乙胺l%,冰醋 酸调pH至5.O)(70:30)为流动相;检测波长为262nm,流 速:1.Oral?min一.测定法取苯扎溴铵对照品适量,精密称 定,加水溶解并定量稀释制成每Iml中含苯扎溴铵0.2mg 的溶液,作为对照品溶液;另取本品作为供试品溶液,分别 取20注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积计算. 2.2检测波长的选择 苯扎溴铵对照品溶液,经DAD检测器在190呦一 400nm波长范围内扫描,结果苯扎溴铵在219II?l及263nm 波长处有最大吸收峰,考虑其他组分的干扰,检测波长定为 262nm. 2.3专属性实验 按处方量配制牛磺酸,氨基已酸,门冬氨酸,马来酸氯 苯那敏及辅料的阴性对照溶液,取2O注人液相色谱仪,记 通讯作者:金涛.硕士生导师,研究方向:生物制药. 黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL24No.22011?l69? 录色谱图,可知在此色谱条件下不影响苯扎溴铵的含量测 定. 2.4复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量测定方法线性关 系 精密称取苯扎溴铵约相当于烃铵盐80mg,置lOOml量 瓶中,加水溶解并稀释到刻度,摇匀,再分别精密量取此溶 液0.5ml,1.25ml,2.5ml,5ml,置不同的10ml量瓶中,稀释到 刻度,按上述含量测定方法试验,测定结果见表1. 表1复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量测定线性关系 编号12345 浓度C(mCm1) 峰面积(V?S) 线性方程 相关系数 39.1297.8O195.6391.2782.4 192754906996762189724379662 S=483.5C+1236(s:面积?S;C:浓度/?d) r=1.0 图1复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量测定线性与范围 上述结果表明,复方牛磺酸中苯扎溴铵浓度在 39.121xg/Il1l一782.41.Lg/ml范围内,与峰面积呈良好线性. 2.5最低定量限 按上述含量测定法,在液相色谱稳定操作的衰减条件 下,不断稀释三组分浓度,直至所得信号强度约为基线噪音 水平的十倍.求出最低定量限,苯扎溴铵最低定量限结果 为3.91xg/ml. 2.6复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量测定方法准确度 试验 精密称取苯扎溴铵约相当于烃铵盐16mg,20mg,24mg. 置于100ml容量瓶中,用按处方比例用阴性对照溶液作为溶 剂,分别配制80%样品,100%样和120%样品的溶液,再按 上述含量测定方法测定苯扎溴铵的含量,测定结果见表2. 表2复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量 测定方法准确度试验结果 九次测定结果,平均回收率为 由表2可知,三个浓度, 99.72%,RSD为0.75%.本方法回收率平行,准确度 好. 2.7复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量测定方法精密度 试验(重复性) 取线性试验中溶液4,,按上述含量测定方法测定,重复 进样6次,记录色谱图,测定结果见表3.结果表明测定苯 扎溴铵含量的方法精密度良好. 表3复方牛磺酸滴眼液中苯扎溴铵含量 测定方法精密度试验结果 2.8复方牛磺酸滴眼液样品中苯扎溴铵的含量测定 用上述确定的方法对三批自制样品进行苯扎溴铵的含 量测定,实验结果如下: 表4三批自制样品中苯扎溴铵含量测定结果 2.9苯扎溴铵的含量限度 参照中国药典2005年版二部苯扎溴铵项下以及苯扎溴 铵溶液项下的相关限度规定,考虑到苯扎溴铵在复方牛磺 酸滴眼液处方中浓度较低,为0.2mg/ml,将其含量限度暂定 为标示量的8O.O%一120.0%,并将苯扎溴铵的含量测定列 入标准检查项. 3方法的确定 照高效液相色谱法(附录VD)测定. 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;乙腈:0.07mol/l乙酸铵溶液(含三乙胺1%,冰醋 酸调pH至5.0)(70:30)为流动相;检测波长为262nm,流 速:1.0ml?min一1.拖尾因子以苯扎溴铵峰计应小于1.5. 测定法分别精密量取本品20注人液相色谱仪,记录 色谱图;另精密称取苯扎溴铵对照品适量,加水溶解并定量 稀释制成每1rnl中含苯扎溴铵0.2mg的溶液,作为对照品 溶液;同法测定.供试品处方中如含苯扎溴铵,按外标法以 峰面积计算,应为标示量的80.O%一120.0%. 4讨论 目前眼用制剂中使用的抑菌剂对眼部均有不同程度的 刺激性或副作用,本文就复方牛磺酸滴眼液中抑菌剂苯扎 溴铵(BAB)进行了含量测定,建议将该含量测定标准列入 品种标准的有关物质项下,用以控制眼用制剂抑菌剂的使 用量,更好地保证滴眼液的用药安全. 参考文献 [1]复方牛磺酸滴眼液[S].国家药品标准WSI一(X一260)一 2003Z.国家食品药品监督管理局.新药转正标准[S],(42); 114. [2]国家药典委员会编.苯扎溴铵溶液[S].中国药典,2000.361 , 362. 收稿日期:2011一O1—2O