高效液相色谱法测定麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中甘草酸的含量 .doc

高效液相色谱法测定麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中甘草酸的含量 .doc 高效液相色谱法测定麻杏石甘汤传统汤剂 及颗粒汤剂中甘草酸的含量 作者:靳凤云，梁光义，贺祝英，武孔云，李星，冯华【摘要】 目的 测定麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中甘草酸含量。方法采用 高效液相色谱(HPLC)法测定麻杏石甘汤传统汤剂与颗粒汤剂液中 甘草酸含量，选Diamonisl C18柱，流动相为甲醇-0.2 mol/L醋酸胺 溶液-冰醋酸(67?33?1)，波长为250 nm。结果麻杏石甘汤 传统汤剂中甘草酸含量为0.9560%，颗粒汤剂中甘草酸含量为 0.7291%。结论 传统汤剂的甘草酸含量显著地高于颗粒汤剂中甘草 酸的含量 【关键词】 甘草酸; 麻杏石甘汤; 高效液相色谱法 AbstractObjective To determine the contents of glycyrrhizic acid in traditional and granular decoctions of Maxingshigan Decoction.MethodsThe determination n and a mobile phase of methanol- ammonium acetate-glacial acetic acid(67?33?1) at 250nm.ResultsThe content of glycyrrhizic acid in traditional decoction of Maxingshigan Decoction g?g-1 and 0.7291 mg?g-1 in granular one.ConclusionThe content of glycyrrhizic acid in traditional decoction of Maxingshigan Decoction is obviously higher than that in granular one. Key eniaca L.、石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏Gypsum Fibrosum、甲醇为色 谱纯、醋酸胺、冰醋酸为纯、水为纯净水。 2 麻杏石甘汤 汤剂制备 2.1 传统汤剂 称取药材麻黄6 g，苦杏仁9 g，甘 草6 g和石膏24 g加10倍量水常温浸30 min，煎煮保持微沸30 min，趁热过滤，滤渣加7倍量水煎煮保持微沸20 min，趁热滤过， 合并2次滤液，药渣水洗3次，与滤液合并，减压浓缩，冷却后定 溶至50 ml，即得传统汤剂。 2(2 颗粒汤剂 称取以上麻杏 石甘汤处方量的各单味颗粒，麻黄0.711 g，苦杏仁0.969 g，炙甘草 2.096 g和石膏0.973 g，用沸水冲泡，摇匀，使溶解，冷却，以水定 溶至50 ml，摇匀，即得颗粒汤剂。 3 方法与结果 3.1 色谱 条件 分析柱为Diamonisl C18柱 5 μm(250 mm×4.6 mm) ;流 动相为甲醇-0.2 mol/L醋酸胺溶液-冰醋酸(67?33?1);流速 1ml/min;检测波长为250 nm;柱温25?;进样量为5 μl，在上述 条件下，甘草酸与杂质峰可完全分离，空白样品无干扰，见图1。 3.2 对照品溶液的制备 取甘草酸单铵盐对照品10 mg，精密称 定，置50 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 (每毫升甘草酸单铵盐对照品0.2392 mg，折合甘草酸为0.221 mg)。 3.3 供试品溶液的制备 分别精密吸取麻黄石甘汤传 统汤剂和颗粒汤剂试液各2 ml，置25 ml容量瓶中，加流动相约20 ml，超声处理(功率250 in，取出，放冷，加流动相定容至刻度， 摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，分别得传统汤剂、颗粒汤剂供试液。 分别按传统汤剂的药材量和颗粒汤剂的单味中药精制颗粒量及其制备方法，制备缺炙甘草的传统汤剂阴性对照液和颗粒汤剂阴性对照液。3.4 曲线的绘制 分别精密吸取甘草酸标准溶液，用流动相稀释配制浓度分别为0.044 2，0.088 2，0.132 4，0.176 2，0.221 1，0.266 4 mg?ml-1的甘草酸系列对照品溶液。按上述色谱条件依次测定，以峰面积积分值(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程:A= 710.033C +2.967，r= 0.999 9，甘草酸单铵盐在0.442,2.664 μg间浓度与峰面积的线性关系良好。 3.5 精密度实验 精密吸取同一对照品溶液10 μl，重复进样5次，试验结果的RSD(%)为0.20%，结果明试验结果的精密度良好。 3.6 稳定性实验 精密吸取供试液各5μl，每2 h测定1次，各测5次，颗粒汤剂与传统汤剂的实验结果的RSD(%)分别为1.32%和0.79%，结果表明供试品在8 h内稳定。 3.7 重复性实验 取同一供试品按上述方法平行测定5次，颗粒汤剂与传统汤剂的实验结果的RSD(%)分别为1.31%和0.79%，结果表明实验结果的重复性良好。 3.8 加样回收实验 取同一供试品及制备的单味浓缩颗粒各9份，按高、中、低剂量，取适量样品，加入一定量的对照品，按上述条件进行制备、处理，并按色谱条件项下进行测定，计算回收率，结果见表1,2。表1 甘草酸加样回收(传统汤剂)测定结果(略)表2 甘草酸加样回收(颗粒汤剂)测定结果(略) 结果表明，本法具有较好的加样回收率。 3.9 样品含量测定 精密吸取颗粒汤剂和传统汤剂各10μl进样，用外标法计算传统汤剂和颗粒汤剂中甘草酸的含量，每付麻杏石甘汤中甘草酸的含量以3次测得的平均值计，处理结果见表3。表3 各汤剂中甘草酸的含量(略) 对传统汤剂和颗粒汤剂中甘草酸的3次测得的结果进行Fisher小样本非参数随机化测验〔4〕，结果表面传统汤剂和颗粒汤剂中甘草酸含量之间平均数差异的显著水平P,0.050 000，达到显著水平(P?0.05)，说明传统汤剂和颗粒汤剂中甘草酸的含量存在显著差异。 4 讨论 参照2005版《中国药典》，采用HPLC法测定以传统方法制备的麻杏石甘汤剂和以单味中药精制颗粒制备的麻杏石甘汤剂中甘草酸的含量。由表2可知，麻杏石甘汤传统汤剂中甘草酸含量明显高于颗粒汤剂中的甘草酸含量。引起含量差异的原因可能是由于传统汤剂中多种药材成分共存而产生的助溶作用引起的。其药效学上的差异有待进一步的研究。【