【doc】红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫作用的研究

【doc】红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫作用的研究 红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外 抗弓形虫作用的研究 2004正右江民族医学院第2期 P53在正常胃粘膜,胃粘膜非典型增生和胃癌中的 达率分别为0%,16.67%和51.43%,呈逐渐升高趋 势.在胃癌中的阳性表达率明显高于正常胃粘膜和非 典型增生,差异有高度显着性(P均<0.01).表明 P53蛋白的阳性表达率随肿瘤从良性,癌前病变到恶 性的发展而递增.吕有勇等J研究发现149例胃癌 中,P53基因点的突变率为58.7%,高于正常及非典 型增生组织,也表明P53基因突变与胃粘膜病变的进 一 步恶化有关.几家的观点一致,提示P53可作为判 断癌前病变恶变倾向的一项敏感的客观指标,成为区 分良恶性胃粘膜病变的一个显着的标志物,它的检测 对胃癌恶性度的判定,估计预后和进一步治疗提供有 效的依据. 国外有学者报道7J提示:P53基因的改变与胃癌 淋巴结转移密切相关,与患者的预后显着相关;李雪莉 等J研究认为P53在中,晚期胃癌,低分化胃癌,伴淋 巴结转移的胃癌中的异常表达(分别为57%,76%, 62%)明显高于其在早期胃癌,高分化胃癌及不伴淋巴 结转移的胃癌中的表达率(分别为11%,40%,20%), P<0.05.本研究结果显示P53蛋白在低分化腺癌 的阳性率显着高于高,中分化腺癌(P<0.05);浸润 至浆膜层者高于未浸润至浆膜层者(P<0.05);伴有 淋巴结转移者高于不伴有淋巴结转移者(P<0.05). 此结果与文献【8]报道相一致.因此,检测P53在评 估胃癌的发生发展及判断淋巴转移趋势和估计预后均 有重要意义. 参考文献: [1]姚伟明,王桂华.P53蛋白与增殖细胞核抗原在胃癌中的 表达及其临床意义[J],实用肿瘤学杂志,2003,17(1):50 — 52. [2]朱志兵,薛英威,庞达.P53在胃癌分子生物学研究中的 进展[J].实用肿瘤学杂志,2001,15(4):317. [3]罗显峰,刘洋,姜杰,等.P53在胃粘膜上皮不典型增生, 胃癌中的表达及决义[J].实用肿瘤学杂志,2001,15(3): 175—176. [4]陈志南,刘民培.抗体分子与肿瘤[M].北京:人民军医出 版社,2002.373. 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[8]李雪莉.P53.ras.m2.在原发性胃癌中的联合表达研究 [J].中国肿瘤临床,1997,24(9):645—647. 收稿日期:2003—11—24;修订日期:2003—12—29 红霉素,阿奇霉素,磺胺嘧啶,大蒜素 体外抗弓形虫作用的研究 许丽芳,杨秋林,曾桥,张愉快,肖建华,梁瑜,王可耕,刘传爱,伍和平,刘彦 (1.南华大学诊断学教研室,湖南衡阳421001; 2.南华大学寄生虫学教研室,湖南衡阳421001) 摘要:目的比较阿奇霉素,红霉素,磺胺嘧啶,大蒜素体外抗弓形虫的效果.方法用弓形虫RH株速殖子感染培 养的巨噬细胞,每一种药物根据预实验设立2至3个浓度,分别在速殖子侵入细胞前和侵入细胞后用不同浓度的药物处 理,每隔lh在倒置显微镜下观察细胞及弓形虫的形态及生长情况,9d后取出盖玻片,染色透明后,镜下观察.再将培养 液及培养细胞注入鼠腹腔,观察小鼠的发病情况.结果阿奇霉素的浓度在2O时具有抑制虫体生长的作用,> 40旭时对巨噬细胞有明显的毒性.红霉素的浓度在100~g,150t~g钿l时可抑制弓形虫的生长与繁殖,但不能完 全杀死虫体,形成假包囊.将假包囊及培养液接种小鼠腹腔6d后小鼠发病死亡,解剖小鼠后,可见大量的虫体.没有观 察到100~g,200~g的磺胺嘧啶及20,40钿l的大蒜素有抑制弓形虫生长的作用.结论阿奇霉素具有明 显杀灭速殖子的作用.低浓度的红霉素有利于包囊形成.磺胺嘧啶,大蒜素体外无杀灭速殖子的作用. 关键词:弓形虫;阿奇霉素;红霉素;磺胺嘧啶;大蒜素 中图分类号:R531.8;R978文献标识码:A文章编号:1001—58l7(2004)02—0157—04 — 157— 2004正右江民族医学院第2期 TheeffectsofAzithromycin,Erythromycin,Sulfadiazine andAllitrideonToxoplasmagondiiinvitro ?Li—fang1,YANGQiu—lin2,ZENGQiao2,ZHANGYu,quai,XIAOJian—hua, LIANGYu2,WANGKe—geng2, LIUChuan—ai,WUHe—ping2, LIUYan2 (1.DepartmentofDiagnostics,NanhuaUniversity,Hengyang,Hunan421001,P.R.China; 2.DepartmentofParasitology,NanhuaUniversity,Hengyang,Hunan421001,P.R.China) Abstract:ObjectiveToassesstheinvitroeffectsofAzithromycin,Erythromycin,SulfadiazineandAllitride onToxoplasmagondii.MethodsTheculturesofmousemacrophageswerepreparedonglasscoverslipsandgrown toconfluence.Thenconfluentmonolayerswereinfectedwithparasites.Antimicrobialagentsat2,3concentrations wereaddedt0thedishesatthesametimewhentachyzoiteswereaddedintothedishesoraftertachyzoitesinvadedin— tothemacrophages.Cultureswereexaminedatfrequentintervalswithaninvertedmicroscopetodocumenttheinfec- tionofcellsandtheformationofpseudocysts.Theglasscoverslipsweretakenoutafter9houm,stainedwithGiemsa andexaminedmicroscopically.ResultsTheinhibitoryconcentrationwas20~g/mlforAzithromycin, Azithromycin(>40#g/m1)hadcytotoxieeffectonthehostcel1.At100#g/ml,150#g/mlErythromycinwerefound tohaveimportantinhibitoryeffectsonT.gondii.Butitisnotparasiticida1.At100~g/ml,200gg/mlSulfadiazine andat20~g/ml,40#g/mlAllitridecannotinhibitthegrowthoftheT.gondii.— Concl— usionAzithromycincanef— fectivelykilltachyzoites.LowconcentrationErythromycincanbenifittheformationofpseudocysts.Sulfadiazineand Allitridecannotkilltachyzoitesinvitro. Keywords:Toxoplasmagondii;Azithromycin;Erythromycin;Sulfadiazine;Allitride 目前,弓形虫病的传统治疗仍以乙胺嘧啶与磺胺 嘧啶合用为主,但该疗法的副作用大,停药后复发率 高,根治效果差.临床上对于控制弓形虫脑炎及免疫 缺陷患者的急性弓形虫病,还没有理想药物.近年有 学者用红霉素,阿奇霉素,大蒜素治疗弓形虫病L1j. 我们比较了阿奇霉素,红霉素,磺胺嘧啶,大蒜素体外 抗弓形虫的效果,现将结果如下. 1材料与方法 1.1弓形虫虫株及其速殖子的收集RH株由上海 第:二医科大学杨惠珍教授惠赠,经腹腔接种昆明小鼠, 2,3d后收集病鼠的腹水,纯化弓形虫速殖J,以含 1%,3%胎牛血清的DM培养基调整速殖子密度 为10,放置4C保存(不超过3d). 1.2鼠巨噬细胞的培养传代鼠巨噬细胞购自上海 细胞所,以含1O%小牛血清(杭州四季青公司)的 DMEM(Gibco)培养基培养,当细胞长满瓶底后,将培 养瓶在4?冰箱放置5,6min,再转置一20?冰箱放 置!min,用吸管吹下贴壁细胞,制备细胞悬液,将细胞 悬液加入内径为2.5cm的培养皿中(皿中放有一片 1~ITlI-n×18mm的盖玻片,将细胞悬液加在皿中的盖玻 片上),待巨噬细胞贴壁后(约lh),用吸管吸出未贴壁 的巨噬细胞,再加适量含10%小牛血清的DMEM培 养基,让细胞长满盖玻片后,吸去培养液,加入含1% 一 158一 , 3%胎牛血清的DMEM培养基【3j. 1.3药物及实验分组 1.3.1药物阿奇霉素(O.25g,海南省海灵制药厂生 产,批号:0301162)用生理盐水溶解配成0.125g/ml备 用.红霉素(0.25g/ml,大连美罗大制药厂生产,批号 20020802).用生理盐水溶解,配成0.125g/ml备用. 磺胺嘧啶(0.4mg/ml,湖南制药有限公司生产,批号 011211).大蒜素(40mg/'~4h2,湖北金龙药业有限公司 生产,批号20021001),用生理盐水溶解. 1.3.2实验分组实验分为阿奇霉素,红霉素,磺胺 嘧啶,大蒜素,感染组及阴性组,根据血药浓度及预实 验确定浓度,其中阿奇霉素组设立3个浓度:20#g/ ml,40#g/ml,80~g/ml.红霉素组设立2个浓度:100 #g/ml,150t~g/ml.磺胺嘧啶组设立2个浓度:lO0#g/ m1,200#g/ml.大蒜素组设立2个浓度:20#g/ml,40 /~g/ml.每一种药的每一个浓度培养4皿,其中2皿在 感染弓形虫的同时加入药,另2皿在弓形虫侵入巨噬 细胞后(约0.5-4h)再加入药.感染组为感染弓形虫 但不加药.阴性组为不感染弓形虫. 1.4体外实验方法l,0】当巨噬细胞长满盖玻片后, 每皿加入约3000个速殖子,其中2皿按实验设计在加 入速殖子的同时加入药物,另外2皿在速殖子侵入巨 噬细胞后再加入药物,每隔1--3h在倒置显微镜下观 2004正右江民族医学院第2期 察,并于3d后取出培养皿中的盖玻片,在Hank' 液中洗两次,每次30s,按文献l5J介绍的方法进行吉氏 染色,二甲苯透明后,镜下观察. 2结果 2.1在感染的同时加入药物的实验结果,见表1,4. 阿奇霉素组:20~g/ml,40~g/ml,80~g/ml的阿奇 霉素均有抑制弓形虫生长的作用,加药1h后,20~g/ ml的阿奇霉素对弓形虫及巨噬细胞的形态均无影响, 72h后,巨噬细胞基本未破裂,将培养基及巨噬细胞接 种小鼠腹腔,小鼠未发病.40~g/ml的阿奇霉素导致 弓形虫变圆,对巨噬细胞的形态无影响,72h后,巨噬 细胞没有破裂,未见弓形虫逸出,培养基及巨噬细胞接 种小鼠后,小鼠没有发病.加入80~g/ml阿奇霉素8h 后导致巨噬细胞的裂解,培养基中未见弓形虫,接种小 鼠腹腔后,小鼠没有发病. 红霉素组:100~g/ml的红霉素只能引起约5%的 虫体变圆,对巨噬细胞的形态无影响,24h后培养细胞 基本形成假包囊,其中约3%的假包囊破裂,释放出虫 体,接种小鼠腹腔后,小鼠发病死亡,150~g/ml的红霉 素处理72h后,只有少量体小的假包囊形成,接种小鼠 后,小鼠未发病. 磺胺嘧啶组,大蒜素组与感染对照组情况基本相 似,感染20h后,形成假包囊,2d后假包囊基本破裂. 表1在感染的同时加入阿奇霉素时阿奇霉素抗弓形虫作用的动态观察结果 T:弓形虫.M:巨噬细胞.P:假包囊 表3在感染的同时加入磺胺嘧啶时磺胺嘧啶抗弓形虫作用的动态观察结果 T:弓形虫.M:巨噬细胞.P:假包囊. 一 159— 2004年右江民族医学院第2期 2.2当弓形虫进人巨噬细胞后加入药物的实验结果 阿奇霉素组,磺胺嘧啶组,大蒜素组的结果与在感染 的同时加入药物的结果基本相似,但红霉素组的结果 有差别:当弓形虫进入巨噬细胞后再加入红霉素,其抑 制弓形虫的作用更大,表现在后加入药组形成的假包 囊数量少,大部分细胞成梭形,假包囊内的虫体不清 晰,假包囊破裂明显少. 3讨论 目前临床上越来越多地应用阿奇霉素,红霉素治 疗弓形虫病,但效果在不同的人中差别较大,大环内酯 抗生素具有口服吸收好,组织中浓度高,,排泄缓慢等优 点,在治疗弓形虫病方面有较大应用前景.在本组的 实验中,20~g/ml的阿奇霉素对弓形虫有抑制作用,随 着药物浓度增大,对弓形虫的作用由抑制变为杀灭,且 对巨噬细胞毒性增加.当浓度>80~g/ml时,能在8h 内杀灭弓形虫,同时也导致巨噬细胞的裂解.lOOgg/ ml的红霉素,引起弓形虫形态的变化很小,不能阻止 速殖子侵入巨噬细胞,24h后培养细胞基本形成假包 囊,且有少量假包囊破裂,释放出速殖子.在培养了 9d以后,可见假包囊的囊壁增厚,是否为包囊,有待进 一 步的研究.将培养物注入小鼠腹腔,小鼠发病,腹腔 中有大量的速殖子.150~g/ml的红霉素对弓形虫的 抑制作用明显增强,表现在培养细胞形成的假包囊数 少,体积小,均未破裂,接种小鼠后,小鼠没有发病.该 实验提示红霉素在浓度不够时,可能有利于包囊的形 成,形成包囊后,将使弓形虫病的治疗更加困难,所以 在临床上治疗弓形虫病人时,要注意药的用量.我们 没有观察到100~g/ml,200~g/ml的磺胺嘧啶及20t~g/ ml,40~g/ml的大蒜素对弓形虫的抑制作用,而Francis 报道[磺胺嘧啶有抑制弓形虫生长的作用,是否与我 们用的宿主细胞与其不同有关,有待进一步研究. 参考文献: [1]TheandinM,BozlaghiB,eta1.Extensivetoxoplasmic retinochoroiditisDiagnosticandtherapeuticmanagelrlerlt [J].JFrOphtalrnal,2003,26(9):921—927. 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