复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义

复发及难治急性髓细胞白血病病人多药耐药基因检测及意义　　【摘要】目的研究复发及难治急性髓细胞白血病(AML)病人多药耐药基因(mdr1)的达及其与临床疗效的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测65例AML病人(其中初诊组38例，完全缓解组14例，复发难治组13例)、27例非白血病病人和健康人(包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例)mdr1基因的表达水平，并其临床意义。结果AML病人mdr1基因表达阳性率高于对照组，复发难治组mdr1基因表达阳性率高于初诊组和完全缓解组，临床耐药组mdr1基因表达阳性率显著高于非临床耐药组，CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组，差异均有显著性(χ2=8.334～49.630，P<0.01)。结论mdr1基因阳性表达与AML病人临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。　　【关键词】白血病髓样多药耐药相关蛋白质类抗药性肿瘤　　[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheexpressionofmultidrugresistancegene(MDRG)andthecurativeeffectinrelapseorrefractoryacutemyelogenousleukemia(AML).MethodsAsemiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)wasusedtoinvestigatethetranscriptionlevelsofthehumanMDRGin65AMLpatientsand27controls,andanalyzetheitsclinicalsignificance.ResultsMDRGexpressionwassignificantlyhigherinAMLpatientsthaninthecontrols,andhigherinrelapsed/refractoryAMLpatientsthaninthosenewlydiagnosedorincompleteremission.Thegeneexpressionwassignificantlylowerinnonresistantpatientsthaninresistantones.Completeremission(CR)rateofnonresistantpatientswashigherthanresistantones(χ2=8.324-49.630，P<0.01).ConclusionMDRGoverexpressionissignificantlyassociatedwithclinicalmultidrugresistanceandprognosis,anditisoneoftheindicatorsforpredictingtheprognosisofAML.　　[KEYWORDS]leukemia,myeloid;multidrugresistanceassociatedproteinsmdr1;drugresistance,neoplasm　　国内外研究证明，多药耐药基因(mdr1)的存在及表达是产生多药耐药(MDR)的主要机制。本文应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测了65例急性髓细胞白血病(AML)病人、27例非白血病病人和健康人的mdr1基因表达水平，分析mdr1基因表达水平与临床耐药的关系。　　1材料和方法　　1.1细胞系与细胞培养　　K562/A02由中国医学科学院血液学研究所惠赠，用阿霉素(ADM)诱导K562细胞建立的多药耐药细胞株[1]，具有典型的MDR表型。K562/A02细胞在培养过程中加1ng/L的阿霉素，使用前3d撤药。　　1.2病人及分组　　根据白血病诊断[2]，选择急性髓细胞白血病(AML)病人65例，男39例(年龄18～63岁)，女26例(年龄22～59岁)，中位年龄34.2岁。其中初诊组(AMLP)38例，完全缓解(CR)组(AMLC)14例，复发难治组(AMLR)13例;M0和M1各1例，M219例，M315例，M414例，M59例，M62例，M71例，杂合型白血病(HAL)3例。对照组27例，其中男16例(年龄19～52岁)，女11例(年龄15～46岁)，中位年龄30.9岁，包括健康人15例、缺铁性贫血病人10例、特发性血小板减少性紫癜病人2例。15例健康人取外周血，余均取骨髓。病人为青岛大学医学院附属医院及聊城市人民医院住院病人。　　临床耐药诊断标准：①对一线诱导治疗2个疗程无效;②第1次缓解后6个月内复发;③第1次缓解后6个月以上复发经诱导治疗无效;④2次或2次以上复发。　　1.3半定量RTPCR　　细胞总RNA的提取：用TRIzol提取细胞总RNA。经MMLV逆转录酶合成cDNA，以逆转录产物加dNTPs、PCRBuffer、mdr1引物进行PCR，取PCR产物定量10μL扩增产物，25g/L琼脂糖凝胶电泳，灌胶前加EB(1mL1×TAE加1μLEB)，75V，30～60min，紫外线灯下观察并照相，用KodakDigitalScience1DImageAnalysisSoftware及GD1数字化凝胶成像分析仪扫描，计算mdr1基因与βactin的比值。　　1.4统计学处理　　应用医学统计学软件SPSS12.0处理，结果用±s表示，数据间比较用F检验及χ2检验。　　2结果　　2.1AML病人mdr1基因的表达　　AMLP组、AMLC组、AMLR组和对照组mdr1基因表达值分别为0.78±0.76、0.54±0.45、1.64±1.75、0.20±0.13，AML病人mdr1基因表达值高于对照组，且AMLR组高于AMLP组、AMLC组，差异有显著性(P<0.001)。见图1。　　图1mdr1基因表达的RTPCR检测　　①Marker;②AMLP;③AMLR;④AMLC;⑤AMLM5;⑥Normal;⑦K562/A02;⑧K562　　根据对照组和AML各组mdr1基因在不同组别的表达，将mdr1/βactin的比值≥1.0定为mdr1基因阳性表达，对照组mdr1与βactin比值均<0.1，根据此标准，AMLR组mdr1基因阳性表达率显著高于AMLP组和AMLC组，差异有显著性(χ2=9.578、8.324，P<0.05)。见表1。表1各组AML病人mdr1基因阳性表达组别n阳性例数阳性率AML病人临床耐药组mdr1基因阳性表达率显著高于非临床耐药组，差异有显著性(χ2=32.42，P<0.01)，CR率非临床耐药组显著高于临床耐药组，差异有显著性(χ2=49.63，P<0.01)。见表2。　　表2AML病人mdr1基因表达与临床耐药的关系组别nmdr1阳性(例)表达率(χ%)CR(例)CR率(χ%)临床耐药251768.0416.0非临床耐药40410.03895.0　　【摘要】《英语课程标准》关于教学中应注意的问题部分指出:“在教学过程中,要始终体现学生的主体地位,教师应充分发挥学生在学习过程中的主动性和积极性,激发学生的学习兴趣,营造宽松、和谐的学习气氛”。　　【论文关键词】英语教学;课堂;效率　　教学实践证明,同样的课文,同样的教学内容,同样水平的学生,由于教学方法不同,教学效果往往大不一样。因此,研究如何运用各种教学要素,按照最佳的方式组织教材,提高课堂教学效率,使学生英语教学真正做到“轻负担,低消耗,高效率”具有十分重要意义。