浅谈气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量

浅谈气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量　　【摘要】目的建立气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑含量的方法。方法采用HP?5石英毛细管柱(5%phenylmethylsiloxane)(30.0m×320nm×0.25μm),柱温为110℃,进样口温度为180℃,检测器温度为250℃,载气为氮气。结果龙脑检测质量浓度在6.875～220.00μg/mL(r=0.9999,n=6)范围内线性关系良好,平均回收率为98.59%(RSD=1.52%)。　　【关键词】气相色谱法;佛山人参再造丸;龙脑;含量测定　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentdeterminationofborneolinFoshanrenshenzaizaopills.MethodThesamplewasanalyzedonanHP?5capillarycolumn(5%phenylmethylsiloxane,30.0m×320nm×0.25μm)usingnitrogenascarriergas.Thetemperaturesofthecolumn,injectoranddetectorwere110,180and250℃,respectively.ResultTherewasgoodlinearityintherangeof6.88?220.00μg/mL(r=0.9999,n=6).Theaveragerecoveryandrelativestandarddeviationofborneolwere98.58%and1.52%,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurateandreproducibleforthequalitycontrolofFoshanrenshenzaizaopill.　　Keywords:gaschromatography;Foshanrenshenzaizaopill;borneol　　佛山人参再造丸是由人参、人工牛黄、血竭、当归、冰片(合成龙脑)、大黄等组成的复方制剂，具有祛风化淤、活血通络的功效，用于中风、步履艰难、口眼歪斜、手足痉挛、左瘫右痪、筋骨疼痛、半身不遂、言语不清[1]。处方中冰片(合成龙脑)是一味常用药，具有散郁火、清热、消肿等功效。冰片(合成龙脑)主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑，其化学结构无特征紫外吸收，因此薄层扫描法和气相色谱法[2-4]是测定这类化合物较好方法。本文建立气相色谱法测定佛山人参再造丸中龙脑的含量，方法简便，杂质无干扰，分离效果好，结果准确，可作为该制剂质量控制的方法之一。　　1仪器与试药　　AgilentHP6890气相色谱仪，HPChemstatations工作站，FID检测器;CQ250超声波处理器(上海,功率250W，频率33kHz)。　　龙脑(中国药品生物制品检定所，批号：110881?200504),水杨酸甲酯(中国药品生物制品检定所，批号：707?8702),佛山人参再造丸共10批(佛山冯了性药业有限公司)，所用的其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果1色谱条件与系统适用性试验　　色谱柱为HP?5石英毛细管柱(5%phenylmethylsiloxane)(30.0m×320nm×0.25μm),柱温为110℃,进样口温度为180℃,检测器温度为250℃,载气为高纯度氮气,分流比为20∶1，在上述色谱条件下,龙脑、水杨酸甲酯(内标)的理论塔板数均大于40000。龙脑与水杨酸甲酯(内标)的分离度大于2。2溶液的制备2.1内标溶液的制备精密称取水杨酸甲酯适量,置于1000mL容量瓶中，加入乙醇配制成浓度为0.1300mg/mL的溶液,摇匀,即得。2.2对照品溶液制备精密称取龙脑对照品适量，置于100mL容量瓶中，加上述内标溶液溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.0900mg/mL的溶液,摇匀,即得。2.3供试品溶液的制备取本品剪碎，取约2g，精密称定，加硅藻土2g研碎，置于具塞锥形瓶中，精密加入上述内标溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减少的重量，取续滤液，即得。3测定方法　　吸取对照品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，测定龙脑和水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子;吸取供试品溶液按上述色谱条件注入气相色谱仪，按内标法计算即得。4线性关系考察　　精密称取龙脑对照品适量，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为220.00μg/mL龙脑对照品溶液;精密吸取该对照品溶液5mL置于10mL的容量瓶中，加上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为110.00μg/mL龙脑对照品溶液;同上逐级用内标液稀释配制6个不同浓度梯度220.00、110.00、55.00、27.50、13.75、6.875μg/mL的对照品溶液。吸取上述溶液,按上述色谱条件进样，其峰面积,并以龙脑质量浓度(ρ)为横坐标,龙脑峰面积与内标峰面积之比(A)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程A=0.0124ρ-0.0151(r=0.9999,n=6)。结果明龙脑检测质量浓度在6.875～220.00μg/mL范围内线性关系良好。5阴性干扰的考察　　取缺冰片的处方，按工艺制成阴性制剂，按“2.2.3”项方法加乙醇超声提取制得阴性对照溶液。分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件进样分析。结果表明其他味药及辅料对龙脑测定无干扰,见图1。　　图1气相色谱图　略6仪器精密度试验　　取同一供试品溶液(批号为GC0007)按上述色谱条件重复进样6次，测定龙脑的含量,结果龙脑含量的RSD为1.02%，表明仪器精密度良好。7稳定性试验　　取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、1、2、4、6、8h进样测定，计算龙脑峰面积与内标峰面积之比的RSD为1.69%。结果表明供试品溶液在8h之内稳定。8重复性试验　　精密称取同一批号(批号为GC0007)的样品5份各2g，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定每一份供试品含量，结果平均值为0.5972mg/g,RSD=1.09%。结果表明本法重复性良好。9加样回收率试验　　取已测得含量的样品(批号为GC0007，龙脑质量比为0.5972mg/g)6份各1g，精密称定，分别加入硅藻土1g,研碎，各精密加入龙脑对照品溶液(质量浓度为0.6017mg/mL)1mL，按“2.2.3”项方法制得供试品溶液，测定，结果平均回收率为98.59%，RSD为1.52%。10样品测定　　取10批样品，分别按供试品的溶液制备方法制得供试品溶液，按“2.3”项测定，结果见表1。　　表110批样品测定结果　略　　3讨论1[2-4]提取溶剂选择有乙醇、乙酸乙酯和氯仿等，内标物的选择有和水杨酸甲酯。通过试验比较,加硅藻土研碎，乙醇为提取溶剂，超声提取(功率250W，频率33kHz)，水杨酸甲酯为内标物，龙脑提取率明显提高，乙醇的毒性、刺激性较小、价格较低且水杨酸甲酯与龙脑都具有良好的分离度,故采用乙醇为提取溶剂、超声提取和水杨酸甲酯为内标物的方法。2采用超声提取法，试用不同的提取时间(20min、30min、40min)对样品进行提取，结果30min与40min样品的含量较大而且无明显差别，说明乙醇30min的超声提取样品已经提取完全，为节约时间及节省成本，超声提取时间确定为30min。