HPLC法测定益气温阳胶囊中阿魏酸的含量

HPLC法测定益气温阳胶囊中阿魏酸的含量　　【关键词】益气温阳胶囊　　摘要:目的建立HPLC测定益气温阳胶囊中的有效成分其他阿魏酸含量的方法。方法采用色谱柱为C18柱，流动相：甲醇水冰醋酸(体积比25∶75∶0.35)，检测波长为320nm。结果阿魏酸在0.02~0.20μg范围内与峰面积呈线性关系，胶囊中阿魏酸的平均回收率为98.8%，RSD=0.97%。结论方法简便、稳定，能有效地控制该制剂的质量。　　关键词:益气温阳胶囊;高效液相色谱法;阿魏酸　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofferulicacidinYiqiwenyangcapsules.MethodSampleswereextractedwithethylacetate,andseparatedonaC18column(5μm，250mm×4.6mm)usingmethanol-wateraceticacid(25∶75∶035)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwassetat320nm.ResultsThecalibrationcurveofferulicacidwaslinearintherangeof0.02~0.20μg.Theaveragerecoverywas98.8%withRSD0.97%(n=5).ConclusionsThemethodcouldbeusedforthequalitycontrolofYiqiwenyangcapsules.　　Keywords:Yiqiwenyangcapsules;HPLC;ferulicacid　　益气温阳胶囊系由黄芪、硫磺、当归、川芎等十三味药材加工提取制得的制剂，具有温阳益气，活血通络的功效。由于现行质量中没有建立含量测定方法，不利于制剂的质量控制。通过处方，我们选择了测定方中臣药当归、川芎的有效成分阿魏酸作为质量控制的指标。据文献报道，阿魏酸具有明显扩张冠状动脉血管、增加冠脉流量、抑制ADP诱导的血小板凝聚、增强细胞吞噬功能的作用[1]。本文采用HPLC法测定了阿魏酸的含量，为控制该产品的质量提供了依据。　　1仪器与试药　　SHIMADZUSPD-10A型高效液相色谱仪;HW-2000工作站。阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(0773-9910);实验用水为重蒸馏水;甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯;益气温阳胶囊(广州市花城制药厂提供，批号20020501、20020803、20020902)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱为HypersilBDSC18柱(5μm，250mm×4.6mm)，流动相为甲醇水冰醋酸(25∶75∶0.35)，流速：1.0mL/min，检测波长为320nm;柱温为室温。　　2.2溶液的制备　　2.2.1对照品溶液的制备　　取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇配制成每1mL含阿魏酸0.01mg的溶液，即得。　　2.2.2供试品溶液的制备　　取本品30粒，倾出内容物，研细，取6g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50mL，水浴中避光加热回流至浸出溶液无色，放冷，取出，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至20mL棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3系统适用性试验[2]　　2.3.1阴性对照液的制备　　按处方量称取不含当归、川芎的各味药材，按工艺制成制剂,再按供试品溶液制备方法配制阴性对照液。　　2.3.2系统适用性　　在上述色谱条件下，分别取阿魏酸对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各10μL测定，供试品阿魏酸与相邻杂质分离度大于1.5，阴性对照液在与阿魏酸对照品相同保留时间处未见色谱峰，认为不干扰测定。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。见图1。　　2.4线性关系考察　　精密吸取对照品溶液(0.01mg/mL)2.0、5.0、100、15.0、20.0μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值(A)为纵坐标，阿魏酸量(m)为横坐标进行线性回归。结果表明，峰面积与阿魏酸量呈良好线性关系，回归方程为A=4595350m+2129.27，r=0.9998，阿魏酸量在0.02～0.20μg范围内与峰面积呈线性关系。　　2.5精密度试验　　精密吸取同一对照品溶液(0.01mg/mL)，依法连续进样6次，每次10μL，峰面积结果分别为466820、473352、467155、463808、471712、472915，平均值为469294，其RSD为0.83%。　　2.6稳定性试验　　取同一批样品(批号：20020902)避光放置，在0、1、2、3、6、12h分别进样10μL，依法测定含量，结果RSD为1.12%，表明供试品在避光放置条件下12h内较稳定。　　2.7回收率试验　　采用加样回收法，精密称取已知含量的益气温阳胶囊，分别加入一定量的阿魏酸对照品溶液(0.01mg/mL)，按样品测定方法测定含量，结果见表1。表1阿魏酸回收率测定结果(略)　　2.8样品含量测定　　取对照品溶液(0.01mg/mL)和供试品溶液，用045μm微孔滤膜过滤,各进样10μL，读取峰面积,按外标法计算含量，结果见表2。表23批益气温阳胶囊阿魏酸含量(略)　　3讨论　　3.1有关制剂中阿魏酸的高效液相测定方法已有多篇文献[3-4]报道。曾参照文献[4]的方法，采用甲醇冰酸酸(体积比45∶55)为流动相，结果供试品中阿魏酸与相邻杂质分离度小于1.5。本文将流动相组成调整为甲醇水冰醋酸(体积比25∶75∶0.35)，供试品中阿魏酸与相邻杂质分离度大于1.5，阿魏酸峰峰形较好。　　3.2阿魏酸对光不稳定，配成溶液后及样品的制备过程中注意避光，否则会引起阿魏酸的含量降低。　　3.3用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，使用简单的体系就达到分离测定的目的，方法稳定，结果准确，可作为本品的质量控制方法。　　:　　[1]郑虎占.中药现代研究与应用(第一卷)[M].北京：学苑出版社，1997：910.　　[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].化学工业出版社，2000：附录38-40.　　[3]王宝.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京：中国医药科技出版社，1994：439.　　[4]刘义梅.HPLC法测定复方银杏口服液中阿魏酸的含量[J].中药材，2005，28(2)：147.