膀胱上皮细胞特异性启动子UroplakinII的克隆及功能研究

膀胱上皮细胞特异性启动子UroplakinII的克隆及功能研究毕业全部作者：朱宏建张智清曾祥福魏守顺徐春晓黄国锦郭应禄第1作者单位：武警总医院摘要：探讨应用UroplakinII(UPII)启动子靶向性基因治疗膀胱癌的可行性以及UPII启动子的调控机理。采用半定量RT-PCR方法，检测了人类膀胱移行细胞癌细胞株（BIU-87）和肾癌细胞株（GRC-1）、脐静脉血管内皮细胞株（EC）、肺癌细胞株（A549）、皮肤成纤维细胞株（Hs27）中UPII基因mRNA的达情况。从正常人外周血中提取基因组DNA，以此DNA为，根据人基因组草图序列设计引物，应用多聚酶联反应技术（PCR）克隆人UPII结构基因第1外显子5’端上游1段序列（hUPII），同时构建以绿色荧光蛋白（GFP）和荧光素激酶（Luc）为报告基因的重组质粒，并构建含不同长度hUPII突变体的重组质粒，应用脂质体转染技术，将重组质粒转染入BIU-87和GRC-1、EC、A549、Hs27，利用共聚焦显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察细胞表达绿色荧光蛋白和荧光素激酶的情况。结果:UPII基因的mRNA在BIU-87中有较高表达，而在其它组织细胞中表达极低。PCR克隆得到UPII结构基因第1外显子5’端上游1段2542bp的序列。重组质粒转染后，BIU-87表达绿色荧光蛋白较多，10-20/HP，亮度较强，流式细胞仪测定表达量为10.1%。而GRC-1、EC细胞表达极少，0-5/HP，亮度暗，流式细胞仪测定表达量为0和1.8％。荧光素激酶在BIU-87中的表达量是其它组织细胞的2.2倍以上，存在显著性差异（P<0.01）。hUPII-1、hUPII-2、hUPII-5在膀胱癌细胞中表达荧光素激酶的量明显低于hUPII，但在其它组织细胞中的表达量仅略有减少，hUPII-3和hUPII-4在各种组织细胞中均不表达荧光素激酶。结论:本研究克隆的序列具有类似人UPII启动子的功能，UPII启动子上游973bp大小的序列决定了该启动子的组织特异性，下游325bp序列为该启动子的核心启动序列。关键词：UroplakinII；启动子；膀胱癌远程下载(免费PDF)发表日期：2006年10月29日同行评议：（暂时没有）综合评价：（暂时没有）修改稿：