胰腺癌组织中血管内皮生长因子和肿瘤相关巨噬细胞与淋巴结转移的

胰腺癌组织中血管内皮生长因子和肿瘤相关巨噬细胞与淋巴结转移的毕业【摘要】 目的研究胰腺癌组织中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达和肿瘤相关巨噬细胞(tumour?associatedmacrophages，TAMs)计数与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组织化学染色，在光镜下对VEGF阳性细胞评分及TAMs计数进行分析。结果胰腺癌组织中VEGF表达阳性率明显高于正常组织(P<0.01)；淋巴结转移组VEGF的表达和TAMs计数较未转移组明显增高(P<0.05)；VEGF的表达与胰腺癌临床病理分期无明显关系(P>0.05)；TAMs计数与胰腺癌临床病理分期有明显关系(P<0.01)；VEGF的表达与TAMs计数呈正相关(r=0.663，P<0.01)。结论VEGF和TAMs的表达均与胰腺癌淋巴结转移有密切关系。【关键词】 胰腺肿瘤；血管内皮生长因子；肿瘤相关巨噬细胞；淋巴结转移   【Abstract】 Objective Toinvestigaterelationshipofexpressionsofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andcountingoftumour?associatedmacrophages(TAMs)anddiscusstheircorrelationwithlymphaticmetastasisinpancreaticcancer.Methods Afterimmunohistochemicalstaining,lightmicroscopewasemployedtodetermineexpressionsofVEGFandTAMs.StatisticalanalysiswasperformedbyusingSPSSsoftware.Results ThepositiverateofVEGFinpancreaticcancerwas51%(18/35),whichwassignificantlyhigherthanthatofnormaltissues(P<0.01).(1)ThescoresofVEGFandthenumberofTAMsinmetastaticcancerweresignificantlyhigherthanthoseinthecancerwithoutmetastasis(P<0.05).(2)TherewasnostatisticallysignificantcorrelationbetweenscoresofVEGFandtumorstaging(P>0.05).(3)TherewasstatisticallysignificantrelationshipbetweennumberofTAMsandtumorstaging(P<0.01).(4)TheexpressionsofVEGFwerepositivelycorrelatedwithnumberofTAMs(r=0.663,P<0.01).Conclusions ExpressionsofVEGFandnumberofTAMsmayrelatetothelymphaticmetastasisofpancreaticcancer.   【Keywords】 Pancreaticcancer; Vascularendothelialgrowthfactor; Tumour?associatedmacrophages;   Lymphaticmetastasis   胰腺癌是临床上较为少见的恶性肿瘤，其晚期常有淋巴结转移。在肿瘤细胞的恶性增殖和转移的过程中，血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)被认为是最重要的因子之1。有研究发现在肿瘤中浸润的巨噬细胞——肿瘤相关巨噬细胞(tumour?associatedmacrophages，TAMs)也与淋巴结转移有密切关系［1］。本研究采用免疫组织化学方法对两者与淋巴结转移的关系进行分析，现报道如下。   1 材料与方法   1.1 临床资料   收集1999-2004年中国医科大学附属1院及沈阳医学院附属奉天医院手术切除胰腺癌标本35例，其中男24例，女11例；平均年龄54.2岁(34～76岁)。患者术前未经任何治疗。病理分级：高分化腺癌20例，中分化腺癌10例，低分化腺癌5例。临床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期12例，Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。有淋巴结转移15例，无淋巴结转移20例。收集正常胰腺组织6例，其中男4例，女2例；平均年龄48.4岁(39～55岁)。以上标本均经过脱水，福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片(厚度4μm)。   1.2 免疫组织化学染色   抗原修复后，常规免疫组织化学染色，鼠抗人CD68单克隆抗体(KP1，工作浓度1∶100)标记巨噬细胞，鼠抗人VEGF单克隆抗体(JH121，工作浓度1∶100)标记VEGF，2氨基联苯胺显色(以上试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司)。按使用方法操作，严格控制时间及湿度，每次染色均设阳性及阴性对照，以福州迈新公司提供的阳性切片作为阳性对照，以0.01mol/LpH7.4的PBS代替1抗作为阴性对照，并进行常规苏木精?伊红染色。   1.3 结果判定   免疫组织化学染色切片上TAMs计数按照文献［2-3］进行计数。VEGF的表达结果以其评分值进行统计处理：将癌组织染色强度评分(无：0分；弱：1分；中：2分；强：3分)和阳性细胞率评分(<5%：0分；5%～10%：1分；11%～20%：2分；21%～50%：3分；>50%：4分)之和为该病例评分值，将评分值≤2分定为阴性病例，>2分定为阳性病例。   1.4 统计学分析   用SPSS12.0统计软件进行统计学分析，计量资料用±s表示，采用t检验，方差分析(Newman?keuls法)。采用Pearson相关系数检验VEGF评分与TAMs计数之间的关系，P<0.05为差异有统计学意义。   2 结果   2.1 免疫组织化学染色结果   正常组中巨噬细胞分布明显稀少(图1)。胰腺癌组中CD68表达呈黄色或棕黄色颗粒状，主要位于巨噬细胞的胞膜和胞质。在癌组织及癌周组织广泛分布，分布不均(图2，3)。VEGF的表达也呈黄色或棕黄色颗粒，主要位于细胞的胞质中，在癌细胞中表达比较明显，在癌周围及正常组织中表达较少(图4)。   2.2 VEGF的表达与各项临床指标的关系   VEGF在胰腺癌组中的表达阳性率为51%(18/35)，评分值2.71±1.41，明显高于正常组的0.50±0.55(P<0.01)。在胰腺癌高、中、低分化之间虽有差异，但无统计学意义(P>0.05)。在不同临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。淋巴结转移的VEGF表达高于淋巴结未转移，差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF表达与各指标关系见表1。表1 VEGF的表达与各项临床指标的关系   2.3 TAMs计数与各项临床指标的关系   胰腺癌中TAMs计数均值为107.03±33.64。胰腺癌中TAMs计数低分化高于中分化，中分化又高于高分化，3者差异均有统计学意义(P<0.01)；淋巴结转移中TAMs计数高于淋巴结未转移，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。表2 肿瘤相关巨噬细胞计数与各项临床指标的关系   2.4 VEGF的表达与TAMs计数之间的关系   在胰腺癌中VEGF的表达和TAMs计数呈直线正相关(r=0.663，P<0.01)，即随肿瘤组织内TAMs计数的增加，VEGF的表达也随之增加。   3 讨论   3.1 VEGF的表达与胰腺癌淋巴结转移有关   肿瘤血管新生是恶性肿瘤生长和转移的前提。VEGF是作用最强、特异性最高的促血管生长因子之1［4］。本实验结果显示VEGF主要表达于胰腺癌组织中，癌周和正常组织表达较少。这说明胰腺癌细胞有分泌VEGF以促进肿癌血管形成的功能。各不同临床分期组及病理分期组中VEGF的表达之间无明显差异，而转移组VEGF表达较未转移组明显增高，表明VEGF的表达与胰腺癌淋巴结转移有关，提示VEGF可能通过某种机制促进淋巴管的生长，导致淋巴结转移的发生。   3.2 TAMs与胰腺癌的分化和淋巴结转移有关   巨噬细胞主要来源于外周血单核细胞。本实验结果显示胰腺癌组织中有大量巨噬细胞浸润即TAMs。浸润部分主要位于胰腺癌的间质中，说明肿瘤细胞可能分泌1些化学趋化因子诱导巨噬细胞迁移浸润［5］。胰腺癌高分化组中TAMs计数平均值最低，低分化中TAMs计数平均值最高，高、中、低3者之间有明显差异，而且淋巴结转移者TAMs计数均值也明显高于未转移者，说明TAMs与胰腺癌的分化转移有密切关系。TAMs也可能分泌促进肿瘤生长和转移的因子，参与肿瘤的生长和转移［6］。TAMs计数越高，可能胰腺癌分化越低，越易发生转移，预后越差。   3.3 VEGF的分泌与TAMs的浸润有密切关系   本研究发现胰腺癌中VEGF的表达与TAMs计数呈正相关，提示VEGF的分泌与TAMs的浸润有着密切的关系，且均与胰腺癌的转移有关。冯红超等［7］研究表明口腔鳞癌中的TAMs的数量与VEGF的表达有关，同时证实在TAMs中有VEGF的表达。Schoppman等［8］在子宫颈癌的研究中也证实TAMs表达VEGF并与瘤周的淋巴结密度及淋巴结转移有关。而且Valkovic等［9］研究证实VEGF是TAMs浸润的诱导趋化因子［9］。这就可能是癌细胞产生VEGF促进血管新生，诱导TAMs浸润，TAMs也产生VEGF促进肿瘤生长，形成“恶性循环”。但在胰腺癌中TAMs是否产生VEGF尚需进1步研究。本研究还发现VEGF的表达与胰腺癌的分期、分级无关，而TAMs的表达与胰腺癌的分期、分级有关，表明VEGF和TAMs的表达还分别与其他不同因子的作用有关。TAMs在胰腺癌的分化和转移可能更为重要［10］。在今后探索胰腺癌的治疗时抑制TAMs的浸润可能是1个有意义的方向。【】 ［1］VolodkoN,ReinerA,RudasM,etal.Tumour?associatedmacrophagesinbreastcancerandtheirprognosticcorrelations.Breast,1998,7:99-105.［2］OhnoS,InagawaH,DharDK,etal.Thedegreeofmacrophageinfiltrationintothecancercellnestisasignificantpredictorofsurvivalingastriccancerpatients.AnticancerRes,2003,23(6D):5015-5022.［3］TatarogluC,KargiA,OzkalS,etal.Associationofmacrophages,mastcellsandeosinophilleukocyteswithangiogenesisandtumorstatgeinnon?smallcelllungcarcinomas(NSCLC).LungCancer,2004,43(1):47-54.［4］胡淳玲,喻伦银,陈德基,等.大鼠实验性肺鳞癌癌变各阶段间质微血管密度及VEGF、FLK?1表达的动态变化.癌症，2001,20(7):713-717.［5］WolfM,Clark?LewisI,BuriC,etal.CathepsinDspecificallycleavesthechemokinesmacrophageimflammatoryprotein?1alpha,macrophageimflammatoryprotein?1beta,andSLCthatareexpressedinhumanbreastcancer.AmJPathol,2003,162(4):1183-1190.［6］SheikhA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