反相高效液相色谱法测定人参健脾片中橙皮苷的含量(1)

反相高效液相色谱法测定人参健脾片中橙皮苷的含量(1) 【摘要】 目的采用反相高效液相色谱（RP?HPLC）法测定人参健脾片中橙皮苷的含量。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇?冰醋酸?水（31∶4∶65）为流动相，流速1.0 ml·min-1，柱温35℃，检测波长283 nm。结果在0.228～2.592 μg之间，峰面积与进样量的线性关系为Y=1.0×106X－3.72×103，（r=0.999 6，n=6），平均回收率为98.53 %, RSD=0.87%（n＝6）。测得3批样品中橙皮苷的含量分别为1.38，1.36，1.35 mg/片。结论 所建方法简便、准确、重复性好，可用于人参健脾片的质量控制。 【关键词】 人参健脾片； 橙皮苷；反相高效液相色谱法 　　Determination of Hesperidi in Renshenjianpi Tablet by RP?HPLC　　SHANG Yuan hong， LIU Yuan ，TIAN Jin feng　　1.Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041,China;　　2. Southwest University, Chongqing 400715, China　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of hesperidi from Renshenjianpi Tablet. MethodsThe column was kromasil C18 (200 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase consisted of methanol?acetic acid?water (31：4：65 ) with the flow rate of 1.0 ml·min-1 and the UV detector at 283 nm. ResultsThe method showed a good relationship in the ranges of 0.228～2.592 μg (r=0.999 6) for hesperidi, the average recovery was 98.53%（RSD=0.87%）.The hesperidi contents of three batch samples were 1.38 mg ,1.36 mg ,1.35 mg respectively. ConclusionThis method is simple, reproducible and suitable for the determination of the contents of hesperidi in Renshen Jianpi Tablet .　　Key words：Renshenjianpi Tablet; Hesperidi; RP?HPLC 人参健脾片由人参、陈皮、青皮、甘草、当归、枳壳等17味中药组成。具有补气健脾，开胃消食之功效。用于脾虚湿困所致的食少便溏，或吐或泻，脘腹肚满，四肢乏力，面色萎黄等症。本品处方中陈皮、青皮、枳壳均含有橙皮苷成分，其橙皮苷的含量测定方法较多［1,2］，但笔者到目前未见对该制剂中这3味药材的橙皮苷含量控制的文献报道。所以本文拟建立高效液相色谱法测定制剂中的橙皮苷含量方法，为控制其制剂质量提供了一定的科学依据。　　1 仪器与试药 美国SSI液相色谱仪（浙江大学N2000色谱工作站）；德国赛多利斯BP211D电子天平；上海波龙电子仪器有限公司USC?502超声波清洗器。 橙皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（供含量测定用，批号721?200211）；甲醇为色谱纯；水为重蒸水，其余试剂为分析纯。人参健脾片（批号20040907，20040908，20040909）。　　2 方法与结果　　2.1 色谱条件和系统适用性实验Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇?冰醋酸?水（31∶4∶65）；流速为1 ml·min-1，柱温35 ℃，检测波长为283 nm，进样量10 μl。橙皮苷峰与其他峰达到基线分离，峰形对称，橙皮苷峰与相邻峰分离度大于1.5，按橙皮苷峰计，色谱柱理论塔板数不低于3×103，色谱图见图1。按上述色谱条件，进对照品溶液、供试品溶液、三阴性对照溶液各10 μl，绘制色谱图。结果见图1。　　2.2 对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品1.44 mg，置10 ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.144 ml·min-1的对照品溶液。　　2.3 样品溶液的制备取本品5片，除去包衣，研细，精密称定1.0 g，置平底烧瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流30 min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置取上清液微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作供试品溶液。　　2.4 缺陈皮、青皮、枳壳三阴性对照溶液精密称取缺陈皮、青皮、枳壳三阴性样品1.0 g，按供试品溶液的制备方法制得缺陈皮、青皮、枳壳三阴性对照溶液。