浅谈动态观察柴胡皂苷a对实验性癫痫小鼠痫性发作的影响 摘要:目的研究柴胡皂苷a(saikosaponina,SSa)对戊四氮(PTZ)诱导的小鼠痫性发作的影响,了解其药效特点。方法采用PTZ诱导小鼠急性痫性发作来制作癫痫模型,通过记录不同时间点小鼠痫性发作潜伏期和强直性惊厥率的变化,研究SSa抗小鼠PTZ致痫作用的动态特征。结果SSa腹腔注射30、60、90min组能显着延长阵发性痉挛潜伏期(P0.05),其中SSa90min组作用最为显着(P001)。在60、90、120min组中,SSa腹腔注射也能明显延长强直性惊厥潜伏期(P0.05),其中尤以90min组作用显着(P001);SSa90min组对过渡时间延长作用显着(P0.05);SSa30min、60min组能减少PTZ致痫小鼠强直性惊厥发作例数(P005),且以SSa60min组作用最为显着。结论SSa具有对抗小鼠PTZ致痫作用;腹腔注射SSa对PTZ诱导小鼠的痫性发作在120min内以60min、90min药效作用较强。 关键词:实验性癫痫;柴胡皂苷a;PTZ;小鼠 Abstract:ObjectiveTostudythedynamicvariationsoftheeffectofsaikosaponina(SSa)onepilepticmiceinducedbypentylenetetrazol(PTZ),andtounderstandtheeffectcharacteristicsofSSa.MethodWiththeepilepticmiceinducedbyPTZasanimalmodel.Inthedifferenttimepoint,thetentativeseizureincubationperiodandthecaseoftetanicconvulsionwererecordedtostudythecharacteristicsoftheantiepilepticeffectofSSaonmouseinducedbyPTZ.ResultsInthegroupof30min,60minand90min,theincubationperiodofcloniccrampwassignificantlyprolongedbySSa(P0.05),andinthegroupof90min,theeffectwasremarkable(P0.01).Also,intraperitonealinjectionofSSacouldprolongtheincubationperiodoftetanicconvulsioninthegroupof60min,90minand120min(P0.05).Theeffectwasespeciallyevidentinthegroupof90min(P0.01).Inthegroupof90min,thetransitiontimewasremarkablyprolongedbySSa(P0.05).InthegroupofSSa30minandSSa60min,SSacouldreducethetetanicconvulsionofepilepticmiceintroducedbyPTZ(P0.05),andtheeffectismoresignificantinthegroupof60minthanthatinthegroupof30min.Inthegroupof30minand60min,SSacouldprotecttheepilepticmiceintroducedbyPTZfromtetanicconvulsionmoresignificantlythanthoseinthegroupof90minand120min.ConclusionsSSacaninhibittheepilepticmiceinducedbyPTZ,SSacanprotectthemousefromtetanicconvulsion,andin2hours,theeffectwasmoreremarkableat60thmin,90thminthanothers. Keywords:epilepsy;Saikosaponina;PTZ;mice 柴胡皂苷(saikosaponin)为中药柴胡的主要成分之一,其单体成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗渗出、抗肉芽肿和保护肝细胞等作用[1],对于慢性肾病的治疗也有较好疗效[2,3],但目前尚没有SSa抗癫痫作用的报道。不过已有不少证据
明柴胡及柴胡总皂苷具有镇静和抗实验性癫痫的作用[4,5]。在柴胡皂苷单体各成分中,为明确何种皂苷单体具有抗癫痫作用,笔者研究了SSa对PTZ致痫小鼠痫性发作的影响,并探讨SSa对痫性发作影响的不同时间的动态变化,以期了解SSa抗癫痫药效作用的时间特点。 1材料 1.1动物 健康昆明种小鼠180只,雌雄各半,体质量(20±2)g,由南方医科大学动物实验中心提供,合格证号为2004A063。 1.2主要试剂 柴胡皂苷a购自上海医药工业研究所,批号050106;丙戊酸钠(VPA)注射剂(德巴金)由杭州赛诺菲圣德拉保民生制药有限公司生产,批号0402049。戊四氮由美国Sigma公司生产,批号064k0686。 2实验方法 1实验动物分组 将180只昆明小鼠随机分为9组,每组20只,雌雄各半。A组:生理盐水组(生理盐水+PTZ致痫),作为以下各组的对照组;B、C、D、E组分别为经SSa预处理30、60、90、120min组(SSa30min、SSa60min、SSa90min、SSa120min+PTZ致痫);F、G、H、I组分别为经VPA预处理30、60、90、120min组(VPA30min、VPA60min、VPA90min、VPA120min+PTZ致痫)。 2模型制备及给药方法 A组小鼠在腹腔内注射生理盐水(10mL/kg)后30min时腹腔注射PTZ(85mg/kg)致痫;B、C、D、E组小鼠分别在腹腔注射SSa(7.24mg/kg)后30、60、90、120min时腹腔注射上述剂量的PTZ致痫;F、G、H、I组小鼠分别在腹腔注射VPA(200mg/kg)后30、60、90、120min时腹腔注射上述剂量的PTZ致痫。 3观察指标 小鼠痫性发作分级采用Racine
[4]。0级:无发作反应;1级:节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛;2级:点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛;3级:出现前肢阵挛但不伴随直立;4级:前肢阵挛伴随直立;5级:全身强直阵挛发作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即观察小鼠的行为动作,连续10min,记录小鼠痫性发作潜伏期,包括阵发性痉挛潜伏期(即从注射PTZ开始至相当于1~3级发作的时间)、强直性惊厥潜伏期(即从注射PTZ开始至相当于5级发作的时间),计算由阵发性痉挛向强直性惊厥发作的过渡时间;并记录发生强直性惊厥的例数,计算其发作率。 4统计学处理 应用SPSS10.0软件,多样本均数的比较采用方差分析,计数资料及率的比较用卡方检验,以P005为差异有显着性。 3结果 1SSa对PTZ致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响 将对应时间点SSa预处理、VPA预处理组与生理盐水组比较,B、C、D、F、G、H各组阵发性痉挛潜伏期明显延长,与A组比较差异有显着性(P0.05),其中尤以D、F、G组差异显着(P0.01);C、D、E、F、H组强直性惊厥潜伏期同样延长,与A组比较差异有显着性(P0.05),其中尤以D、F组差异显着(P001);在过渡时间的比较中,D、F组与A组比较差异均有显着性(P0.05),其中尤以F组差异显着(P0.01)。将对应时间点的SSa组与VPA组比较,30min时SSa组对各潜伏期的延长作用不如VPA组(P001),其余各时间点比较差异无显着性。见表1。以上结果提示,SSa不仅能明显延长阵发性痉挛潜伏期,而且能够显着延长强直性惊厥潜伏期及其过渡时间,其作用在60min、90min时强于30min、120min时,而VPA的作用以30min和60min强于90min与120min,可见SSa达到最佳作用的时间比VPA延后。表1SSa对PTZ致痫小鼠痫性发作潜伏期的动态影响(略)2SSa对PTZ致痫小鼠强直性惊厥发作例数的动态影响