灭活益生菌的研究进展

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 【收稿日期】2009212221 【作者简介】朱秀敏 ( 19662) ,女 ,硕士 ,副教授 ,从事教学及人体营养 均衡研究 , Email: zxm31919@126. com 文章编号 : 10052376X (2010) 0220175204 【综 　　述 】 灭活益生菌的研究进展 朱秀敏 ,曹萌 (邢台学院 ,河北 邢台 　054001) 　　【摘要 】　益生菌是一种对人体有益的细菌 ,含生理活性菌或死细胞 (包括代谢产物与细胞组成 )。随着对益 生菌研究的深入 ,人们发现灭活状态的益生菌在多个方面较活菌具备更大的优势。研究灭活益生菌 ,主要采用的 灭活有热灭活、γ2射线灭活、紫外线灭活和酸灭活。结合近年来对灭活益生菌研究的情况 ,出灭活益生菌 在增强免疫、抗肿瘤、抑制病源微生物、吸附有害物、缓解过敏症状、调整肠道菌群、预防龋齿和降低血清胆固醇等 方面均具有效性。灭活益生菌目前已被广泛的应用于食品、医药卫生和饲料等多个领域。 【关键词 】　灭活益生菌 ;优势 ;功效 ;应用前景 【中图分类号】R378 　　　　【文献标识码】A A rev iew of progress in researches on inactiva ted prob iotics ZHU Xiu2m in, CAO Meng (X ingtai U niversity, X ing ta i 054001, Ch ina) 【Abstract】　Probiotics is beneficial to human body. It contains physiologically activated bacteria or death cells ( in2 cluding metabolic p roducts and cell composition) , A long with further investigations, a great many lim itations exsting in live m icrobials are found while inactivated p robiotics have more advantages. There are p lenty of inactivation methods including hot deactivation, γ 2 ray deactivation, UV deactivation and acid deactivation. Combining recent results of researches on inac2 tivate p robiotics, we drew the conclusion that inactivate p robiotics are effective in strengthering immunity increasing antitu2 mor ability, inhibiting pathogenic m icroorganism s, absorbing harmful substance, relieving allergic symp tom s, adjusting intes2 tinal bacteria group, p reventing tooth decay, reducing serum cholesterol etc. Now inactivate p robiotics have been widely used in food, medicine and public health, feed and many other fields. 【Key words】　 Inactivated p robiotics; Advantage; Efficacy; App lication p rospect 　　益生菌作为一类对人类有益的细菌的总称 ,能够 帮助人体调整或维持微生态平衡、防止疾病、促进机 体健康的功效 ,已引起了人们越来越多的关注 ,灭活 益生菌更是因其特有的安全性高、没有菌量的限制、 优势而备受人们的青睐。 1　灭活益生菌的研究概况 1965年 L ILLY和 STILLW ELL 首先提出了益生 菌的定义 ,指出益生菌是对平衡动物肠道菌群有益的 物质或微生物 [ 1 ]。1989年 , FULLER将益生菌重新 定义为“一种活的微生物制剂 ,它能通过改善宿主动 物肠道菌群的组成从而有利于动物健康 ”,这一定义 强调益生菌必须是由活细胞组成 [ 1 ]。1994年在德国 召开的国际会议上对益生菌的定义作了修订 ,不再只 是一味的强调活菌 ,指出益生菌是含活菌和 /或死菌 包括其组成和产物的细菌制品 ,经口或其他黏膜途径 投入 ,目的是改善黏膜表面微生物或酶的平衡 ,或者 刺激特异性或非特异性免疫机制 [ 2 ]。 灭活益生菌的基础研究与应用 ,在日本、美国、俄 罗斯、德国等国家较受重视 ,主要围绕灭活乳杆菌属 (L actobacillus)、灭活双歧杆菌属 (B ifidobacterium )、灭 活枯草杆菌 (B acillus subtilis)及一些灭活链球菌类 (S treptococcus)进行研究 [ 3 ]。在日本含灭活双歧杆菌 属的产品非常盛行 ,并形成了较大的产业规模。我国 从上世纪 50年代开始对益生菌以及与微生态相关的 基础理论及应用进行研究 , 80年代成立了微生态学 的学会组织 ,继而出现了一些微生态制品 [ 4 ]。益生 菌功能性的研究多限于活菌 ,在灭活益生菌及其制品 方面的研究还比较少。 2　灭活益生菌的优势 2. 1　安全性高 　益生菌活菌的安全问题已引起人们 的关注 , WAGNER和 BAL ISH报道了益生菌活菌制 剂对于免疫力有缺陷的病人有潜在的危害 [ 5 ]。菌体 的突变、非正常部位转移以及抗药性基因转移 ,都可 能会增加致病菌的危险 ,尤其对一些免疫力低下的病 人而言 , 服用活菌制剂很容易引起病理反应。 WANGNER等人把乳杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌 (L actobacillus aeidoph ilus)克隆在免疫缺陷的幼鼠体 内 ,在一些克隆有乳杆菌的小鼠中出现死亡现象 ,在 严重免疫缺陷的成年鼠中也出现了类似现象 [ 5 ]。相 比较而言 ,灭活状态的益生菌具有更高的安全性 ,这 就为灭活益生菌的临床应用提供了又一条全新的 途径。 2. 2　没有菌量的限制 　灭活益生菌制剂对于益生菌 的数量没有限制 ,而活菌制剂通常要具备一定数量的 571中国微生态学杂志 　2010年 2月第 22卷第 2期 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 活菌数量才具有显著的疗效 ,例如益生酸奶中至少含 有 1. 0 ×106 个 /m l乳酸杆菌或双歧杆菌活细胞才能 有显著的疗效及保健作用 [ 3 ]。 TEMMERMAN 和 HAM ILTON2M ILLER等人对美国和英国市场上益生 菌制剂的菌体存活率进行了调查 ,结果发现在 30种 美国制剂和 13种英国制剂中 ,分别只有 11种和 6种 制剂中的活菌数达到 [ 6 ]。未达到活菌数标准的 益生菌活菌制剂对人体存在潜在的危害 ,有时甚至会 起到相反的效果。 2. 3　生产保存容易 　质量稳定性高 :益生菌活菌对 其保质期、保存条件有严格的要求 ,为了降低益生菌 在贮存、使用过程中活性的丧失 ,在益生菌活菌制剂 中需要添加保护剂和稳定剂。灭活益生菌制剂由于 不需要维持一定的菌量 ,因此在运输、保存等方面较 为容易 ,质量稳定性也比较高。 2. 4　可以同抗生素合用 　人的身上有许多正常的菌 群 ,这些菌群对人体来说是必不可少的。活菌制剂不 能和抗生素合用 ,原因是抗生素在杀灭致病菌的同 时 ,也杀灭了益生菌活菌 ,结果造成人体正常菌群失 调 ,而人体正常菌群失调则又引发了很多疾病 ,如造 成肠道菌紊乱 ,引起腹泻 ,导致人体的消化、营养吸收 的一系列不良反应。 3　灭活的方法 3. 1　热灭活 　热灭活是灭活方法中最重要也是应用 最为广泛的一种。当环境温度超过益生菌生长的最 高生长温度后 ,就会导致益生菌细胞成分发生不可逆 的失活死亡。不同的益生菌对温度的敏感性不一样 , 益生菌的抗热性越高 ,灭活所需要的温度要求就越 高 ,灭活所需要的时间就越长。灭活益生菌灭活的一 般条件为 100～105 ℃维持 45 m in。 3. 2　γ2射线灭活 　γ2射线能通过特定的方式使益生 菌失活 ,它可以使其它物质氧化或产生自由基再作用 于生物分子 ,或直接作用于生物分子 ,打开氢键、使双 键氧化、破坏环状结构或使某些分子聚合等方式 ,破 坏和改变生物大分子的结构 ,以使益生菌失活 [ 7 ]。 3. 3　紫外线灭活 　紫外线可以使益生菌失活是因为 它可以被蛋白质和核酸吸收 ,造成这些分子的变性失 活。紫外线的灭活效果与菌种的生理状态有关 ,干细 胞比活细胞抗紫外光辐射能力强 ,孢子比营养细胞抗 性强 ,带色细胞的色素如果可以吸收紫外光也可起到 保护作用。 3. 4　酸灭活 　酸类的物质也可抑制或杀灭益生菌 , 这是因为极酸的条件可以使蛋白质变性。有机酸解 离度比无机酸小 ,但有些有机酸的杀菌力反而大 ,其 作用机制是有机酸根或有机酸分子可抑制酶的活性 或代谢活动 ,而并非是酸度的作用 [ 8 ]。苯甲酸、山梨 酸和丙酸是最广泛使用于食品、饮料等中的防腐剂 , 但通常在偏酸的条件下才有抑菌作用。 不同的灭菌方式对益生菌的功效不同。在 OU2 W EHAND等人的研究报道中 ,分别使用加热、γ2射线 和紫外线对 9种保健功效的益生菌进行灭活 ,分别测 定它们对黏膜的黏附能力 ,发现加热和伽玛射线灭活 的弗氏丙酸杆菌 ( Propiox ibacterium freudenreich ii)黏 附能力强于活菌 ;同样伽玛射线灭活后 ,干酪乳杆菌 的黏附能力增强 [ 9 ]。其他的试验对象在加热和伽玛 射线灭活后黏附能力下降 ,紫外线灭活对所有试验对 象的黏附能力均未产生影响。这一结果显示紫外线 可能是制作灭活益生菌制剂的理想手段。 4　灭活益生菌的功效 在一般环境中 ,人的体表和体内都有微生物的存 在 ,它们主要分布于皮肤、口腔、呼吸道、胃肠道和尿 道 [ 10 ]。这些微生物和人类机体形成了一种共生的关 系 ,二者相互依赖 ,相互作用 ,又相互影响 ,同时对维 持人类机体健康和正常生理代谢也发挥着重要的 作用。 4. 1　增强免疫和抗肿瘤 　研究表明灭活益生菌能调 节免疫应答 ,并具有抗肿瘤活性的作用。灭活益生菌 及其菌体成分免疫赋活作用的靶细胞主要是巨噬细 胞和 B淋巴细胞。灭活益生菌能激活巨噬细胞 ,使 之吞噬功能增强 ,并分泌多种具有杀死肿瘤功能的效 应分子 ,如可溶性α肿瘤坏死因子、白细胞介素 6、白 细胞介素 12和干扰素 2γ等 [ 9 ]。其中肿瘤坏死因子 是对癌细胞有杀伤作用 ,引起肿瘤出血坏死的活性因 子。白细胞介素也是很重要的免疫活性因子 ,它参与 炎症反应 ,调节机体具免疫功能。同时灭活益生菌也 能诱导 B淋巴细胞分泌多种抗体以及增强细胞毒性 T淋巴细胞和自然杀伤细胞的杀伤功能。而这种免 疫赋活作用可控制在肿瘤发生部位的较小范围内 ,避 免了不必要的组织和器官的损伤 ,因此灭活益生菌的 安全性高于卡介苗。 4. 1. 1　灭活干酪乳杆菌 (L. casei) 　TSUNEOKA 等 人以接受γ2射线辐射的大鼠为试验对象 ,长期研究 热灭活干酪乳杆菌增强免疫作用的试验。研究发现 , 在接受辐射前 2～3 d的时期内的任何时间 ,给大鼠 灌服热灭活干酪乳杆菌 ,均能明显提高大鼠存活率 , 在辐射前使用效果略好于辐射后使用。进一步研究 发现 ,对接受辐射后大鼠使用热灭活的干酪乳杆菌 , 可以加速外周血、脾脏和骨髓中粒细胞数量的恢复 , 防止骨髓坏死 ,重建免疫屏障 ,这是大鼠存活率提高 的原因 [ 11 ]。 董珂等人 [ 12 ]使用热灭活干酪乳杆菌 ,对患胸腔 纤维肉瘤的模型大鼠进行胸腔注射 ,不仅能显著提高 大鼠存活率 ,还能有效减少胸腔恶液质。热灭活干酪 乳杆菌主要通过诱导干扰素 2γ、可溶性α肿瘤坏死因 671 Chinese Journal ofM icroecology, Feb12010, Vol122 No12 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 子和白细胞介素 12来产生抗肿瘤的作用。 TSKA2 HASH I等人 [ 13 ]在大鼠体内培养膀胱癌细胞后 ,每天 1次向膀胱灌注热灭活的干酪乳杆菌 ,连续 10 d,在 培养膀胱癌细胞的 3周后检测其重量 ,并用 PCR和 组织染色方法测定膀胱黏膜细胞的免疫因子表达量 , 以卡介苗作为对照。结果发现 :热灭活的干酪乳杆菌 可以显著降低膀胱癌细胞的生长速度 ,并提高膀胱癌 细胞周围细胞抗肿瘤细胞因子的表达水平 (主要为 干扰素 2γ和可溶性α肿瘤坏死因子 ) ,同时诱导嗜中 性粒细胞向膀胱癌细胞的浸润。 4. 1. 2　灭活植物乳杆菌 (L. plan tarum ) MUROSAKI等人以移植肿瘤细胞的大鼠为试验 对象 ,用每日灌服热灭活植物乳杆菌来进行治疗 ,结 果发现 ,在移植肿瘤细胞后 7 d开始灌服 ,其抑制肿 瘤细胞生长的作用最为明显。研究认为该时期正是 白细胞介素 12水平降低的阶段 ,因此使用灭活植物 乳杆菌的效果最为明显 [ 14 ]。 4. 2　抑制病源微生物 　ASAHARA等人对热灭活干 酪乳杆菌对大肠埃希菌 ( Escherich ia coli)引起的小鼠 尿道感染的拮抗作用进行了实验 [ 9 ]。实验发现在感 染前 24 h单独灌注 100 mg的热灭活干酪乳杆菌 ,可 以显著抑制大肠埃希菌的生长和尿道炎症反应。同 样 ,在感染后使用热灭活的干酪乳杆菌进行治疗 ,也 有明显的抗病菌效果。WANGER曾以感染白色假丝 酵母 (Candida a lbicans)的免疫低下大鼠为实验对象 , 对比了部分有益生菌的灭活前后抗感染能力。通过 研究发现给被白色假丝酵母感染的大鼠服用热灭活 的干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌 ,均可显著降低大鼠体内 的白色假丝酵母活菌数 ,提高患念珠菌病大鼠的存 活率 [ 9 ]。 灭活益生菌是一种安全的抗病源微生物制剂 ,灭 活益生菌菌体及其菌体成分的抗病源微生物能力 ,源 于两方面 :一是有效增强机体的非特异性免疫。WA2 TANABE和 HOTTA通过实验发现 ,在连续服用高脂 肪低碳水化合物的食物 8周后 ,大鼠的抗病能力显著 下降 ,而服用热灭活的干酪乳杆菌 ,可显著提高这种 大鼠对假单胞菌属 ( Pseudom onas)、疱疹病毒属 (Her2 pesviridae)等致病微生物非特异性免疫的拮抗能力 , 其原因是提高了巨噬细胞的数量 [ 9 ]。二是通过自身 与黏膜的结合来阻止病源微生物对黏膜的吸附。灭 活益生菌能粘附于肠细胞 ,并阻止肠道病原体与肠细 胞的结合 ,刺激宿主的防御机制 ,引起宿主的生理变 化 ,减少钠盐和水的分泌。CHAUV IERE等人研究发 现 ,引起腹泻的大肠埃希菌通过黏附因子 ,可特异性 的结合到人体肠上皮黏膜细胞上 ,从而引起病症 ,而 热灭活的嗜酸乳杆菌可以黏附肠上皮黏膜细胞 ,抑制 大肠埃希菌的黏附 ,这种效果与嗜酸乳杆菌的量呈 正比 [ 15 ]。 4. 3　吸附有害物 　研究显示 ,用热和盐酸灭活的细 菌比活菌能更好地与黄曲霉毒素结合。P IER IDES等 人研究了乳制品中几株常见益生菌对黄曲霉毒素的 吸附作用 ,试验结果显示无论是活菌或热灭活的益生 菌都能显著减少黄曲霉毒素在牛乳中的含量 [ 16 ]。 4. 4　延缓过敏症状 　研究表明灭活益生菌具有减少 食物过敏现象的产生 ,加速过敏后机体恢复正常功能 的作用。MASTSUZAKI和 CH IN研究发现 ,口服灭活 的干酪乳杆菌可以刺激大鼠免疫细胞分泌免疫细胞 因子 ,抑制 IgE抗体合成 ,从而起到调节免疫 ,治疗过 敏症状的作用 [ 17 ]。MUROSAKI等研究发现 ,热灭活 植物乳杆菌可在体外直接诱导大鼠腹膜的巨噬细胞 分泌白细胞介素 12;诱导脾细胞分泌白细胞介素 12 和干扰素 2γ。进一步对过敏的模型大鼠 (喂食酪蛋白 等富含抗原的食物 )的研究发现 ,灌服热灭活的植物 乳杆菌 ,可提高血液中白细胞介素 12的水平 ,降低抗 原特异性 IgE的水平 ,但不影响抗原特异性 IgG的水 平 ,并在停止服用热灭活的植物乳杆菌后 ,抑制 IgE 的作用依然能持续 2周以上 [ 17 ]。 4. 5　调整肠道菌群 　经研究发现 ,灭活益生菌能通 过改善肠道微生态平衡而促进人体的健康。吕密凯 等人 [ 18 ]通过灭活的双歧杆菌及培养液用于抗生素脱 污染的小鼠肠道菌群失调的调整试验 ,研究了灭活的 双歧杆菌对抗生素脱污染小鼠肠道生理菌群的调整 , 结果表明了灭活的双歧杆菌及其代谢产物对小鼠肠 道正常菌群均有调节作用 ,使其恢复了正常的生理 功能。 4. 6　预防龋齿 　BAYONA GONZALEZ等人研究了 热灭活链球菌和热灭活乳杆菌防龋齿的作用。试验 对象为 245名 7岁儿童 ,试验组服用含灭活益生菌和 维生素 B6的咀嚼片 ,对照组服用仅含有维生素 B6 的咀嚼片 ,每周服用 1次 ,共服用 16周 ,自试验开始 后的两年内定期检查龋齿情况 ,结果发现 ,与对照组 相比 ,试验组的患龋齿人的数量较少 ,严重程度较轻 , 2年后试验组患龋齿的人数比对照组低 42% [ 3 ]。 4. 7　降低血清胆固醇 　灭活的双歧杆菌、乳杆菌的 微生态制剂 ,服后可使胆固醇转化为人体不吸收的粪 甾醇类物质 ,从而降低胆固醇水平。灭活益生菌降低 血清中胆固醇的确切机理尚不清楚 ,有人认为灭活益 生菌降胆固醇作用的原理可能与其调节和利用内源 性代谢产物并且加速短链脂肪酸代谢有关 [ 6 ]。 5　应用及发展前景 5. 1　功能性食品 　随着生物技术的发展 ,人们对灭 活益生菌的研究越来越广泛 ,将灭活益生菌应用于保 健食品是目前各国研究的热点之一。灭活益生菌可 以作为功能性食品的添加剂 ,也可以直接作为功能性 771中国微生态学杂志 　2010年 2月第 22卷第 2期 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 食品 ,目前在国外市场上有单独的灭活益生菌粉剂 , 由灭活益生菌和中药配成的混合制剂等。具有保健 功能的灭活益生菌将为功能性食品工业的发展开辟 更宽广的前景。 5. 2　临床 　由于长期滥用广谱抗生素及免疫抑制剂 的大量使用 ,目前临床致病菌的耐药性普遍增加。灭 活益生菌制剂通过屏障、增强免疫、抑制有害菌等途 径 ,调节、恢复人体正常菌群平衡 ,从而达到预防和治 疗疾病的目的 ,临床广泛用于治疗腹泻、消化性溃疡、 细菌性阴道炎以及便秘等 ,且对肝、肾功能无不良影 响 ,是一类安全、有效的生物制剂。 5. 3　水产养殖业 　灭活益生菌能够改善水产动物体 内的微生态平衡 ,刺激机体的免疫系统 ,拮抗病源微 生物 ,降解有机废物 ,从而减少疾病的发生 ,促进水产 动物生长发育 ,改善养殖生态环境。 灭活益生菌对人体有着越来越重要的功效 ,灭活 益生菌已被广泛的应用于食品、医药卫生和饲料等各 个领域 ,具有极大的发展前景。 【参考文献 】 [ 1 ]卢胜娟 ,陈祥贵. 益生菌的生理功能及其安全性 [ J ]. 食品研究与 开发 , 2006 (5) : 1222124. [ 2 ]李海燕 ,韩萍 ,侯长希 ,等. 益生菌的功效及其在食品中的应用 [ J ]. 农业与技术 , 2007 (27) : 80282. [ 3 ]刘大波 ,李文献 ,王少武 ,等. 益生菌与益生菌乳制品的研究现状 及发展趋势 [ J ]. 安徽农业科学 , 2007, 35 (8) : 240422405. [ 4 ]杜鹏 ,霍贵成. 国内外益生菌制品发展现状 [ J ]. 食品科学 , 2004 (5) : 1942197. [ 5 ]邓丽 ,芮汉明. 益生菌的研究进展 [ J ]. 广州食品工业科技 , 2003 (77) : 84286. [ 6 ]王海波 ,马微 ,钱程 ,等. 益生菌的研究现状及发展趋势 [ J ]. 现代 食品科技 , 2006, 3: 2862288. [ 7 ]沈萍. 微生物学 [M ]. 北京 :高等教育出版社 , 2001: 154. [ 8 ]黄秀梨. 微生物学 [M ]. 北京 :高等教育出版社 , 2005: 160. [ 9 ]费翅鲲 ,黄克文 ,张刚 ,等. 灭活益生菌制剂的保健功效研究进展 [ C ]. 上海市预防医学会第二届学术年会 , 2006: 2342237. [ 10 ]王丽华 ,程佳月 ,杨昌文 ,等. 动物机体微生态系统和微生态制剂 的研究进展 [ J ]. 养殖技术顾问 , 2008, 6: 1382139. [ 11 ]张百川 ,孟祥晨. 益生菌抗肿瘤作用的分子机制的研究进展 [ J ]. 现代食品科技 , 2005, 21, 4: 28. [ 12 ]董珂 ,刘晶星 ,郭晓奎. 益生菌增强机体免疫和抗肿瘤作用的分 子机制 [ J ]. 中国微生态学杂志 , 2005, 17 (1) : 79. [ 13 ]胡学智. 益生菌的免疫调节 [ J ]. 江苏调味副食品 , 2006, 2: 123. [ 14 ]张扬 ,袁杰利. 肠道益生菌对机体免疫功能的影响 [ J ]. 中国微生 态学杂志 , 2003, 15 (4) : 2462248. [ 15 ]李亚杰 ,赵献君. 益生菌对肠道黏膜免疫的影响 [ J ]. 动物医学进 展 , 2006, 27 (7) : 38241. [ 16 ]李琴 ,张世春 ,曾晓燕 ,等. 益生菌营养及保健作用 [ J ]. 食品研究 与开发 , 2004, 25 (2) : 1062108. [ 17 ]陈有容 ,郑小平 ,方继东 ,等. 益生菌的健康功效及其应用 [ J ]. 大 连水产大学学报 , 2001, 10 (3) : 2702274. [ 18 ]吕密凯 ,陈燕芹 ,马淑霞 ,等. 灭活的双歧杆菌对抗生素脱污染小 鼠肠道生理菌群的调整 [ J ]. 中国微生态学杂志 , 1999, 11 ( 3 ) : 1432144. (上接第 174页 ) [ 2 ]CHR ISTOPH IDES G K, ZDOBNOY E, BAR ILLAS2MURY C. Immuni2 ty2related genes and gene fam ilies in A nopheles gam biae[ J ]. Science, 2002, 298 (5591) : 1592165. [ 3 ]HOFFMANN J A, RE ICHHART J M, HETRU C. Innate immunity in higher insects[ J ]. Curr Op in Immunol, 1996, 8 (1) : 8213. [ 4 ] HOFFMANN J A, RE ICHHART J M. D rosophila innate immunity: an evolutionary perspective[ J ]. Nat Immunol, 2002, 3 (2) : 1212126. [ 5 ]OCH IA IM, ASH IDA M. A pattern2recognition p rotein for beta21, 32glu2 can. The binding domain and the cDNA cloning of beta21, 32glucan rec2 ognition p rotein from the silkworm, B om byxm ori [ J ]. J B iol Chem, 2000, 275 (7) : 499525002. [ 6 ]W ERNER T, L IU G, KANG D. A fam ily of pep tidoglycan recognition p roteins in the fruit fly D rosophila m elanogaster[ J ]. PNAS USA, 2000, 97 (25) : 13772213777. [ 7 ] DZIARSKI R. Pepfidoglyean recognition p roteins ( PGRPs) [ J ]. Mol Immunol, 2004, 40 (12) : 8772886. [ 8 ]RAMETM,MANFRUELL I P, PEARSON A. Functional genom ic analy2 sis of phagocytosis and identification of a D rosophila receptor for E. coli [ J ]. Nature, 2002, 416: 6442648. [ 9 ] KIM YONG2SIK. Gram2negative bacteria2binding p rotein, a pattern recognition recep tor for lipopolysaccharide andβ21, 32Glucan that me2 diates the signaling for the induction of innate immune genes in D ro2 sophila m elanogaster cells [ J ]. J B iol Chem, 2000, 275 ( 42 ) : 32721232727. [ 10 ] GOBERT V, GOTTAR M,MATSKEV ICH A A. Dual activation of the D rosophila toll pathway by two pattern recognition recep tors [ J ]. Sci2 ence, 2003, 302 (5653) : 212622130. [ 11 ]DOM IN IQUE FERRANDON, JEAN2LUC IMLER, HOFFMANN J A. Sensing infection in D rosophila: Toll and beyond [ J ]. Sem inars in Im2 munol, 2004, 16 (1) : 43253. [ 12 ]M ICHEL T, RE ICHHART J M, HOFFMANN J A. D rosophila Toll is2 activated by Gram2positive bacteria through a circulating pep tidoglycan recognition p rotein[ J ]. Nature, 2001, 414 (6865) : 7562759. [ 13 ]CHOE K M,W ERNER T, STOVEN S. Requirement for a pep tidogly2 can recognition p rotein ( PGRP) in relish activation and antibacterial immune responses in D rosophila [ J ]. Science, 2002, 296 ( 5566 ) : 3592362. [ 14 ]LEMA ITRE B, RE ICHHART J M, HOFFMANN J A. D rosophila host defense: differential disp lay of antim icrobial pep tide genes after infec2 tion by various classes of m icroorganism s[ J ]. PNASci USA, 1997, 94 (26) : 14614214619. 871 Chinese Journal ofM icroecology, Feb12010, Vol122 No12