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HPLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量

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HPLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量 中国药事 2008年第 22卷第 9期 803 H PLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量 黄海萍,舒毕琼 (湖南省药品检验所,长沙 410001) 摘要: 高效液相色谱法测定牛黄解毒片中人工牛黄含量。采用Kromasil C 柱,以甲醇一2-氯甲烷一0.1 磷酸溶液 (81:13:6)为流动相;检 测波长:450nm;流速:lmL·min 。胆红 素在 0.00525~ 0.0525>g范围内具有良好的线性关系,r----0.9998。平均回收率为 101.44%0,RSD一1.7 。本方法操作 简单,重复...
HPLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量
中国药事 2008年第 22卷第 9期 803 H PLC法测定牛黄解毒片中胆红素的含量 黄海萍,舒毕琼 (湖南省药品检验所,长沙 410001) 摘要: 高效液相色谱法测定牛黄解毒片中人工牛黄含量。采用Kromasil C 柱,以甲醇一2-氯甲烷一0.1 磷酸溶液 (81:13:6)为流动相;检 测波长:450nm;流速:lmL·min 。胆红 素在 0.00525~ 0.0525>g范围内具有良好的线性关系,r----0.9998。平均回收率为 101.44%0,RSD一1.7 。本方法操作 简单,重复性好,结果准确,可以控制本制剂质量。 关键词: 牛黄解毒片;人工牛黄;胆红素;HPLC 中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1002—7777(2008)09—0803—03 Determination of Artificial Bezoar in Niuhuang Jiedu Tablets By HPLC Huang Haiping and Shu Biqiong (Hunan Province Institute for Drug Control,Changsha 410001) ABSTRACT Method of determination of artificial bezoar in Niuhuang Jiedu Tablets Was established by HPLC.The Kromasil C1 8 column was used,and the mobile phase was composed of methanol—chloroform- O.1 phosphate solution (81:13:6)。The flow rate was 1.0 mL ·miff .The determined wavelength was 450nm.It showed a good linear correlation within the concentration of 0.00525~ 0.0525/xg,/-一0. 9998. The average recovery was 101.44 , RSD 一 1.7 . The method iS accurate, simple and reproducible.It can be used in the quality control of this preparation. KEY WORDS Niuhuang Jiedu Tablets;artificial bezoar;bilirubin;HPLC 牛黄为牛科动物牛干燥的胆结石,为名贵中药 材,具有极高的药用价值,但来源稀少。为了缓解 天然牛黄药源短缺,我国药学工作者根据天然牛黄 的成分,成功地研制出人工牛黄_1]。目前,大部分 中成药制剂中都是用人工牛黄替代天然牛黄,牛黄 解毒片也不例外。胆红素是人工牛黄中的主要成分 之一,其含量可作为人工牛黄品质优劣的依 据,本文对胆红素定量测定方法进行研究。结果 明,供试品在高效液相色谱图中分离效果好,阴性 样品溶液对测定无干扰,方法简单,重复性好。 1 仪器与试药 Water515高效液相色谱仪 (Waters一717自动 进样器;Waters一2487紫外检测器;N一2000色谱工 作站;AT-132恒温柱箱);电子天平 (AE一240); 超声波发生器CG300(功率 300W,频率 25KHz); UV-2401PC紫外分光光度计。 胆红素对照品 (中国药品生物制品检定所 ,供 含量测定用,批号:100077—2003301)。牛黄解毒 片样品 (××制药公司生产,批号:2120016;其 他 33个厂家 51批样品,见表 2)。甲醇为色谱纯 试剂 ,水为重蒸馏水,其它试剂、试药均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色 谱 柱:Kromasil C18(4.6mm × 250mm, 5/~m);流动相:甲醇一三氯甲烷一0.1 磷酸溶液(81 :13:6);检测波长:450nm;流速:1.0mL·min ; 灵敏度:0.5AUFs;柱温:25℃。进样量:供试 品溶液 5~10/xL,对照品溶液 IO/~L。在选定的色 谱条件下,胆红素色谱峰与其他杂质峰达到基线分 离,分离度大于1.5,理论板数按胆红素色谱峰计 算,不低于 2000。 2.2 对照品溶液的配制 精密称取经五氧化二磷减压干燥 24小时的胆 红素对照品适量,加三氯 甲烷制成每 1mL中含 作者简介 :黄海萍,研究生,副主任药师;Tel:(0731)2275846;E-mail:HHP一6810@yahoo.corn.cn 维普资讯 http://www.cqvip.com 804 中国药事 2008年第22卷第 9期 5fig的溶液,作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的配制 取本品 20片,除去包衣,精密称定,研细, 取约 0.5g,精密称定,置 25mL棕色量瓶中,精 密加入三氯甲烷一甲醇一盐酸一水 (400:98:0.3: 1.7)溶 液 10mL,称定重量,超声处理 (功率 300W,频率 25KHz)20min,放冷,称定重量, 加三氯 甲烷一甲醇一盐酸一水 (400:98:0.3:1.7) 溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。 2.4 空白干扰试验 按牛黄解毒片处方称取除人工牛黄外的其余药 材,按制备工艺方法制备缺人工牛黄的阴性样品, 按上述供试品溶液制备方法制成缺人工牛黄的阴性 样品溶液。取此溶液 10ffL注入液相色谱仪,记录 色谱图,结果表明阴性样品溶液色谱图中在与胆红 素对照品色谱峰相应位置未出现色谱峰,说明阴性 样品无干扰。结果见图 1。 a.对照品 ;b.样品 ;C.阴性样品 ;i.人工牛黄 。 图 I 牛黄解毒片 HPLC色谱图 2.5 线性关系考察 精密吸取浓度为 5.25fig·mL 的胆红素对照 品溶液 1,2,4,6,8,10ffL注入液相色谱仪, 测定其峰面积积分值,以进样量为横坐标,峰面积 积分值为纵坐标,绘制曲线,其回归方程: A一 2.4133088×10 C一 1.5309×100 r一0.9998 结果表明胆红素对照品在 0.00525~0.0525fig范 围内具有良好的线性关系。 2.6 精密度试验 精密吸取同一份供试品溶液 (批号:2120016) 各 10ffL,重复进样 6次,记录其峰面积积分值, 峰面积积分值 RSD=0.66 9/6。 2.7 稳定性试验 分别精密吸取 同一份供试品溶液 (批号: 2120016),放置 0,2,4,6,8,10h后进样各 10t~L,测 定,记录峰面积积分值,峰面积积分值的 RSD一 0.58 9/6,结果表明,供试品溶液在 10h内基本稳定。 2.8 重复性试验 取同一份样 品 (批号:2120016)6份,按含 量测定方法测定 ,计算含量,结果平均含量为 60.03fig·g-1,RSD一 0.47 。 2.9 回收率试验 分别精密称取已知含量为 59.79fig·g- 的样品 (批号:2120016)0.25g(6份),分别精密加入胆 红素 对 照 品 溶 液 (5.25fig ·mL )3mL,即 15.75ug,按上述含量测定项下的方法测定含量, 结果见表 1。结果表明,本方法加样回收率好 (样 品进样量约为 0.03fig,均在线性范围内)。 表 1 回收率测定结果 2.10 样品测定 按拟定的含量测定方法测定 33个厂家 51批样 品中胆红素的含量,结果见表 2。 表 2 牛黄解毒片中胆红素测定结果 7, ● 4 4 ● l O l 3 9 l 5 3 1 5 1 8 1 5 4 ● ● ● ● ● ● 4 1 0 9 1 1 O O O 9 O O 1 l 1 1 1 9 8 9 4 8 5 4 8 4 9 6 5 1 6 8 7 O 8 1 O 7 4 8 9 ● ● ● ● ● ● 3 2 9 O 1 0 3 3 2 3 3 3 5 5 5 5 5 5 7 7 7 7 7 7 ● ■ ● ■ ● ● 5 5 5 5 5 5 11 1i l 11 1 1 5 3 1 8 1 2 1 1 7 3 2 3 5 3 O 6 4 1 6 1 9 8 3 0 ● ● ● ● ● ● 6 6 3 4 5 5 1 l 1 1 1 1 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药事 2008年第 22卷第 9期 805 (续表 2) 3 讨论 3.1 测定波长的选择 取胆红素对照品适量加三氯甲烷使溶解,取此 溶液在 UV-2401PC紫外分光光度计上,于 200~ 700nm 波 长 范 围 内扫 描 测 定。结 果 表 明:在 450nm波长处有最大吸收,与文献报道[。{ 的测定 波长相符,故将测定波长确定为 450nm。 3.2 人工牛黄的提取 中成药品种中人工牛黄含量极少,牛黄解毒片 中每 1500片含人工牛黄仅 5g,按 《卫生部药品标 准中药成方制剂》第十七册 “人工牛黄”胆红素 “含量测定”项下的限度 0.63 折算,牛黄解毒片 每 1片含胆红素仅 21 g,且胆红素对光、热均不 稳定 _4]。本文选用高效液相色谱法测定胆红素含 量,灵敏度高,提取方法简单,测定时间短,样品 处理过程避免了加热浓缩的过程,能快速、准确地 测定牛黄解毒片中胆红素含量。 3.3 提取溶剂的选择 参照文献l5_6_的提取方法,分别采用三氯甲烷、 三氯甲烷一甲醇 (3:1)、三氯甲烷一甲醇一盐酸一水 (4OO:98:0.3:1.7)作为提取溶剂,对同一批号 的样品进行测定,结果:用三氯甲烷与三氯甲烷一 甲醇 (3:1)作提取溶剂,含量均较低,三氯甲烷 一 甲醇一盐酸一水 (400:98:0.3:1.7)作提取溶剂, 含量较高,故采用三氯甲烷一甲醇~盐酸一水 (400: 98:0.3:1.7)作为提取溶剂。 3.4 提取时问的选择 按提取方法,对同一批样品,分别超声处理 (功率300W,频率25KHz)20,30,40min,进行 测定,结果:超声处理 20min,已将样品中胆红素 基本提取完全,考虑胆红素对光与热都不稳定,提 取时间不宜过长,故采用超声处理 20min为宜。 3.5 测定结果表明 用拟定的方法对全国 33个不同厂家的51批样 品进行测定,结果表明,将近八成的产品胆红素含 量达不到理论值。不同厂家的样品,胆红素含量有 显著差异,而同一厂家不同批次的样品,含量也有 显著差异,这能从侧面反映生产厂家生产工艺的稳 定性及投料用人工牛黄原料质量优劣。希望各生产 厂家加强质量管理,确保产品的质量,确保药品的 安全有效。 参考文献: [1] 董润生 .人工牛黄的主要药效作用 [J].中药新药与临床 药理,1996,7(1):51. Ez] 杨准 .高效液相色谱法测定速效牛黄丸中胆红素含量 _J]. 沈阳药学院学报,1993,10(2):94. [3] 杨云沛 .人工牛黄及天然牛黄中胆红素的 HPLC测定方法 研究 [J].天津药学,1995,7(2):15. [4] 姬胜利 .不同工艺胆红素异构体的测定及抗氧性 [J].山 东医科大学学报,1992,4(12):335. [5] 吴天龙 .测定胆红素含量两种方法的比较 EJ].中草药, 1991,22(7):303. E6] 林光煌 .高效液相色谱法测定片仔癀中胆红素含量 [J]. 中成药,l995,17(5):12, [7] 杨跃龙,覃薛文.HPLC法测定磺啶冰黄片中胆红素的含量 _J].湖南中医药大学学报,2007,27(5):49. [8_ 梁云霞,李杰滨,谭秀敏,等.高效液相色谱法测定氨咖黄 敏片中胆红素的含量 EJ].中国卫生检验杂志,2007,17 (7):1233. E9] 张宝珍,龚玲.TLC鉴别复方制剂中人工牛黄 Eli.中国 药品标准 ,2006,7(6):56. [1O] 方建国,王文清,蒋平,等.反相高效液相色谱法测定体 外培育牛黄 中胆红素 的含量 [J].医药导报 ,2006,25 (7):694. [¨ ] 傅黎春,李桃英,刘映,等.HPLC法测定牛黄消炎灵胶 囊中胆红素的含量 [J].中国药事,2006,20(6):360. E12] 卫生部药品标准 [S].中药成方制剂 .第十七册,1998. 维普资讯 http://www.cqvip.com
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