牛黄解毒片中人工牛黄的薄层鉴别

·26· 中药与临床PharmacyandClinicsofChineseMateriaMedica2010；1(3) 牛黄解毒片中人工牛黄的薄层鉴别 兰婉玲，张罗红，徐燕 ·炮制制剂· [摘要]目的：探讨牛黄解毒片中贵细药人工牛黄中胆红素的薄层鉴别方法。方法：将薄层鉴别的供试液点于以羧甲 基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)一三氯甲烷一甲酸乙酯一甲酸(20：3：5：1)的上层溶液为展 开剂展开，晾干，置紫外灯(365)下检视。结果：供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上均显示相同颜色的斑点。结论： TLC法鉴别牛黄解毒片中人工牛黄重复性好、专属性强，可作为牛黄解毒片中人工牛黄胆红素的鉴别方法。 [关键词]牛黄解毒片；胆红素；薄层鉴男l】 [中图分类号]R286．0 [文献标识码]A [文章编号]1674—926X(2010)03—0026—01 ‘ IdentificationofartificialbezoarinNiuhuangjiedutabletbythin-layerchromatography／LANWan- ling，ZHANGLuo一如昭，XUYan／／(SichuanInstituteforFoodandDrugControl，Chengdu610097，China) [Abstract]Objective：ToestablishamethodfortheidentificationofbilimbininartificialbezoarinNi— uhuangjiedutabletbythin—layerchromatography(TLC)．Method：Themixtureofpetroleumbenzin，chloroform， ethylformateandformicacid(20：3：5：1)wasusedasthedevelopingsolvent．Andthesampleswereobservedat 365amunderviltalightlamp．Result：Thespotsinthechromatogramofthetestsolutioncorrespondingtotheposi— tionofbilirubinhadthesamecolorasthestandardchromatogram．Conclusion：Themethodisaccuratewitha goodsensitivityandreproducibility，canbeusedfortheidentificationofbilirubininartificialbezoarinNi— uhuangjiedutablet． [Keywords]Niuhuangjiedutablet；bilirubin 牛黄解毒片收载于《中国药典>>2005年版一部，由 人工牛黄、大黄等八味药材经提取制成的复方制剂， 具有清热解毒之功效，用于火热内盛，咽喉肿痛，牙龈 肿痛，口舌生疮，目赤肿痛。现行中，仅对人工牛 黄中的胆酸进行薄层鉴别，对人工牛黄中价格较贵的 胆红素未进行控制，为更好地控制产品质量，我们采 用TLC法鉴别人工牛黄中的胆红素。 1材料与方法 1．1材料 人工牛黄对照药材和胆红素对照品(中国药品生 物制品检定所)；牛黄解毒片样品370批，其余试剂均 为分析纯。 1．2方法 1．2．1供试品溶液的制备 取本品小片20片或大片13片(包衣片除去包 衣)，研细，加石油醚(30—60℃)一乙醚(3：1)的混合 溶液30mL，加10％亚硫酸氢钠溶液l滴，摇匀，超声 [作者单位]lⅡl／wI省食品药品检验所，四川成都610097 [作者简介]兰婉玲，女，本科，主管药师，从事药品及医疗器械 检验Tel：028-87877185 [收稿日期]2010-06-14 处理5分钟，滤过，弃去滤液，滤纸及滤渣置90℃水浴 上挥约3分钟，加三氯甲烷30mL，超声处理15分钟， 滤过，滤液置90℃水浴上蒸至近干，放冷，残渣加=三 氯甲烷一甲醇(3：2)的混合溶液lmL使溶解，离心，取 上清液作为供试品溶液⋯。 1．2．2对照药材及对照品溶液制备 取人工牛黄对照药材20mg，加三氯甲烷20mL， 加10％亚硫酸氢钠溶液l滴，摇匀，自“超声处理15 分钟”起，同法制成为对照药材溶液。另取胆红素对 照品2mg，加三氯甲烷10mL，加10％亚硫酸氢钠溶 液1滴，摇匀，超声处理15分钟，滤过，滤液置90℃水 浴上蒸至近干，残渣加三氯甲烷一甲醇(3：2)混合溶 液lmL使溶解，取上清液作为对照品溶液【2]。 1．2．3试验方法 吸取上述供试品溶液及对照药材、对照品溶液各 5出，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的 硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)～三氯甲烷一 甲酸乙酯一甲酸(20：3：5：1)的上层溶液为展开剂，展 开，取出，晾干。 2 结果 置El光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色 (下转第33页) 万方数据 中药与临床PharmacyandClffticsofChineseMateriaMedwa2010；1(3) ·33· 学药物不可替代的作用，且毒副作用相对较小，故有 良好的应用和开发前景Hj。 Toll样受体(Toll—likereceptors，’ILRs)是近年新 发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子，TLR能够对 病原体进行识别、结合，引发一系列信号间的转导，促 进各种炎性介质的释放，在早期启动固有免疫应答， 对宿主的天然免疫防御具有重要作用。在TLR与天 然免疫应答关系的研究中，倍受关注的是rIIJR，和 TLR。；其中TLR2具有相对广泛的配体特异性，在非感 染性组织损伤以及组织修复的过程中发挥重要作用， 是天然免疫与获得性免疫间的桥梁"J。肿瘤坏死因 子受体相关因子(TRAFs)是肿瘤坏死因子TNF超家 族和Toll样／白细胞介素一l受体(Toll／IL一1receptor， Tm)超家族重要的接头分子，目前已在哺乳动物体内 鉴定出6种TRAF分子，它们分别是TRAF。、TRAF2、 TRAF，、TRAF4、TRAF，，TRAF6。这些TRAF分子作为 细胞内信号传导通路上的关键接头分子，在天然免疫 及获得性免疫中发挥重要作用，其中研究较多的是 TRAF6。TRAF6是在MyD88依赖的信号传导途径中 必需的连接分子；可通过呼吸链途径介导天然免疫和 炎性反应，还可调控天然免疫对后续的细胞免疫的影 响旧j。Fas，又名CID5或APO一1，属于肿瘤坏死因子 受体(TNFR)和神经生长因子受体(NGFR)家族。机 体中许多组织细胞可达或经激活诱导表达Fas，以 免疫系统的表达最丰富。Fas介导T和B淋巴细胞的 凋亡，在这些细胞的早期分化发育和维持机体免疫平 衡中起主要作用¨J。 本实验采用的蚁附蠲痹超细微粉是以“乌头汤”为 基础，结合现代中药药理学的研究成果优化组成的临床 治疗类风湿性关节炎的处方，用完全弗氏佐剂(FCA)造 成佐剂性关节炎大鼠模型，并对各组1’LR／11RAF／FI舾3 种基因mRNA表达水平的倍数变化进行测定。结果表 明，蚁附蠲痹超细微粉各剂量均有较好的降低这三种基 因表达的作用，提示其可通过降低三种基因的表达而表 现出较好的抗炎效果。本实验仅对部分基因进行检测， 其余抗炎机制还有待进一步研究。 [参考文献] [1]JacobsonPB，BorganSJ，WilcoxDM，eta1．Anewspinonall oldmodel：invivoevehationofdiseaseprogressbymagnet— icl七sonanceimagingwithrespecttostandardintlmnmatory parametersandhistopthologyinadjuvantarthriticrat[J]． ArthritisRheum，1999，42(10)：2060． [2]朱辟疆．类风湿性关节炎肾脏损害[J]．浙江中西医结合 杂志，2003，13(1)：1． [3]王爱武，刘丽娟，张薇．超微粉碎对当归散镇痛免疫作用 的影响[J]．医药导报，2003，22(3)：149． [4]田吉，雷素娟，何兵．中医药治疗类风湿性关节炎的概况 [J]．时珍国医国药，2006，17(3)：416． [5]孙守勋，蒲晓允．Toll样受体2的研究进展[J]．重庆医 学．2008，37(5)：533． [6]王桂芹，邓国华．李书华．TRAF，和TRAF6在天然免疫中 的作用[J]．畜牧兽医科技信息，2006，4(5)：4． [7]张柏林，张保宁．Fas及Fas配体基因多态性与肿瘤发生 风险的关系[J]．中华乳腺病杂志，2009，3(3)：53． (责任编辑：陈思敏) (上接第26页) 谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显 相同的黄色斑点及荧光斑点；加热后，日光下检视，斑 点变为绿色(图片见封三)。370批牛黄解毒片，检出 人工牛黄中胆红素326批，占总批数的88．1％。 3讨论 3．1胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳 及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。由于本品中含有冰片， 直接采用三氯甲烷浓缩后，进行点样展开，供试品色 谱中由于其他成分的影响，导致供试品色谱中胆红素 的Rf值偏高，因此，供试品前处理采用石油醚脱脂处 理，同时采用加入10％亚硫酸氢钠溶液1滴，防止氧 化。 3．2牛黄解毒片中，大片每片含人工牛黄5mg，小片 每片含人工牛黄3．3mg，由于提取方法的影响，小片 取样量为lO片时，供试品色谱中胆红素的斑点可检 出，但日光下胆红素黄色斑点照片不明显，因此小片 取样量增加为20片，大片为13片。 3．3胆红素不稳定，对照品制备中，需10％亚硫酸氢 钠溶液1滴，防止氧化。同时操作过程注意避光。 3．4该方法简便、重现性好，可用于牛黄解毒片的质 量控制，现已收入《中国药典)2010年版一部。 [参考文献] [1]王文琼，刘颖，高华宏，等．牛黄解毒片等四种制剂中牛 黄的薄层鉴别[J]．湖北中医杂志，2004，26(2)：51． [2]汤新兰．牛黄解毒片中大黄鉴别方法的探讨[J]．海峡药 学，2008，20(3)：86． (责任编辑：杨再国) 万方数据 ●■●■●● ·●·●-● -IP●‘ ■ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11’213 照片1人工牛黄薄层色谱图(紫外光灯365nm) ■ 5 6 7 8 9 10”1213 工牛黄薄层色谱图(日光) 淹歪；；jll：二1．!：： 1 2 3 4 5 8 7 8 9 10 11 12 13 照片3^工牛黄薄层色谱图(加热后，日光 八∥F黄时照药制2、担红素对照品3～l2、Io抛样l3、缺^l。牛黄州性 ■●．_●t●．-．t●-，●● 万方数据 牛黄解毒片中人工牛黄的薄层鉴别 作者： 兰婉玲， 张罗红， 徐燕， LAN Wan-ling， ZHANG Luo-hong， XU Yan 作者单位： 四川省食品药品检验所,四川,成都,610097 刊名： 中药与临床 英文刊名： PHARMACY AND CLINICS OF CHINESE MATERIA MEDICA 年，卷(期)： 2010,01(3) 参考文献(2条) 1.汤新兰 牛黄解毒片中大黄鉴别方法的探讨[期刊论文]-海峡药学 2008(03) 2.王文琼;刘颖;高华宏 牛黄解毒片等四种制剂中牛黄的薄层鉴别[期刊论文]-湖北中医杂志 2004(02) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zyylc201003010.aspx