西咪替丁对大鼠体内氯硝西泮药动学的影响

at it is B virus�t ran sgen ic mice b y a marine organism , Styela pli� cata[ J] . World J Gast roenterol, 2006, 12( 25) : 4038�4043. [ 7] � 杜平.医学实验病毒学[ M ] .北京:人民军医出版社, 1985: 106� 109. [ 8] � 耿越,张薛,赵相轩.海鞘类天然产物的最新研究进展[ J ] .天然 产物研究与开发, 2002, 13( 6) : 73. [ 9] � Yovin e A, Riof rio M , Blay JY, e t al . Phase II study of ectein� as cidin�743 in advanced pret reated s of t tis sue s arcom a pat ients [ J] . J Clin Oncol, 2004, 22( 5) : 890�899. [收稿日期] 2009�09�03 [基金项目] 上海市临床药学研究基金 � [作者简介] 顾纪锋,男,硕士,药师,电话: 021� 64377134�103, E�mail: gujif eng1949@126. com 西咪替丁对大鼠体内氯硝西泮药动学的影响 顾纪锋,陈念祖,闫晶超, 黄滔敏,王东蕾,赖永华 � (复旦大学附属眼耳鼻喉科医院药剂科, 上海 200031) [摘要] � 目的:研究西咪替丁对氯硝西泮在大鼠体内药动学的影响, 为临床合理用药提供参考。: 12 只大鼠随机分为对 照组(生理盐水组)和试验组(西咪替丁组 ) , 对照组每日腹腔注射生理盐水0 . 4 mL� kg - 1 , 试验组每日腹腔注射西咪替丁 80 mg�kg - 1 ,持续 7 d 后, 2 组大鼠禁食 12 h 后均口服给予氯硝西泮 2 mg�kg- 1 ,于给药后不同时间点采集血样, 以高效液相色 谱�质谱/质谱法( LC�MS/ MS)测定氯硝西泮血药浓度, 采用 DAS 软件计算药动学参数, 以 SPSS 软件对组间各参数进行统计 。结果:试验组的峰浓度 Cmax、t1 / 2及曲线下面积 AUC0 ! 明显大于对照组(P< 0. 01 ) , 表观清除率 CL/ F 则明显小于对照 组(P< 0 . 01)。结论:西咪替丁对大鼠体内氯硝西泮药动学有影响, 二者合用时有可能产生药物相互作用, 应注意剂量的调 整。 [关键词] � 氯硝西泮;西咪替丁; 高效液相�质谱/质谱法; 药动学相互作用 [中图分类号] R969. 2 � � [文献标识码] A � � [文章编号] 1001�5213( 2010) 10�0831�04 Effect of cimetidine on the pharmacokinetics of clonazepam in rats GU Ji�feng , CHEN N ian�zu, YAN Jing�chao, HU ANG T ao�min, WANG Dong�lei, LAI Yong�hua( Depar t� ment of Medicament, Eye and ENT H ospital of Fudan Universit y, Shanghai 200031, China) ABSTRACT:OBJECTIVE� To investig ate the effect o f cimet idine on the pharmacokinetics of clonazepam in r ats. METHODS� Twelve r ats w ere r andomly divided into tw o gr oups: contro l g roup and test g roup, w hich were r espectively administ rated 0 . 9% saline solution 0 . 4 mL�kg- 1�d- 1 and cimetidine 80 mg�kg- 1�d- 1 through int raperitoneal injection for 7 days. A fter the r ats wer e fasted for 12 h, clonazepam ( 2 mg�kg- 1 ) was given t hr ough intr a�gastr ic g avage and blood samples w ere collected at dif� fer ent t ime. T he concentr ations of clonazepam plasma w ere determined by an LC�MS/ MS method. Pharmacokinet ic parameter s wer e est imated by a non�compar tment al met hod from the plasma concentr ation�time dat a w ith the aid of the pro gr am DAS. Sta� t istical analy sis w as perfo rmed w ith SPSS softw are. RESULTS� Cmax , t1/ 2 and AUC0 ! of clonazepam in test gr oup were signif� icantly higher than that in contr ol gr oup, and CL/ F w as significantly lower than contro l g r oup ( P< 0 . 01 ) . CONCLUSION � Cimetidine could affect the pharmacokinetics of clonazepam, so it is necessar y to change the therapeutic dose of clonazepam when clonazepam w as co�administer ed w ith cimetidine. KEY WORDS: clonazepam; cimetidine; LC�M S/ MS; pharmacokinetic inter act ion � � 氯硝西泮( clonazepam ) 是一种高效价苯二氮 芯卓类药物, 具有良好的抗癫痫、抗惊厥作用, 但治 疗指数窄, 其有效血药质量浓度为 15 ~ 70 ng� mL- 1 ,当血药质量浓度超过 100 ng�mL- 1时即可 能出现行为异常等严重不良反应 [ 1] ; 其在体内主 要通过肝脏代谢, 代谢产物以游离或结合形式经 尿排出 [ 2]。 西咪替丁为 H2受体拮抗剂,具有明显抑制胃酸 分泌的作用,但同时能够抑制肝脏药物代谢酶的活 性和减少肝血流量, 所以当与其他主要经肝脏代谢 灭活的药物联用时, 可使这些药物的代谢和清除减 慢、血药浓度升高,尤其与安全范围小的药物联用, 可产生严重的不良反应 [ 3�4]。临床上常有患者合用 氯硝西泮和西咪替丁,而目前相关影响的实验研究 未见报道。本试验通过采用高效液相色谱�质谱/质 谱( LC�MS/ M S)法测定血浆中氯硝西泮的浓度, 探 讨西咪替丁对其药动学的影响, 为临床合理地联合 用药提供理论依据。 1 � 材料 Ag ilent HP1200 高效液相色谱仪系统, AB 公 �831�中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2010 May, Vol 30, No. 10 司 API 4000质谱系统;氯硝西泮(中国药品生物制 品检定所, 批号 171227�200302 , 纯度> 99%) , 内 标: 地西泮 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 171225�200302,纯度> 99% ) ;西咪替丁注射液 (上 海第一生化药业有限公司, 批号 070101 ) ; SD 大鼠, ∀ # 兼用,体质量 240~ 290 g, 由上海中医药大学实 验动物中心提供, 动物许可证号: SCXK (沪 2007� 0005 )。 2 � 方法与结果 2. 1 � 色谱条件 � 色谱柱: Dikma ODS�C18柱 ( 150 mm ∃ 4. 6 mm, 5 �m) ; 流动相: 0. 1% 甲酸水溶液 (含 4 mmo l�L- 1醋酸铵)�乙腈( 13%87) ; 流速: 0 . 6 mL�min- 1 ;柱温: 40 & 。 2. 2 � 质谱条件 [ 5] � API 4000 质谱系统。离子源: 电喷雾离子化源( ESI) ; 离子喷射电压: 5 500 V; 离 子源温度: 600 & ; 气帘气体(氮气) : 25 unit ; 离子 源气体(氮气) GAS1: 55 unit; 离子源气体 (氮气) GAS2: 65 unit; 碰撞气CAD: 5 unit ;氯硝西泮和内 标的碰撞能量 CE 分别为35 . 2, 54. 3 eV; 正离子方 式;扫描方式为多反应监测( MRM ) ; 用于定量 的离子反应分别为 316 . 0 270 . 0 (氯硝西泮 ) 和 285. 1 193. 2(内标)。 2. 3 � 血浆样品预处理 � 取血浆 50 �L, 加入内标 ( 0. 2 �g�mL- 1的地西泮 10 �L ) , 混匀, 加入0. 15 mL 乙腈混匀, 离心 ( 16 000 r�min- 1 ) 10 min, 取上 清液进样 10 �L 分析。 2. 4 � 方法学考察 2. 4. 1 � 专属性 � 空白血浆、加入氯硝西泮溶液 和内标溶液的空白血浆、给药后血浆样品各 50 �L,按 ∋ 2. 3(项下方法操作,见图 1。结果表明, 大鼠血浆内 源性物质和代谢物不干扰氯硝西泮的测定。氯硝西 泮和内标的保留时间分别为2. 9, 4. 0 min。 2. 4. 2 � 线形范围及定量限 � 取空白血浆 50 �L, 加 入内标( 0 . 2 �g�mL- 1的地西泮 10 �L) ,分别加入 5 �L 不同浓度氯硝西泮标准溶液, 使质量浓度为 0. 25 , 0. 5 , 1. 0, 2. 0 , 8. 0, 32. 0, 128 . 0 ng�mL- 1。按 ∋ 2. 3( 项下操作, 进样 10 �L, 记录色谱图。以待测 物浓度为横坐标,待测物与内标物色谱图的峰面积 比值为纵坐标, 用加权最小二乘法进行回归运算求 得直线回归方程。氯硝西泮在大鼠血浆中的线性范 围为0. 25~ 128 ng�mL- 1 , 最低定量限为0. 25 ng� mL- 1 ,标准曲线为: Y = 0. 047 7+ 0. 871C (w = 1/ c/ c) , r= 0. 992 4。 2. 4. 3 � 准确度、精密度及回收率 � 配制含氯硝西泮 低、中、高( 0. 5, 2. 0 , 128ng�mL- 1 ) 3个质量浓度的 图 1 � 大鼠血浆中氯硝西泮测定图 A.空白血浆; B.空白血浆加氯硝西泮和内标; C.大鼠 2 m g�kg- 1灌 服氯硝西泮后血浆样品; 1�氯硝西泮; 2�内标 Fig 1 � Representat ive mult iple r eact ion m oni torin g ( MRM ) chro� matograms A. a blank plasm a sam ple; B. a blank plasm a sample spiked w ith clonazepam ( 8 ng�mL- 1 ) an d IS; C. a plasma sample f rom a rat af ter an oral adm inist ration of 2 m g�kg- 1 clonaz epam; 1� clonazepam; 2�IS 质量控制样品各 5份, 按∋ 2 . 3(项下操作, 连续 3 d, 日内氯硝西泮的准确度为98. 0% ~ 104. 7% ,精密度 < 12. 0% ; 日间的准确度为97. 4% ~ 101. 8%, 精密 度< 13 . 1% ;测得低、中、高 3 个浓度氯硝西泮提取 回收率分别为84. 2%, 71. 0%, 84 . 1%。 2. 4. 4 � 稳定性 � 配制含氯硝西泮低、中、高( 0. 5, 2. 0 , 128 ng�mL- 1 ) 3个质量浓度的质量控制样品, 分别在室温放置 8 h、- 80 & 冻存 14 d,在自动进样 器( 4 & )中放置 12 h, 测定准确度与精密度。结果 氯硝西泮准确度为 99 . 3% ~ 114 . 9% , 精密度< 15% ,表明在此试验条件下氯硝西泮稳定性良好。 2. 4. 5 � 基质效应 � 氯硝西泮在低、中、高质量浓度 ( 0. 5, 2. 0, 128 ng �mL- 1 ) 的基质效应分别为 103 . 1% , 94. 4%, 99. 0%。结果表明, 血浆中内源性 基质不干扰氯硝西泮的测定。 2. 4. 6 � 方法学质量控制 � 在生物样本分析方法确 证完成以后开始测定未知样品, 每个分析批生物样 品测定时建立新的标准曲线, 并进行低、中、高 3个 浓度双样本质控样品分析, 将质控样品 CV< 15% 作为当日数据是否接受的标准。 2. 5 � 给药 � 12 只大鼠随机分为对照组(生理 �832� 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2010 May, Vol 30, No. 10 盐水组)和试验组(西咪替丁组) , 每组 6 只, 对照组 每日腹腔注射生理盐水0. 4 mL�kg - 1 , 持续 7 d; 试 验组每日腹腔注射西咪替丁 80 mg�kg- 1 ,持续 7 d, 2组大鼠禁食 12 h 后均灌胃给予氯硝西泮 2 mg� kg - 1 ,于给药后0. 25, 0. 5, 1 , 1. 5, 2 , 3, 4, 6 , 12 , 24, 48 h取血,肝素抗凝制备血浆, - 80 & 保存,按血浆 中氯硝西泮成分检测方法测定。 2. 6 � 数据分析 � 血浆经 LC�MS/ M S 测定获得氯 硝西泮与内标峰面积比值, 由随行标准曲线计算出 氯硝西泮的血药浓度。血药浓度�时间数据采用统 计矩法经 DA S 2. 0软件进行药动学分析, 计算药动 学参数。数据用 �x ) s表示, 组间差异用 t检验进行 统计分析。 2. 7 � 血浆氯硝西泮浓度经时变化 � 试验组大鼠和 对照组大鼠灌服给予氯硝西泮 2 mg�kg- 1在0 . 25~ 48 h 各时间点均可在血浆中检测到氯硝西泮, 其血 药浓度�时间曲线见图 2。 图 2 � 大鼠灌服氯硝西泮后对照组和试验组平均血药浓度�时间曲 线( �x ) s, n= 6) ∗ + ∗ 对照组; ∗ , ∗ 试验组 Fig 2 � Mean ( ) SD) plasm a con cent rat ion�t im e prof iles of clon aze� pam in rat s ( n= 6) f ol low ing an oral adm inist ration of 2 mg� kg- 1 clonazepam ∗ + ∗ cont rol group; ∗ , ∗ t es t group 2. 8 � 药动学参数 � 与对照组相比,试验组大鼠体内 氯硝西泮的 AU C0�t、AU C0� ! 和 Cmax显著增高( P< 0. 01 ) , t1/ 2显著延长 ( P < 0. 01 ) , 清除率显著降低 ( P< 0. 01) ,见表 1。 表 1� 大鼠灌服氯硝西泮的药动学参数( �x ) s, n= 6) T ab 1 � Pharmacokinetic parameter s o f clonazepam after ig administr ation o f clonazepam( 2 mg�kg - 1 ) in r ats ( �x ) s, n= 6 ) 参数 对照组 试验组 AUC0�t /�g�L- 1�h 211. 9 ) 67. 4 362. 8 ) 87. 5a AUC0�! / �g�L- 1� h 217. 3 ) 71. 9 388. 4 ) 98. 2a CL / F/ L�h- 1�kg- 1 0. 01 ) 0. 004 0. 006 ) 0. 001a t1 /2 / h 9. 29 ) 1. 66 13. 05 ) 2. 62a tmax / h 0. 5 ) 0 0. 5 ) 0 Cmax / �g�L- 1 76. 8 ) 9. 8 116. 9 ) 7. 0a 注:与对照组比较, aP< 0. 01 3 � 讨论 由于氯硝西泮在血浆中的浓度较低, 采用 HPLC�UV法测定时, 杂质易干扰低浓度测定。为 保证临床大量且复杂生物样本分析的专属性和准确 性, 鉴于 LC�MS/ MS 法灵敏度高、具有二次分离作 用的优势。本试验建立了氯硝西泮大鼠血浆样本高 效液相色谱�质谱联用分析方法,该方法对氯硝西泮 ( 316. 0 270. 0 ) 及其内标 ( 285. 1 193. 2 ) 进行 MRM 监测,空白血浆无杂质干扰, 最低检测质量浓 度达0. 25 ng�mL- 1 ,可满足氯硝西泮血药浓度监测 的要求。 现代医学和药学的发展, 大大促进了患者的多 药并用, 随之而来的药物相互作用所致的不良反应 也日趋严重, 这已成为医师和药师必须认真考虑的 一个重要而又现实的问题。药物药动学相互作用可 发生在药物的吸收、分布、代谢和排泄 4个阶段, 其 中代谢性相互作用占 40%之多 [ 6]。 氯硝西泮进入机体后, 要经过两步代谢过程,首 先氯硝西泮经氨基转移酶的作用形成 7�氨基氯硝 西泮,然后 7�氨基氯硝西泮经乙酰化酶的作用转化 为 7�氨基乙酰氯硝西泮, 而氯硝西泮的 7�氨基代谢 所需的氨基转移酶是 CYP3A4 参与完成的 [ 7]。西 咪替丁为肝脏药物代谢酶的抑制剂, 可影响 CYP3A4和 2C19的活性 [ 8]。 因而合用氯硝西泮和西咪替丁时, 西咪替丁可 抑制机体对氯硝西泮的代谢能力, 从而导致氯硝西 泮的清除率下降。 在本试验中, 西咪替丁对氯硝西泮的 Cmax、 AU C、t1/ 2及 CL / F 均有影响。试验组氯硝西泮的 AU C较对照组提高了近 80% , 峰浓度升高了近 50% ,达到 116. 9 ng�mL- 1 , 半衰期延长了 40%, CL / F 则显著降低。氯硝西泮的治疗窗在 15~ 70 ng�mL- 1 ,超过 100 ng�mL- 1极有可能诱发癫痫的 发作频率 [ 1]。临床上,成人抗癫痫氯硝西泮的维持 量为 4~ 8 mg�d- 1 , 给药间隔为 6 h 左右。本试验 结果表明,若临床上患者合用氯硝西泮和西咪替丁, 必须调整给药剂量及给药间隔,适量降低给药剂量, 延长给药间隔,以达到合理用药, 防止不良反应的发 生。 参考文献: [ 1] � 陈刚.治疗药物监测[ M ] . 北京:人民军医出版社, 1998: 486. [ 2] � Negrus z A, Bow en AM , Moore CM . Eliminat ion of 7�amin� oclonazepam in urine after a single d os e of clonazepam [ J] . A� nal Bioanal Ch em, 2003, 376: 1198�1204. [ 3] � Levin e M , Jones M W, Sh eppard I. Dif feren tial ef fect of cimet i� dine on serum concent rat ions of carbamazepine and phenytoin [ J] . Neur ology, 1985, 35( 4) : 562�565. [ 4] � 林英.西咪替丁与其他药物的相互作用 [ J] . 现代医药卫生, 2005, 21( 23) : 3333� 3334. [ 5] � Jifen g Gu, Nianzu Chen , Jingchao Yan, e t al . LC�MS Meth od �833�中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2010 May, Vol 30, No. 10 f or the Quant ificat ion of Clonazepam in Rat Plasma[ J] . Chro� matograp hia, 70: 1709�1713. [ 6] � 孙忠实,朱珠. 药物代谢性相互作用研究进展[ J] . 药物不良反 应杂志, 2000, 2( 1) : 6�14. [ 7] � 王晓东,王丽. 红霉素对氯硝西泮药代动力学的影响及其机理 的研究[ J] . 中华儿科杂志, 2001, 39( 10) : 602�623. [ 8] � Park EJ, Ch o HY, L ee YB. Ef fect of Cimet idin e and Pheno� barb ital on metab ol ite kin et ics of Om eprazole in rat s [ J] . Arch Pharm Res , 2005, 28( 10) : 1196�1202. [收稿日期] 2009�07�30 [作者简介] 张立红,女,硕士,医师,电话: 0411�84412001�617, E�mail: zhanglihong5858@126. com � [通讯作者] 王苏平,男,硕士, 主任医师, 电话: 0411�84412001�617, E�mail: w an gsuping@m edmail. com. cn 脑出血微创抽吸术联合应用单唾液酸四己糖神经节苷脂对神经功能的 影响 张立红1 ,王苏平1 ,王晓红1 ,范铁平1 ,王晓东1 ,张健2 � ( 1 . 大连市中心医院神经内一科, 辽宁 大连 116033 ; 2 . 大连医 科大学脑疾病研究所,辽宁 大连 116027) [摘要] � 目的:探讨实验性脑出血微创抽吸术联合腹腔、血肿腔应用单唾液酸四己糖神经节苷脂( GM1 )对脑出血急性期神经 功能的影响。方法:将−型胶原酶注入 SD大鼠尾状核诱导形成脑出血 10 h 后, 向血肿腔内注入尿激酶溶解血凝块,实施微创 血肿抽吸术排出脑内血肿,通过对抽吸组、抽吸腹腔给药组、抽吸血肿腔给药组之间不同时间脑组织 caspase�3 , GFAP 免疫组 化检测,大鼠神经功能缺损评分, 对微创抽吸术联合 2 种途径应用 GM1 的神经功能影响进行评估。结果: 血肿腔、腹腔给药 组同抽吸组比较, 3 d( P< 0 . 05 )、5 d、7 d 的 caspase�3, GFAP 阳性细胞数及蛋白表达量明显减少, 尤其是 5 d、7 d 的减少更显 著(P< 0 . 01)。血肿腔给药组和腹腔给药组比较,前者 3 d( P< 0 . 05)、5 d、7 d 的 caspase�3 , GFAP 阳性细胞数及蛋白表达量 明显减少,尤其是 5 d、7 d 的减少更明显( P< 0 . 01 )。血肿腔、腹腔给药组同抽吸组比较, 3 d( P< 0. 05 )、5 d、7 d 的神经功能 恢复较显著,尤其是 5 d 和 7 d 神经功能恢复更显著( P< 0 . 01) ;血肿腔给药组和腹腔给药组比较, 前者的 3 d( P< 0. 05 )、5 d、 7 d 神经功能恢复显著, 5 d、7 d 差异更显著( P< 0 . 01 )。结论: 脑出血神经功能缺损可能与细胞凋亡和反应性星形胶质细胞 增生有关。单唾液酸四己糖神经节苷脂有抑制脑出血细胞凋亡和反应性星形胶质细胞增生作用。脑出血立体定向血肿抽吸 联用单唾液酸四己糖神经节苷脂局部血肿腔给药是实验性脑出血脑保护作用更经济、有效的治疗方案。 [关键词] � 单唾液酸四己糖神经节苷脂;脑出血; 微创抽吸术;神经组织; 神经功能缺损 [中图分类号] R969 � � [文献标识码] A � � [文章编号] 1001�5213( 2010) 10�0834�04 Experimental study on the effect of minimally invasive hematoma aspiration combining with the administration of monosialoganglioside on nervous function in rats ZHANG Li�hong1 , WANG Su�ping1 , WANG Xiao�hong1 , FAN Tie�ping1 , WANG Xiao�dong1 , ZHANG Jian2 ( 1. Dalian Central Hospital, Liaoning Dalian 116033 , China; 2. Research Institute of brain disease o f Dalian Medica l Uni� versity , L iaoning Dalian 116027, China) ABSTRACT:OBJECTIVE � To discuss the effect of minimally invasiv e hematoma aspiration combining with the administ ration of monosialog ang lioside( GM1) injected into per itoneal and hemat oma int racavit y on nervous function of acute stage or iginated by intracerebral hemo rrhage. METHODS� Intr acer ebr al hemor rhage w as induced by injecting − co llagenase into caudate nucleus of SD rats, and after ten hour s urokinase was injected into hemat oma intracavity to disso lv e clo t. H emat oma w as removed from intracavity by use of minimally invasiv e hemat oma aspirat ion. The effect of m inimally invasive hematoma aspiration combining with the administrat ion of mono sialo ganglio side ( GM1 ) o n nerv ous function was evaluated by determination o f defect of the ner vous function and immunohisto chemistr y of caspase�3 , GFAP in brain tissue during different time , among aspiration g roup, aspir ation combining with GM1 per itoneal inject ion g roup and aspiration combining w ith GM1 hematoma cav ity injection. RE� SULTS� Positiv e cells and prot ein express o f caspase�3、GFAP of hematoma cavit y gr oup、abdominal cavity gr oup w ere signifi� cantly decr eased compa red w ith aspiration g roup at 3 d ( P< 0 . 05 )、5 d、7 d, especially at 5 d、7 d ( P< 0 . 01 ) . H ematoma cav ity gr oup and abdominal cav ity gr oup were compared, po sitive cells and protein express of caspase�3、GFAP of the former were significantly decreased at 3 d( P< 0. 05 )、5 d、7 d, especially at 5 d、7 d ( P< 0 . 01 ) ; Neuro log ic functional r ecover y of hematoma cav ity gr oup、abdom ina l cav ity g roup was more significant compa red w ith aspir ation g roup at 3 d(P< 0. 05 )、5 d、7 d, especially at 5 d、7 d ( P< 0. 01 ) . Hematoma cavity gr oup and abdominal cavity g roup w ere com pared, neuro lo gic functional r ecovery of �834� 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2010 May, Vol 30, No. 10