第9章 生物碱类药物的分析

null第九章 生物碱类药物的 第九章 生物碱类药物的分析 生物碱（Alkaloids） 生物碱是生物体内含氮有机化合物的总称null典型药物的结构 nullnullnullnullnullnullnullnull二、生物碱类药物的通性 二、生物碱类药物的通性 1. 碱性 季铵碱＞脂肪胺、脂环胺＞芳胺、N—芳杂环＞酰胺 小檗碱＞麻黄碱、阿托品＞罂粟碱＞咖啡因 吗啡具酸碱两性 null2. 溶解性 游离生物碱不溶或难溶于水，能溶或易溶于有机溶剂，在稀酸中成盐而溶解 生物碱盐类易溶于水，不溶于有机溶剂 null3. 旋光性 一般多为左旋体有效。 一、一般鉴别反应一、一般鉴别反应（一）熔点测定法 （二）沉淀反应 第二节 鉴别试验 null常用的生物碱沉淀试剂为： 1. 重金属盐类，如K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞等； 2. 大分子酸类，如磷钼酸、硅钨酸等。null（三）显色反应 常用的显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、硒硫酸、甲醛硫酸等null（四）UV （五）IR（六）色谱法 1. HPLC 2. TLCnull 硅胶为吸附剂：游离生物碱能顺利迁移，生物碱盐类吸附太牢，造成严重拖尾。 解决： （1）在展开剂中加少量的碱性试剂，如氨、二乙胺、有机脂烃胺类； （2）硅胶板用碱处理 null二、特征鉴别反应 （一）双缩脲反应 侧链具有氨基醇结构 null（二）Vitali反应 托烷生物碱 null（三）绿奎宁反应 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁null（四）紫脲酸胺反应 黄嘌啉类生物碱 null（五）Marquis反应 吗啡生物碱 null（六）Frohde反应 吗啡生物碱 null（七） 官能团反应 吲哚生物碱 1. 利血平 + 新制香草醛→玫瑰红色null（八）还原反应 吗啡与磷酸可待因的区分反应 null第三节 特殊杂质检查 特殊杂质检查主要根据药物与杂质的理化性质差异来进行。null 利用药物和杂质在颜色、溶解行为、旋光性质、对光吸收选择性等物理性质上的差异，检查杂质是否符合限量规定一、物理法null 利用药物与杂质在挥发性、臭味等方面的差异进行检查。（一）臭味及挥发性的差异ChP（2000） 麻醉乙醚中异臭的检查 取本品 10ml，置瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。null（二） 颜色的差异ChP（2000） 盐酸阿扑吗啡 [检查] 分解产物 取本品 0.10g，加无水氧化物的乙醚 5ml，振摇后，乙醚液只许显极淡的红色。null（三）溶解行为的差异 利用药物与杂质在溶解性方面的差异进行检查。如葡萄糖中糊精的检查。 null（四）旋光性质的差异ChP（2000） 硫酸阿托品 [检查] 莨菪碱 取本品，按干燥品计算，加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶液，依法测定（附录 Ⅵ E），旋光度不得过 –0.40°。null（五）对光吸收性质的差异——分光光度法null 利用药物与杂质在紫外吸收光谱方面的差异进行检查。 1. 紫外分光光度法 null 例1. 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量应为（ ） A. 0.1％ B. 0.5％ C. 0.04％ D. 0.06% E. 0.0002％nullnull 2. IR 用于药物中无效或低效晶型的检查。利用药物与杂质有特征峰差异进行检查。如甲苯咪唑中A晶型的检查、无味氯霉素混悬剂中A晶型的检查。 X—射线粉末衍射法 null 3. 原子吸收分光光度法 主要用于金属元素的检查，具有灵敏度高、选择性好等优点。如肝素钠中钾盐的检查。null（六）吸附或分配性质的差异—色谱法 1. TLC （1）杂质对照品法 （2）高低浓度对比法 null（3）参比杂质对照品法 选用可能存在的某种物质作为杂质对照品。 （4）选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为杂质对照品。 null2．纸色谱 用于极性较大药物中杂质的检查或放射性药物注射液（或溶液）中放射化学杂质的检查。如地高辛中洋地黄毒苷的检查。 缺点：展开时间长，斑点扩散，不能用强酸等腐蚀性显色剂 null3．HPLC （1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量 准确测定杂质含量 方法 内标物+杂质对照品→对照溶液，进样，测定，计算校正因子 null 供试品+内标→供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质含量null （2）外标法测定供试品中某个杂质的含量供试品→供试品溶液 杂质对照品→对照品溶液 进样，测定，计算杂质的含量 null 缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样 null（3）加校正因子的主成分自身对照法方法 待测成分对照品+杂质对照品→溶液，进样，记录色谱图，计算杂质的校正因子null 分别进样，供试品溶液的记录时间除另有规定外，应为主成分保留时间的若干倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。null（4）不加校正因子的主成分自身对照法 无杂质对照品，且杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。 方法 null 分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量。 null 缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差 优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度 null（5）面积归一化法 取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。 null 优点：不需杂质对照品，简便易行。 缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差。 null 4．GC 用于药物中挥发性杂质的检查。如药物中有机溶剂残留量测定。检查方法同HPLC。 null二、化学法 利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。如阿司匹林中水杨酸的检查。null98：77．乙醇中检查杂醇油是利用（C） A. 颜色的差异 B. 旋光的差异 C. 臭味及挥发性的差异 D. 对光选择吸收的差异 E. 溶解行为的差异null例. 药物中特殊杂质的检查方 法有（ABCDE） A．沉淀法与颜色法 B．滴定法 C．旋光法 D．分光光度法 E．色谱法null例. HPLC检查药物中杂质的具体方法有（ABCDE） A．峰面积归一化法 B．主成分自身对照法 C．内标法 D．外标法 E．内标法加校正因null例. 最常用于药物中特殊杂质检查的方法是(A) A. TLC B. IR C. UV D. MS E. NMRnull例. 红外分光光度法在杂质检查中主要用于（A） A. 药物中无效或低效晶型的检查 B. 杂质特征峰的确定 C. 杂质相关峰的确定 D. 杂质官能团的确定 E. 药物和杂质的鉴别null一、非水溶液滴定法（非水碱量法） 原料药 （一）原理 水溶液中滴定突跃不明显，在非水介质中，碱性增强，使滴定顺利进行 第四节 含量测定null 1. 溶剂 酸性溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐、醋酐 惰性溶剂：苯、氯仿、四氯化碳 能影响溶质的解离情况和能影响酸碱强度很大的溶剂：硝基甲烷、丙酮、二氧六环 null2. 滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液 或高氯酸的二氧六环溶液 3. 指示终点的方法 电位法：玻璃—甘汞电极系统 指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等 null 有机碱及其盐类及有机酸碱金属盐类8＜pKb＜10 冰醋酸作溶剂 10＜pKb＜12 冰醋酸+醋酐 pKb＞12 醋酐 （二）适用范围null 一般采用半微量法。中国药典（2000年版）的测定方法为：取经适当方法干燥的供试品适量〔约消耗高氯酸滴定液（0.1 mol/L）8 ml〕，加冰醋酸10～30 ml使溶解。若供试品为氢卤酸盐，应再加5％醋酸汞的冰醋酸溶液3～5 m1，加各药品项下规定的指示液1～2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。 （三）一般测定方法null 取本品约 0.15g，精密称定，加醋酐—冰醋酸（5∶1）的混合液 25ml，微热使溶解，放冷，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显黄色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 19.42mg 的C8H10N4O2。咖啡因 ChP(2000)null（四）生物碱盐类的滴定 置换滴定： 无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：null 由于有机酸系弱酸，被高氯酸置换出的HA，对滴定无干扰，能准确滴定。 1. 有机酸盐的测定 null 取本品约 60mg，精密称定，加冰醋酸 20ml 溶解后，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.05mo1/L）滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.05mol/L）相当于 22.07mg 的C19H23N3O2· C4H4O4。马来酸麦角新碱 ChP(2000)null 若被置换出的有机酸不溶于冰醋酸，应先将样品碱化，有机溶剂提取游离碱后，再非水碱量法测定。null 一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。 理论量1～3倍 2. 氢卤酸盐的测定null取本品约 0.15g，精密称定，加冰醋酸 10ml，加热溶解后，加醋酸汞试液 4ml 与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至溶液显翠绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 20.17mg 的C10H15NO· HCl。盐酸麻黄碱 ChP(2000) null生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。 （1）直接滴定3. 硫酸盐的测定nullA. 硫酸阿托品 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1nullB. 硫酸奎宁 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3 null（2）加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定 硫酸奎宁 反应摩尔比为1∶2 硫酸阿托品 一元碱不能滴定 null 因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。如硝酸士的宁、硝酸毛果芸香碱 4. 硝酸盐的测定null 取本品约 0.3g，精密称定，加冰醋酸 20ml，振摇使溶解，照电位滴定法（附录Ⅶ A），用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于39.74mg的C21H22N2O2· HNO3。硝酸士的宁 ChP(2000)null 按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸可待因 5. 磷酸盐的测定null 简便、快速、准确、精密、取样量小，测定的是生理活性部分。 如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差，不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。 （五）特点null（1）一般是取一定量样品在水浴上蒸干，在一定温度下干燥后按原料药物项下的方法进行。——主药对热稳定（六）制剂分析1. 注射剂null 精密量取本品 10ml，置水浴上蒸干，在 105℃ 干燥 1h，放冷，加冰醋酸 10ml，与醋酸汞试液 6ml 使溶解，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于37.58mg 的C20H21NO4· HCl。盐酸罂粟碱注射液 ChP（2000）null（2）碱化，经有机溶剂反复提取完全，蒸去溶剂后，再按原料药方法进行。——主药对热不稳定二盐酸奎宁注射液 ChP（2000） 精密量取本品适量（约相当于二盐酸奎宁 0.15g），置分液漏斗中，加水使成20ml，加氨试液使成碱性，用氯仿分次振摇提取，第一次 25ml，以后每次各 10ml，null至奎宁提尽为止，每次得到的氯仿液均用同一份水洗涤 2 次，每次 5 ml，洗液用氯仿 10ml 振摇提取，合并氯仿液，置水浴上蒸去氯仿，加无水乙醇 2ml再蒸干，在 105℃ 干燥 1h，放冷，加醋酐 5ml 与冰醋酸 10ml，溶解后，加结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于19.87mg 的C20H24N2O2· 2HCl。null 片剂中许多赋形剂如硬脂酸盐、苯甲酸盐、羧甲基纤维素钠等都消耗高氯酸，因此片剂的测定一般需提取分离并经干燥后才可进行。2. 片剂：null如硫酸奎宁片、硫酸奎尼丁片 碱化、有机溶剂提取后，HClO4滴定时，反应摩尔比为1∶4 null硫酸奎宁片 ChP（2000） 取本品 10 片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸奎宁 0.3g），置分液漏斗中，加氯化钠0.5g 与 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 10ml，混匀，精密加氯仿50ml，振摇10min，静置，分取氯仿液，用干燥滤纸滤过。null精密量取续滤液25ml，加醋酐5ml 与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显玫瑰红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于19.57mg的（C20H24N2O2）2· H2SO4·2H2O。二、提取中和法（提取酸碱滴定法、提取容量法） 二、提取中和法（提取酸碱滴定法、提取容量法） （一）原理与方法 null1. 碱化2. 有机溶剂提取null3. 中和法测定 （1）直接滴定法 用于碱性较强的生物碱 null（2）剩余滴定法 用于碱性较弱的生物碱 null（3）酸滴定液返提后剩余滴定法 用于对热不稳定的生物碱 null1. 碱化试剂 最常用氨水 2. 提取溶剂 （1）提取溶剂选择的原则 （2）常用的提取溶剂 最常用氯仿（二）测定条件的选择null（3）提取溶剂的用量及提取次数 通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次应各为第一次的一半 null 3. 提取终点的确定 用合适的沉淀反应确定4. 指示剂的选择 5. 乳化的预防和消除null 仪器简单、试剂常用，但操作繁琐、费时、精密度差、准确度差，主要用于制剂分析（三）特点null阿片粉中吗啡的含量测定——石灰法 ChP（1995） 固相萃取—离子对-反相高效液相色谱法 ChP（2000）（四）应用null（五）提取重量法 null（一）基本原理 在适当的pH介质中 三、酸性染料比色法 制剂null1. 水相中反应 离子对BH+·In-被有机溶剂提取，使有机相呈色。剩余的酸性染料留于水相3. 比色法测定2. 有机溶剂提取null（1）定量分离出有机提取液，脱水后，测定A，求出有机碱含量 （2）定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，则水相呈色，测定水相中In-的吸收度，间接求出有机碱的含量 BH+In- + OH- →B + H2O + In-null （3）定量分离出有机提取液，脱水后，酸化，则水相呈色，测定水相中HIn的吸收度，间接求出有机碱的含量BH+In- + H+ →BH++ HInnull 1. 水相的最适pH值 如果水相pH值过小，酸性染料几乎仍以分子状态存在；如果水相pH值过大，则生物碱几乎全部以游离碱的形式存在 2. 有机溶剂的选择 CHCl3、CH2Cl2 （二）影响定量分析的因素null3. 酸性染料的选择 常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（BTB）等5. 有色杂质的排除4. 水分的影响 严防水分的混入 有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过 6. 共存物的影响 null 3. 准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析（三）特点 1. 选择性高（选用适当pH缓冲液可消除干扰）2. 灵敏度高、供试品用量少null硫酸阿托品注射液 ChP（2000）注射液 对照法（四）应用null片剂 对照法null五、色谱法 （一）高效液相色谱法 1．反相 HPLC 分析生物碱类和有机含氮药物的特点 色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期地保留在色谱柱上。 四、紫外—可见分光光度法 null（1）加扫尾剂法 分离依据物质的极性及溶解性。在流动相中加入扫尾剂，最常用的扫尾剂是三乙胺（2）用硅胶作固定相法 离子交换机理：根据pKa大小进行分离 2．解决方法null 流动相要选择适宜的 pH 值、竞争离子的种类和浓度，同时要加入有机改性剂 适合于药物与体内代谢物的分析 （3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法 分离依据物质溶解性 null 不论是游离碱还是其盐类，均是以游离碱出峰（二）气相色谱法null97：83．咖啡因和茶碱的特征鉴别反应是 A. 双缩脲反应 B. Vitali反应 C. Marquis反应 D. 紫脲酸铵反应 E. 绿奎宁反应 null96：136．用非水溶液滴定法测定盐酸吗啡含量时，应使用的试剂是 A. 5％醋酸汞冰醋酸液 B. 盐酸 C. 冰醋酸 D. 二甲基甲酰胺 E. 高氯酸 null97：130．非水溶液滴定法直接测定硫酸奎宁含量的反应条件为 A．冰醋酸一醋酐为溶剂 B. 高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定 C．1mol的高氯酸与⅓mol的硫酸奎宁反应 D. 仅用电位法指示终点 E．溴酚蓝为指示剂 null99：78. 非水溶液滴定法测定硫酸奎宁原料的含量时，可以用高氯酸直接滴定冰醋酸介质中的供试品，1摩尔硫酸奎宁需要消耗高氯酸的摩尔数为 A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 null99x：[116—120]滴定反应中 A. 被测物与HClO4的摩尔比为1∶1 B. 被测物与HClO4的摩尔比为1∶3 C. 两者均是 D. 两者均不是 99x：116．硫酸奎宁片经氯仿提取后用HClO4滴定（D）null99x：117．硫酸阿托品在冰醋酸中用HClO4滴定 99x：118. 硫酸奎宁原料药用HClO4滴定 99x：119. 磷酸可待因用HClO4滴定 99x：120. 硝酸士的宁用HClO4滴定（A）（B）（A）(A)null96：129. 生物碱类药物制剂的测定方法 A. 直接用有机溶剂提取后，用H2SO4标准液滴定 B. 碱化后用有机溶剂提取，再用NaOH水溶液滴定null C. 碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂后用中性醇溶液，再用H2SO4标准液滴定 D. 碱化后用有机溶剂提取，蒸去有机溶剂，再加入定量的H2SO4，再用NaOH标准液回滴 E. 酸化后，用有机溶剂提取，采用适宜方法滴定null96：77. 酸件染料比色法中，水相的pH值过小，则 A. 能形成离子对 B. 有机溶剂提取能完全 C. 酸性染料以阴离子状态存在 D. 生物碱几乎全部以分子状态存在 E. 酸性染料以分子状态存在 null例6. 生物碱类药物的一般鉴别试验包括 A. 熔点测定 B. 显色反应 C. 沉淀反应 D. 光谱法（紫外、红外） E. 薄层色谱法 null例7. 能够发生Vitali反应的药物是 A. 盐酸吗啡 B. 硫酸奎宁 C. 磷酸可待因 D. 盐酸麻黄碱 E. 硫酸阿托品 null例8. 用非水溶液滴定法测定二盐酸奎宁时，二盐酸奎宁和HClO4的摩尔比是 A. 1∶1 B. 1∶2 C. 1∶3 D. 1∶4 E. 1∶1.5 null例9. 检查硫酸阿托品中莨菪碱时，应采用 A. 色谱法 B. 红外分光法 C. 旋光度法 D. 显色法 E. 直接检查法 null例10. 酸性染料比色法测定生物碱类药物，有机溶剂萃取测定的有色物是 A. 离子对和指示剂的混合物 B. 生物碱盐 C. 指示剂 D. 离子对 E. 游离生物碱