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预激综合征与7q3 D7S505假名基因相关研究

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预激综合征与7q3 D7S505假名基因相关研究 82O 中华医学杂志 2002年 6月 25日第 82卷第 12期 Natl Med J China,June 25,2002,V0l 82,N0.12 预激综合征与 7q3 D7S505假名基因 相关研究 刘文玲 刘 国树 胡大一 戚豫 单兆亮 骆 雷鸣 张明华 王莉 易军 【摘要】 目的 探寻预激综合征的遗传基础。方法 预激综合征 4_4例 ,正常人 53例,提取外周 血白细胞基因组 DNA。以 7q3上 D7$505,D7S688和 D7S483为候选位点,聚合酶链反应(PCR)扩增上 述位 点短片段重...
预激综合征与7q3  D7S505假名基因相关研究
82O 中华医学杂志 2002年 6月 25日第 82卷第 12期 Natl Med J China,June 25,2002,V0l 82,N0.12 预激综合征与 7q3 D7S505假名基因 相关研究 刘文玲 刘 国树 胡大一 戚豫 单兆亮 骆 雷鸣 张明华 王莉 易军 【摘要】 目的 探寻预激综合征的遗传基础。方法 预激综合征 4_4例 ,正常人 53例,提取外周 血白细胞基因组 DNA。以 7q3上 D7$505,D7S688和 D7S483为候选位点,聚合酶链反应(PCR)扩增上 述位 点短片段重 复序列 (STR),PCR反应 产物经 1.5%琼脂 糖凝胶 电泳 检测扩 增成 功者 以 8%聚丙 烯 酰胺电泳(PAGE)分离。应用基因分型的方法 ,对预激综合征进行关联分析。结果 D7$505位点等位 基因 A2、A3、A4和 A6的相对风 险率(RR)分 别为 1.051 6、3.432、1.563 1和 1.714 3,均 大 于 1,但 经 Y 检验仅 A3(266bp)等位基因的 RR有统计学意义,P<0.05,说明 A3在预激综合征患者中的分布显著 高于正常人 ,与预激综合征呈正关联。D7S483各等位基因型的频率在预激综合征患者组与正常组差 异无显著意义,说明预激综合征与之不相关。结论 预激综合征与 D7$505关联 ,对进一步探讨预激 综合征 的基因位点具有 重要意 义。 【关键词】 预激综合征; 遗传学 ; 关联 Association between pre-excitation syndrome and 7q3 D7S505 pseudonym gene uU Wenling . uU Guoshu, HU Dayi,Q1 Yu, SHAN Zhaoliang, LUO Leiming, ZHANG Minghua, WANG Li, Y1 Jun. Department ofCardiology,General Amy Hospital,Beijing 100853,China 【Abstract】 objective Pre—excitation syndrome is considered to be autosomal dominant hereditary disease.The objective of this study was to search the genetic foundation of the pre—excitation syndrome Methods Genomic DNA was isolated from peripheral lymphocytes obtained from 44 cases of patients with pre—excitation syndrome and 53 normal persons.Polymorphie short tandem repeats(STR)were amplified using polymerase chain reaction(PCR)and analyzed by polyaerylamide gel eleetrophoresis.The geno~pe of each individual was determ ined by polymorphie STR including D7S505,D7S688,D7$483 .Association analysis between the pre— excitation syndrome and the 3 STR (D7S505,D7S483 and D7S688)was tested by genotyping.Results The relative risk(RR)of alleles A2、A3、A4 and A6 of D7S505 were 1.051 6,3.432,1.563 1 and 1.714 3 respectively,all of which were more than 1,but only the RR of A3 had statistic significant difference, P <0.05 after tested by X .It supposed that the distribution of allele A3(266 bp)of D7$505 in patients with pre—excitation syndrome was much higher than that in norm al controls,which suggested that pre—excitation syndrome is associated with D7$505.Whereas,there were no significant difference in every allele of D7S483 between The pre—excitation syndrome and norm al persons, which suggested that pre—excitation syndrome is not associated with D7S483. Conclusion Th e pre—excitation syndrome is associated with D7$505,the resuh iS the foundation of the molecular genetics of the disease. 【Key words】 Pre-excitation svndromes; Genetics; Association 预激综合征 (pre.excitation syndrome)为常见病 , 在欧美人群 中的发病 率 为 0.15%。~3%。[ , 。其病 理改变为心房与心室之间存在异常传导通路(旁路 AP),从而引起部分心室肌提前激动 ,改变 了心室肌 激动的程序性 、同步性及统一性 。约 40% ~80%的 作者单位 :100853北京,解放军总医院心内科(刘文玲 、刘国树 、 单兆亮 .骆雷 鸣 、张明华 、王莉 、易军 )(刘文玲现工作 于北 京大学人 民 医院心内科);北京大学人民医院心内科(胡大一);北京大学第一临 床医院中心实验室(戚豫) .论 著 预激综合征患者伴有其他心律失常,甚至可出现猝 死[ 。目前已明确预激综合征属于常染色体显性遗 传性疾病 , ,但其致病基因尚不明确。我们采用 基因分型 的方法 ,对 收集的 44例预激综合征患者进 行关联分析,以求发现其与染色体 7q3是否关联。 对象与方法 一 、对象 44例预激综 合征患 者来源 于解放 军总 医院和 北京朝阳 医院,均为射 频 消融治疗 的汉 族患者 ,男 维普资讯 http://www.cqvip.com 中华医学杂志2002年 6月 25 13第 82卷第 12期 Natl Med J China,June 25,2O02, 墼, 34例 ,女 10例,年龄 9~73岁 ,平 均 年龄 40.7岁 。 经消融导管电极标测发 现旁路 位于左侧 游离壁 14 例 ,左前侧壁 14例 ,左后壁 4例 ,左后 间隔 4例 ,右 前壁 1例,右侧 游离 壁 4例,右后壁 3例。正常 人 群:为汉族健康无关个体,共 53人,男 27例,女 26 例 ,年龄 20~70岁 。两组均采集静脉血 5~10 ml备 用。预激综合征诊断l5 J:12导联体表心电图: (1)P—R间期 <0.12 S;(2)QRS>0.10 S;(3)QRS波 起始部有预激波 ;(4)继发性 sT—T改变 。若心 电图 正常 ,用心房起搏分级递增法或用 心房程序期前刺 激法 ,诱发出预激波。排除合 并先天性心脏病 、肥厚 性心肌病的患者 。 二 、方法 采用 Miller等_6一的蛋 白酶 K一氯化钠盐析法提取 外周血 白细胞基 因组 DNA。聚合酶链反应 (PCR)扩 增短 片段 重 复 序 列 (short tandem repeats,STR) , D7S505、D7S483和 D7S688各位点 PCR引物序 列分 别 为 正 向 5 ACTGGCCTGGCAGAGTCT 3 ,反 向 5 CAGCCA ITrCGAGAGGTGT 3 :正 向 5 AGTGGTCA— TYAGCCTYGGCAAAATC 3 ,反 向 5 AACCAGAG— TI'GTAAGCCATGAAAGT 3’;正 向 5’TGCAGAAA— TGCCTCCCTAAATATAA 3 ,反 向 5 ACAGGAAACGAT— TGCCATCCTY 3 。等 位 基 因型数 分 别 为 6、10和 8 个 ,片段 大小分 别 为 262~278 bp、166~188 bp和 147~161 bp。PCR反应 引物 的量 为 5~10 pmol,退 火温度 50~65 c【=,28个循 环 ,引物 由中国科学 院微 生物所合成。PCR反应产物经 1.5%琼脂糖凝胶 电 泳检测扩增成功者 ,以 8%聚丙烯 酰胺 (PAGE)电泳 分离 ,灌胶(40 cm×20 cm)后室温下聚合 1 h,取 PCR 产物 3 fzl与等量测序胶加样缓 冲液混合后 上样 ,以 0.5×TBE(Tris一硼酸电泳缓冲液)、600 V电压冷风下 电泳 12~13 h,至二甲苯青入水 1 h后停止 电泳。硝 酸银染色 ,将凝胶小 心置于染色盘中,以 10%乙醇 、 5%乙酸混合后的固定液固定 10 rain,蒸馏水洗 2 次,0.2%硝酸银染色 10 min,蒸馏水洗 4次,2%甲 醛 、0.75%氢氧化钠显色 10 min,至凝胶 出现棕色 条 带为止 ,蒸馏水洗 1次,染色 中间断振荡 ,保鲜膜封 胶 ,照相。 三 、数据处理及统计学分析 1.STR标记 多态性分 析 :本 实验采用 郭政 等人 的 PPAP 3.0(医学遗传学群体与家系计算机分 析系统 )中的基因频率程序 ,分析 中国正常汉人和预 激综合 征 患者 STR多态性 ,并进 行 Hardv.Weinberg 平衡检验 。用 )( 检验来量度 ,把每一种表现型的 值相加得到一总 Y 值,然后查表求出 P值,一般 P<0.05为差异有显著意义的界 限。 自由度(degree of freedom,DF)为总表现型数与等位基因型数之差。 2.疾 病 关 联 分 析 :本 实 验 应 用 郭 政 等 人 的 PPAP中 ASSO程 序研究 了 STR多态标 记与预激 综 合征的关联性 。该程 序按 Woolf或 Haldane法 调整 计算相对发病风险率(relative risk,RR),并分别进行 相应的显著性 Y 检验 。RR=1,说 明 STR多态标记 在正常 人和 预激 综合 征 患 者 中差 异无 显 著 意义 ; RR>1,说 明 STR多态标记与预激综合征呈正关联 ; RR<1,说明 STR多态标记与预激综合征呈负关联 , 但仅当 RR经 Y 检验,P<0.05时才有价值。在 RR的显著性确定后 ,为进一步 明确表示相关等位基 因型对预激综合征的作用 ,计算病 因分数 EF(RR> 1时)和预防分数 PF(RR<1时 )。 结 果 一 、正常人 STR标记多态性分析 中国正常汉人 STR标记 D7S505,等位基 因型数 目为 6个 ,最高频率集 中在 262 bp,各等位基因型频 数观察值与期望值符合 H—w 平 衡。D7S483等 位基 因型数 目为 10个 ,最高频率 集 中在 172 bp,各 等位 基因型频数观察值与期望值符合 H—w 平衡。STR 标记 D7S688等位基因型数 目为 8个 ,最高频率集中 在 153 bp,各等位基因型频数观察值与期望值符合 H—w平衡 。 二 、预激综合征关联分析 1.STR D7S505:通过 PAPP检验 D7S505各等位 基因型在 正常组 和预激综 合征患 者组 分布均 符合 Hardy-Weinberg平衡。经 相对 风 险 率检 验,发现 D7S505位点等位基 因 A2、A3、A4和 A6型 RR均大 于 1,仅 A3型(266 bp)等位 基因的频率在预激综合 征患者组显著增高,说 明其与预激综合征呈正相关 ; 等位基 因 A1和 A5型 RR小于 1,但仅 A1型 (262 bp)等位基 因的频率在预激综合征患者组显著 降低 , 说 明其与预激综合征 呈负相关 (表 1),部分正常 人 和预激综合征 患者 D7S505 PCR产物聚丙 烯酰胺凝 胶电泳结果见 图 1。 2.STR D7S483:通过 PAPP检验 D7S483各等位 基因型在正 常组 和预激综 合征患 者组 分布均 符合 Hardy.Weinberg平 衡。经 相对风 险率检 验 ,发 现 A1 ~ A10型等位基 因各 RR的 Y 检验结果差异均无显 著意义 ,说 明 D7S483各等位基因型的频率预激综合 征患者组与正常组差异无显著意义(表 2)。 维普资讯 http://www.cqvip.com 822 · 中华 医学 杂志 2002年 6月 25日第 82卷第 l2期 Natl Med J China,June 25,2002,Vol 82,No.12 表 1 D7S505各 等位基 因型频率在 正常人与预 激综合征 患者 中相对风险率 的显著性 检验结果 注:RR:相对风险率 ;df:自由度 ;EF:病 因分数(RR>1);PF:预防 分数 (RR<1);ItS:P>0 05 3.STR D7S688:通过 PAPP检验 D7S688各等位 基因型在 正常组 和预激 综合征 患者组 分布 均符合 Hardy—Weinberg平衡。经相对 风险率 检验 ,发现 A3 型等位基 因 RR<1,Y 检验 P<0.05,其他等位 基 因型的相对 风险率 检验 差异无 显著 意 义,说 明 A3 型等位基因的频率 在预 激综 合征患者组 明显降低 , 其他等位基 因型在两组 间 的分布 差异无 显著 意义 (表 3)。 讨 论 20世纪 90年代人们已经认识 到所有疾病都直 接或间接地与基因有关[ 。而遗传性疾病是 由染色 体及基 因异常所致。对于癌症 、心血管疾病 、精神 bp 344 298 22O M 1 2 3 4 5 6 A5 A5 A3 A5 A6 A5 11 12 13 A5 A5 A4 鬻 A1 A2 A2 Al A3 Al A1 Al A1 A1 Al A2Al 45 44 43 42 4l 39 38 37 36 35 34 M A6 A6 A5 A4 A3 A5 A4 A4 A4 A6 A4 bp 攀謦 A3 A3 A4 A1 A1 A2 A1 A2 A1 A3 A2 344 298 22O 注 :泳 道 1~13基 因 型 为 AI/A5,A2/A5,A2/A3,AI/A5,A3/ A6.Al/A5,AI/A5,Al/A5,AI/A5, Al/A5, Al/A5,A2/A5, A1/A4;泳 道 45~34基 因型为 A3/A6,A3/A6,A4/A5,Al/A4, AI/A3,A2/A5,AI/A4,A2/A4,A1/A4,A3/A6,A2/A4 图 1 部分正常人及散 发预激综合征患者 D7S505聚丙烯凝胶 电泳结果 ,上 图为正 常人 ,下图为散发预激综合 征患者 表 2 D7S483各 等位基 因型频率在正 常人与预激综 合征患 者中相对风 险率的显著性 检验结果 注:RR:相 对风险率 ;df:自由度 ;EF:病 因分数 (RR>1);PF:预 防分数 (RR<1):ItS:P> 0 05 表 3 D7S688各 等位基 因型频率在 正常人与预 激综合征患 者中相对风 险率的显著性 检验结果 注 :RR:相对风险率 ;df:自由度;EF:病 因分数 (RR>1);PF:预 防分数 (RR<1);ns:尸>0.05 m 搬贼 麟麟 竣簪簪一 露 鞑繇瓤 《 。 一爨 晰鬈l , ll=≮一。|-0 一 维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com
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