黄芪多糖对断奶仔猪免疫功能及腹泻的影响

黄芪多糖对断奶仔猪免疫功能及 腹泻的影响 边传周 , 王老七 (郑州牧业工程高等专科学校生物工程系 , 河南 郑州　450011) 摘要 : 研究了在断奶应激模式下添加黄芪多糖 (APS) 对断奶仔猪免疫功能及腹泻的影响。试验分 3 组 : 对照 Ⅰ组 (28 日龄不断奶) , 对照 Ⅱ组 (28 日龄断奶) 以及试验组 (28 日龄断奶 + APS) 。结果 : 试验组与对照 Ⅱ组相比 , 在断奶后第 7、14 天淋巴细胞百分数分别增加 717 % ( P > 0105) 、1812 % ( P > 0105) ; 中性粒细胞百分数分别减少了 1512 % ( P > 0105) 、2816 % ( P > 0105) ; 断奶仔猪的 SRBC 抗体效价分别提高 0147、 1149 ( P < 0105) 个滴度 ; 单核细胞增殖率分别提高 11 % ( P > 0105) 、25 % ( P < 0105) 。腹泻率在 3 组间差异不显著 ; APS 添加组腹泻频率显著 低于对照Ⅱ组 ( P < 0105) , 与对照Ⅰ组相比 , 差异不显著。 关键词 : 黄芪多糖 ; 免疫功能 ; 断奶仔猪 ; 腹泻 中图分类号 : S858128 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 052925130 (2005) 0120010203 The effects of astragalus polysaccharides from Huang2qi ( APS) on the immune f unctions and diarrhea of the weaning piglets B IAN Chuan2zhou , WAN G Lao2qi (Zhengzhou College of Animal Husbandry Engineering , Zhengzhou 450011 , China) Abstract : The effects of astragalus polysaccharides from Huang2qi (APS) on the weaning piglets′immune functions were studied. The re2 sults showed as follows : ①Compared with control group Ⅱat 7 and 14 days after weaning , the percentage of lymphocyte in the experiment group increased by 717 % ( P > 01 05) and 1812 % ( P > 0105) respectively ; the percentage of neutrophil in the experiment group decreased by 1512 % ( P > 0105) and 2816 % ( P > 0105) . The SRBC antibody titers of the weaning piglets in the experiment group were higher than those of control group Ⅱby 0147 Log2 and 1149 Log2 ( P < 0105) respectively. The mononuclear transformation in the experiment group was higher than in control group Ⅱby 11 % ( P > 0105) 、25 % ( P < 0105) respectively. There was no significant variation in diarrhea rate among the three groups , but the diarrhea frequency in the experiment group was lower than that of control group Ⅱ ( P < 0105) , and no significant difference was observed when compared with control group Ⅰ ( P > 0105) . Key s : APS ; immune functions ; piglets ; diarrhea 　　仔猪断奶是一个复合应激 , 包括仔猪与母猪隔离、新群体 的形成、从吃母乳转成吃饲料、环境小气侯改变等因素。断奶 的应激较强 , 常伴有消化系统紊乱、免疫功能低下、严重腹 泻、生长停滞、甚至死亡 , 给生产上造成巨大经济损失。大量 深入的研究明 , 早期断奶应激 ( EWS) 能导致外周血中性粒 细胞数上升及淋巴细胞数下降、抑制仔猪细胞免疫能力及合成 特异性抗体的能力 [1 ] 。由于断奶应激造成仔猪免疫功能下降而 导致对外界病原菌抵御能力降低 , 容易造成严重腹泻。 研究表明 , 黄芪多糖 (APS) 具有明显的免疫调节作用 , 它能提高淋巴细胞的转化率、提高机体对抗原的免疫应答能 力[2 ,3 ] , 增强巨噬细胞的吞噬能力 [4 ] ; 对于各种药物及不同的 收稿日期 : 2004206213 基金项目 : 河南省自然科学基金资助项目 (0211031300) 作者简介 : 边传周 (19662) , 男 , 副教授 , 硕士。 应激模式下的免疫功能降低 , 均具有明显的免疫增强作用[3 ,5 ] 。但在仔猪断奶应激模式下 , 是否具有免疫增强作用 ,以及能否降低仔猪的腹泻率却未曾见到报道。本试验以断奶仔猪作为试验对象 , 研究了 APS 的添加对断奶仔猪免疫功能、腹泻指标的影响 , 为生产上解决由于 EWS 所产生一系列的问题提供理论依据。1 　材料与方法111 　试验设计试验动物为 78 头杜 ×长 ×大三元杂交仔猪 , 初始体重接近。所选母猪胎次基本相同 , 产仔数稳定 (9～12 头) 。试验在河南伊川 54785 部队养殖场进行 , 仔猪为舍内网上饲养 , 按正常饲养管理进行。按从每窝随机选取 2 头的原则 , 分为对照Ⅰ组 (28 日龄不断奶) 、对照 Ⅱ组 (28 日龄断奶) 和试验组(28 日龄断奶 + APS) 。APS提取液于仔猪断奶当天添加 , 剂量 ·01· Animal Husbandry & Veterinary Medicine 　2005 　Vol137 　No11 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 为基础日粮的千分之一 ( V / W ) 。所有仔猪于 28 日龄经耳 静脉注入 5 mL 40 %绵羊红细胞悬液 , 试验期 14 d。 112 　黄芪多糖 黄芪 (蒙古) 由河南中医学院第二附属医院提供 , APS 由 郑州牧专生物工程系生物技术教研室提供 , 含量相当于每毫升 提取液 1 g 原药。 113 　样品采集及指标测定 11311 　外周血单核细胞 ( PBMC) 的分离与体外培养 　参照 文献 [6 ]。于仔猪断奶后第 1、2 周分别经颈静脉无菌采集血 样 8～10 mL 肝素抗凝 , Hankpis 液稀释后 , 加入 Ficoll 分离液 (上海试剂二厂) , 2 000 r/ min 水平离心 30 min。小心吸取单 个核细胞界面层 , Hankpis 液洗涤 2 次 , 以 RPMI 1640 完全培 养液调整细胞浓度为 2 ×106/ mL 于 40 孔无菌细胞培养板中 , 每孔分别加入细胞悬液 011 mL , 并加入含有或不含有 PHA 的 RPMI 1640 完全培养液 (终浓度 10μg/ mL) , 以作刺激转化或 自发转化对照 , 每样 3 孔。于 37 ℃, 5 % CO2 培养箱培养 66 h , 加入 MTT 液 ( PBS 配制 , p H 712) 使其终浓度为 015 mg/ mL 。继续培养 6 h , 加入 20 % SDS 液 (含 50 %二甲基酰 胺 , p H 417) , 于 37 ℃作用 12 h 后 , 于分光光度计上 570 nm 处测 OD 值。 11312 　血液指标 　分别于断奶当天、断奶后第 7 天、14 天耳 静脉采血。分别进行常规的白细胞分类计数 ; 用常规微量法血 凝试验测定仔猪抗绵羊红细胞抗体效价 (绵羊红细胞浓度为 110 %) ; 分离血清 , 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清中各蛋白组 分 , 染色、洗脱后于 722 型分光光度计 , 620 nm 测定 OD 值 , 测γ2球蛋白相对含量。 114 　数据处理 数据均以 …x ±SD 表示 , 统计学处理用 Studentpis 　t 检验 , P < 0105 为差异显著 , P < 0101 为差异极显著。 2 　结果 由表 1 可知 , 在断奶后第 7、14 天 , 试验组与对照 Ⅱ组相 比 , 淋巴细胞百分数增加了 717 %、1812 % , 中性粒细胞百分 数减少了 1512 %、2816 % ; 与对照 Ⅰ组相比 , 淋巴细胞百分 数减少了 411 %、414 % , 中性粒细胞百分数增加了 1617 %、 314 % , 但差异不显著。 表 1 　APS对断奶仔猪外周血淋巴细胞及中性粒细胞百分数的影响 / % 断奶后时间 t / d 对照Ⅰ组 中性粒细胞 淋巴细胞 对照Ⅱ组 中性粒细胞 淋巴细胞 试验组 中性粒细胞 淋巴细胞 0 19 ±7178 81 ±7178 20 ±0171 79 ±1142 22 ±0171 78 ±1142 7 24 ±2183 73 ±5166 33 ±2112 65 ±4124 28 ±2183 70 ±4124 14 29 ±1142 68 ±2183 42 ±2112 55 ±4124 30 ±2183 65 ±7107 　　由表 2 可知 , 免疫后第 7 天 , 试验组 SRBC 抗体效价介于 对照 Ⅰ组和对照 Ⅱ组间 ; 免疫后第 14 天 , 试验组比对照 Ⅱ组 高 1149 ( P < 0105) 。 表 2 　APS对断奶仔猪血清绵羊红细胞抗体 效价 ( log2) 的影响 断奶后时间 t / d 对照Ⅰ组 对照Ⅱ组 试验组 0 0119 ±0102 0122 ±0103 0118 ±0101 7 5117 ±0151 3156 ±0142 4103 ±0161 14 4153 ±0118 4103 ±0166 5152 ±0149 由表 3 可知 , 免疫后第 7、14 天 , 试验组γ2球蛋白含量介 于对照 Ⅱ组与对照 Ⅰ组之间 , 但差异不显著。但在第 14 天 , 对照 Ⅱ组显著高于对照 Ⅰ组 ( P < 0105) 。 表 3 　APS对断奶仔猪血清γ2球蛋白 　　　含量 ( OD 值) 的影响 断奶后时间 t / d 对照Ⅰ组 对照Ⅱ组 试验组 0 23150 ±0158 23189 ±1103 23165 ±0196 7 23109 ±1151 21166 ±0182 22113 ±0162 14 22178 ±0118 26142 ±0166 24186 ±0149 由表 4 可知 , 断奶后第 7 天对照 Ⅱ组和试验组 OD 值比对 照Ⅰ组分别下降 33 % ( P < 0105) 和 26 % ( P < 0105) , 断奶 后第 14 天试验组与对照 Ⅰ组差异不显著 , 但比对照 Ⅱ组高 25 % ( P < 0105) 。 表 4 　APS对断奶仔猪外周血中单核细胞 　　　　　增殖率 ( OD 值) 的影响 断奶后时间 t / d 对照Ⅰ组 对照Ⅱ组 试验组 0 0155 ±0108 0159 ±0103 0158 ±0106 7 0154 ±0111 0136 ±0105 0140 ±0102 14 0152 ±0106 0140 ±0106 0150 ±0109 由表 5 可知 , 腹泻率在 3 组间差异不显著 , 但试验组比对 照 Ⅱ组低 1710 %。试验组的腹泻频率显著低于对照 Ⅱ组 ( P < 0105) , 与对照 Ⅰ组差异不显著 ( P > 0105) 。对照 Ⅰ组极显著 低于对照 Ⅱ组 ( P < 0101) 。 表 5 　APS对断奶仔猪腹泻率及腹泻频率的影响 项目 对照Ⅰ组 对照Ⅱ组 试验组 腹泻率 % 33 67 50 腹泻频率/ 次 816 2118 1514 ·11·畜牧与兽医 　2005 年 　第 37 卷 　第 1 期 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 鸡 霉 形 体 的 分 离 鉴 定 潘树德 , 李学俭 , 沈国顺 , 刘明春 , 尹荣焕 , 陈晓月 , 赵玉军 (沈阳农业大学畜牧兽医学院 , 辽宁 沈阳　110161) 摘要 : 从沈阳地区 2 个鸡场的 6 只病鸡取样 , 进行了霉形体的分离鉴定。通过培养特性、生化特性及血清学特性鉴定 , 分离出鸡败血霉形体 4 株 , 分别命名为 Sy1 株 , Sy2 株 , Sy4 株 , Sy5 株。 关键词 : 霉形体 ; 分离鉴定 ; 鸡 中图分类号 : S858131 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 052925130 (2005) 0120012203 Isolation and identif ication of mycoplasmas from chickens PAN Shu2de , L I Xue2jian , SHEN Guo2shun , L IU Ming2chun , YIN Rong2huan , CHEN Xiao2yue , ZHAO Yu2jun (College of Animal Science and Veterinary Medicine , Shenyang Agric Univ , Shenyang 110161 , China) Abstract : Six sick chickens selected from two chicken farms in Shenyang were used for isolation of mycoplasmas according to specific properties of culture , serum and biology , and Sy1 , Sy2 , Sy4 and Sy5 strains from mycoplasmas were obtained. Key words : mycoplasma ; isolation and identification ; chicken 收稿日期 : 2004204224 基金项目 : 沈阳农业大学青年教师基金资助 (200317) 。 作者简介 : 潘树德 (19702) , 男 , 讲师 , 硕士。 鸡败血霉形体 (M G) 可引起家禽慢性呼吸道病 (CRD) ,是当前影响养禽生产的常见疾病之一。本病流行于世界各国 ,给养禽业带来的损失往往是无法估量的。近几年来 , M G感染 3 　讨论 断奶后第 7 天 , 对照 Ⅱ组、试验组仔猪的各项免疫指标与 对照组 Ⅰ组相比 , 免疫功能均下降。这说明 , 断奶应激导致仔 猪的免疫功能下降。仔猪免疫功能下降 , 肠道继发感染病原 菌 , 可能是仔猪断奶后腹泻的一个主要原因。 试验组在断奶后第 7、14 天 , 与对照 Ⅱ组相比淋巴细胞百 分数减少 , 中性粒细胞百分数增多 , 淋巴细胞转化率及抗 SR2 BC 特异性抗体水平升高。这说明 APS 的添加可明显提高仔猪 的细胞、体液免疫功能。 试验组在断奶后第 14 天 , 各项免疫指标与对照 Ⅰ组相比 差异不显著 , 这说明 APS的添加可有效地消除 EWS 所致的免 疫抑制作用。与对照 Ⅱ组相比 , APS添加组的腹泻率及腹泻频 率明显降低 , 这可能与 APS所致的免疫功能提高有关。 在断奶后第 7 天 , 对照 Ⅱ组、试验组血清中γ2球蛋白相对 含量与对照组相比均下降。这可能是由于断奶后仔猪缺少母源 免疫球蛋白的供应 , 又由于断奶应激所致的免疫抑制作用而不 能对有效的刺激产生免疫抗体的缘故。在断奶后第 14 天 , 对 照 Ⅱ组和试验组γ2球蛋白的含量反而高于对照 Ⅰ组。这与国 内学者全丙昭所报道的仔猪断奶后血清中的γ2球蛋白含量持 续下降并不一致 [1 ] 。作者认为 , 这一现象可能是因为断奶后仔猪被迫置于外界病原微生物的环境中 , 而此时 EWS 所致的免疫抑制作用已经消除 , 因此仔猪针对外界病原微生物产生大量特异性免疫球蛋白所致。参考文献 :[1 ] 　全炳昭 , 唐玉新. 早期断奶应激 ( EWS) 对仔猪影响的研究[J ] . 江西农业大学学报 , 1997 , 19 (1) : 65268.[ 2 ] 　李宏全 , 段县平. 黄芪多糖对鸡新城疫和传染性腔上囊病疫苗免疫力的影响 [J ] . 中国兽医医学杂志 , 2001 , 31 (9) : 12214.[3 ] 　张　艳. 黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用 [J ] . 中国药理学通报 , 1995 , 11 (2) : 1362138.[4 ] 　周淑英. 黄芪多糖对小白鼠免疫功能的影响 [J ] . 江苏中医 ,1994 , 15 (12) : 41244.[ 5 ] 　魏　萍 , 李庆章. 黄芪多糖和香菇多糖对 VAMV 感染雏鸡免疫器官 L PO 含量的影响 [J ] . 中兽医医药杂志 , 1999 , (3) : 427.[6 ] 　Hansen MB , Nielsen SE , Berg K. Re2examination and further de2velopment of a precise and rapid dye method for measuring cellgrowth/ cell kill [J ] . J Immunol Methods , 1989 , 119 : 203. ·21· Animal Husbandry & Veterinary Medicine 　2005 　Vol137 　No11 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net