黄芪多糖_APS_对断奶仔猪免疫功能的影响

　收稿日期 :2005 - 12 - 07 　基金项目 :河南省自然科学基金资助项目 (0211031300) 　作者简介 :任敏 (1966 - ) ,女 ,河南临颖人 ,学士 ,河南师范大学在读硕士。 黄芪多糖( APS)对断奶仔猪免疫功能的影响 任　敏1 ,张晓静2 (11 郑州牧业高等专科学校 生物工程系 ,河南 郑州 450011 21 河南师范大学生命科学学院 ,河南 新乡 453007) 摘要 :本试验研究了在断奶应激模式下 ,APS的添加对断奶仔猪免疫功能及腹泻指标的影响。结果表明 :APS 的添加 能显著提高断奶仔猪的免疫功能。与对照 II 组相比 ,在断奶后第 7d、14d 淋巴细胞百分数分别增加了 717 % ( P > 0105) 、1812 %( P > 0105) ;中性粒细胞百分数分别减少了 1512 % ( P > 0105) 、2816 % ( P > 0105) ;断奶仔猪的 SRBC 抗 体效价分别提高 0147、1149 ( P < 0105)个滴度 ;单核细胞增殖率分别提高 11 %( P > 0105) 、25 %( P < 0105) 。腹泻率在 三组间差异不显著 ,APS添加组腹泻频率明显低于对照 Ⅱ组 ( P < 0105) ,与对照 I 组相比 ,差异不显著。 关键词 :黄芪多糖 ;免疫功能 ;断奶仔猪 中图分类号 :S85214 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :1008 - 3111 (2006) 01 - 0007 - 03 The effects of Astragalus Polysaccharides of Huang QI( APS) on The weaning piglets’immunof unctions Ren Min1 ,Zhang Xiao - jing2 (11Biology Engineering Department , Zhengzhou College of Animal Husbandry Engineering ,Zhengzhou , Henan 450011 ,China ;2. Life sciences college of Henan Normal university ,Xinxiang ,Henan 453007 ,China) Abstract : The experiment studied the effects of Astragalus Polysaccharides of Huang Q I(APS) on the weaning piglets’im2 munofunctions1 The results showed that the addition of APS can increase the function of weaning piglets , compared with control group II at 7 and 14 days after weaning , the percentage of lymphoxyte in experiment group increased by 717 % ( P > 0105) and 1812 %( P > 0105) respectively ; The percentage of neutrophil in experiment group decreased by 1512 ( P > 0105) and 2816 %( P > 0105) respectively ; The SRBC antibody titers of the weaning piglets in the experiment group II were higher than those of control group II by 0147 log2 and 1149 log2 ( P < 0105) respectively ; The mononuclear transformation in experi2 ment Group were higher than control Group II by 11 % ( P > 0105) 、25 % ( P < 0105) respectively1 There was no significant variation in diarrhoea rate among the three groups ,but the diarrhoea frequency in experiment group was lower than that of control group II(P < 0105) And no significant difference was observed when compared with the control I group (P > 0105) . Keywords : APS ;immunfunction ;weaning piglets 　　仔猪断奶是一个复合应激过程 ,包括仔猪与母 猪隔离、新群体的形成、从吃母乳转成吃饲料、环境 小气侯改变等因素。断奶引起的应激较强 ,常伴有 消化系统紊乱、免疫功能低下、严重腹泻、生长停滞、 甚至死亡 ,给生产上造成巨大经济损失。大量深入 的研究表明 , 早期断奶应激 ( EWS)能导致外周血中 性粒细胞数上升及淋巴细胞数下降、抑制仔猪细胞 免疫能力及合成特异性抗体的能力。由于断奶应激 造成仔猪免疫功能下降而导致对外界病原菌抵御能 力降低 ,容易造成严重腹泻。 研究表明 ,黄芪多糖 (APS) 具有明显的免疫调 节作用 ,它能提高淋巴细胞的转化率、提高机体对抗 原的免疫应答能力 ,增强巨噬细胞的吞噬能力 ;对于 各种药物及不同的应激模式下的免疫功能降低 ,均 具有明显的免疫增强作用。但在仔猪的断奶应激模 式下 ,是否具有免疫增强作用 ,能否降低仔猪的腹泻 率却未曾见到报道。本试验以断奶仔猪作为试验对 象 ,研究了 APS 的添加对断奶仔猪免疫功能、腹泻 指标的影响 ,为生产上解决由于 EWS 所产生一系 列的问题提供理论依据。 第 26 卷第 1 期 2 0 0 6 年 2 月 郑州牧业工程高等专科学校学报 Journal of Zhengzhou College of Animal Husbandry Engineering Vol. 26 No. 1 February 2006 1 　材料与方法 111 　试验设计 　试验动物为 78 只杜 ×长 ×大三元 杂交仔猪 ,初始体重接近。所选母猪胎次基本相同 , 产仔数稳定 (9～12 头) 。试验在河南伊川 54785 部 队养殖场进行 ,仔猪为舍内网上饲养 ,温、湿度适宜 , 按养殖场正常饲养管理进行。按从每窝随机选取 2 头的原则 ,分为对照 I 组 (28 日龄不断奶) 、对照 II 组 (28 日龄断奶) 和试验组 (28 日龄断奶 + APS) 。 APS 提取液于仔猪断奶当天添加 ,剂量为基础日粮 的千分之一 (V/ W) 。所有仔猪于 28 日龄经耳静脉 注入 5 mL 40 %绵羊红细胞悬液 ,试验期 14 d。 112 　黄芪多糖 　黄芪由河南中医学院第二附属医 院提供 ,APS 由郑州牧专生物工程系生物技术教研 室提供 ,每毫升提取液含量相当于 1 g 原药。 113 　样品采集及指标测定 11311 　外周血单核细胞 ( PBMC)的分离与体外培养 　于仔猪断奶后第 1、2 周分别经颈静脉无菌采集血 样 8～10 mL 肝素抗凝 ,Hank’s 液稀释后 ,加入 Ficoll 分离液 (上海试剂二厂) ,水平离心 2 000 r/ 30 min ,小 心吸取单核细胞界面层 ,Hank’s 液洗涤 2 次 ,以 RP2 MI1640 完全培养液调整细胞浓度为 2 ×106 个/ mL , 于 40 孔无菌细胞培养板中每孔分别加入细胞悬液 011 mL ,并加入含有或不含有 PHA 的 RPM I1640 完 全培养液 (终浓度 10μg/ mL ) ,以作刺激转化或自 发转化对照 ,每样 3 孔 ;于 37 ℃,5 % CO2培养箱培 养 66 h ,加入 M TT 液 ( PBS 配制 ,p H 712) 使其终 浓度为 015 mg/ mL ,继续培养 6 h ,加入 20 % SDS 液 (含 50 %二甲基酰胺 ,p H 417) ,于 37 ℃作用 12 h 后 ,于分光光度计上 570 nm 处测 OD 值。 11312 　白细胞分类计数 　分别于断奶 0 d (当天) 、 第 7 d、第 14 d 耳静脉采血 ,进行常规的白细胞分类 计数。 11313 　微量血凝试验 　分别于断奶 0 d (当天) 、第 7 d、第 14 d 耳静脉采血 ,用常规微量法血凝试验测 定仔猪抗绵羊红细胞抗体效价 (绵羊红细胞浓度为 110 %) 。 11314 　γ- 球蛋白相对含量 　分别于断奶 0 d (当 天) 、第 7 d、第 14 d 耳静脉采血 ,分离血清 ,醋酸纤 维薄膜电泳法分离血清中各蛋白组分 ,染色、洗脱后 于 722 型分光光度计 620 nm 测定 OD 值。 114 　数据处理 　数据均以 X ±SD 表示 ,统计学处 理用 Student’s t 检验 , P < 0105 为差异显著 , P < 0101 为差异极显著。 2 　结果 211 　APS 对断奶仔猪外周血淋巴细胞及中性粒细 胞百分数的影响 　见表 1。 表 1 　APS对断奶仔猪外周血淋巴细胞及中性粒细胞百分数的影响 时间 (d) 对照 I 组 中性粒细胞 淋巴细胞 对照 II 组 中性粒细胞 淋巴细胞 试验组 中性粒细胞 淋巴细胞 0 19 ±7178 81 ±7178 20 ±0171 79 ±1142 22 ±0171 78 ±1142 7 24 ±2183 73 ±5166 33 ±2112 65 ±4124 28 ±2183 70 ±4124 14 29 ±1142 68 ±2183 42 ±2112 55 ±4124 30 ±2183 65 ±7107 　　由表 1 可知 ,在断奶后第 7 d、14 d ,试验组与对 照 II 组相比 , 淋巴细胞百分数增加了 717 %、 1812 % ,中性粒细胞百分数减少了 1512 %、2816 % ; 与对照 I 组相比 ,淋巴细胞百分数减少了 411 %、 414 % ,中性粒细胞百分数增加了 1617 %、314 % ,但 差异不显著。 212 　APS 对断奶仔猪血清 SRBC 抗体效价的影响 　见表 2 和图 1。 表 2 　APS 对断奶仔猪血清 SRBC 抗体效价的影响 时间 (d) 对照 I 组 对照 II 组 试验组 0 0119 ±0102 0122 ±0103 0118 ±0101 7 5117 ±0151 3156 ±0142 4103 ±0161 14 4153 ±0118 4103 ±0166 5152 ±0149 3 　3 P < 0105 　与对照 II 组相比 图 1 　APS对断奶仔猪绵羊红细胞抗体水平的影响由表 2 和图 1 可知 ,免疫后第 7 d ,试验组 SR2BC 抗体效价介于对照 I 组和对照 II 组间 ;免疫后 第 14 d ,试验组比对照 II 组高 1149 ( P < 0105) 。 8　　　　 郑州牧业工程高等专科学校学报 第 26 卷 213 　APS 对断奶仔猪血清γ- 球蛋白含量的影响 见表 3。 表 3 　APS 对断奶仔猪血清γ- 球蛋白含量的影响 时间 (d) 对照 I 组 对照 II 组 试验组 0 23150 ±0158 23189 ±1103 23165 ±0196 7 23109 ±1151 21166 ±0182 22113 ±0162 14 22178 ±0118 26142 ±0166 3 24186 ±0149 　3 P < 0105 与对照 I 组相比 由表 3 可知 ,免疫后第 7 d、14 d ,试验组γ - 球 蛋白含量介于对照 II 组与对照 I 组之间 ,但差异不 显著。 214 　APS 对断奶仔猪外周血中单核细胞增殖率的 影响 　见表 4。 表 4 　APS 对断奶仔猪外周血中单核细胞增殖率的影响 时间 (d) 对照 I 组 对照 II 组　 试验组　 0 0155 ±0108 0159 ±0103 0158 ±0106 7 0154 ±0111 0136 ±0105 3 0140 ±0102 3 14 0152 ±0106 0140 ±0106 3 0150 ±0109 3 3 　3 P < 0105 与对照 I 组相比 ; 3 3 p < 0105 与对照 II 组相比 由表 4 可知 ,断奶后第 7 d 对照 II 组和试验组 OD 值比对照 I 组分别下降 33 %( P < 0105) 和 26 % ( P < 0105) ,断奶后第 14 d 试验组与对照 I 组差异 不显著 ,比对照 II 组高 25 %( P < 0105) 。 215 　APS 对断奶仔猪腹泻率及腹泻频率的影响 　 见表 5。 表 5 　APS 对断奶仔猪腹泻率及腹泻频率的影响 项目 对照 I 组 对照 II 组 试验组 腹泻率 ( %) 　 3310 6710 5010 腹泻频率 ( %) 816 2118a 1514b 　a : P < 0101 与对照 I 组相比 ;b : P < 0105 与对照 II 组相比 由表 5 可知 ,腹泻率在三组间差异不显著 ,但试 验组比对照 II 组低 1710 %。试验组的腹泻频率明 显低于对照 II 组 ( P < 0105) ,与对照 I 组差异不显 著 ( P > 0105) 。 3 　讨论 断奶后第 7 天 ,对照 II 组、试验组仔猪的各项 免疫指标与对照组 I (未断奶组) 相比 ,免疫功能均 下降 ,这说明断奶应激导致仔猪的免疫功能下降 ,仔 猪免疫功能下降 ,肠道继发感染病原菌 ,可能是仔猪 断奶后腹泻的一个主要原因。 试验组 (APS 添加组) 在断奶后第 7 d、14 d ,与 对照 II 组相比淋巴细胞百分数减少 ,中性粒细胞百 分数增多 ,淋巴细胞转化率及抗 SRBC 特异性抗体 水平升高 ,这说明 APS 的添加可明显提高仔猪的细 胞、体液免疫功能。 试验组在断奶后第 14 d 各项免疫指标与对照 I 组相比差异不显著 ,这说明 APS 的添加可有效消除 EWS 所致的免疫抑制作用。与对照 II 组相比 ,APS 的添加组的腹泻率及腹泻频率明显降低 ,这可能与 APS 所致的免疫功能提高有关。 在断奶后第 7 d ,对照 II 组、试验组血清中γ - 球蛋白相对含量与对照组 I 相比均下降。这可能是 由于断奶后仔猪缺少母源免疫球蛋白的供应 ,又由 于断奶应激所致的免疫抑制作用而不能对有效的刺 激产生免疫抗体的缘故。在断奶后第 14 d ,对照 II 组和试验组γ - 球蛋白的含量反而高于对照组 I。 这与国内学者全丙昭所报道的仔猪断奶后血清中的 γ - 球蛋白含量持续下降并不一致。作者认为 ,这一 现象可能是因为断奶后仔猪被迫置于外界病原微生 物的环境中 ,而此时 EWS 所致的免疫抑制作用已 经消除 ,因此仔猪针对外界病原微生物产生大量特 异性免疫球蛋白所致。 参考文献 : [1 ] 　Griffin J F T. 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