高效液相色谱法测定芍药中芍药苷的含量

此 ,特对中国医院知识仓库 (CH KD) 2003 年以来收载关于评 价头孢类抗菌药物稳定性和配伍相关的实验方法的科学性 进行调查。 1 　资料与方法 1. 1 　资料 　CH KD 2003 年以后收载关于头孢类抗菌药物 稳定性和配伍相关的实验性论文 55 篇为被调查对象。 1. 2 　方法 　将被调查文章中使用的分析方法按 A :高效液 相色谱法 ;B :紫外分光度法两种条件进行分类统计 (分析方 法不在这两条件中的不属这次调查之列) ,并以该两种方法 是否能真实测定头孢类抗菌药物配伍稳定性试验中的样品 情况进行评价。 2 　结果 2. 1 　被调查文章中主要分析方法的调查 　55 篇文章中主要 分析方法的调查结果用 A 法 22 篇占调查数的 40 % ,B 法 33 篇占调查数的 60 %。 2. 2 　报道被调查文章期刊的情况 　报道 55 篇文章的期刊 的类别 ,见 1。 [作者简介 ] 刘玉红 ,女 ,硕士 ,讲师 , 电话 :0531282613094 ,E2mail :liuyuhongwu @126 . com 表 1 　报道 55 篇文章的期刊类别 Tab 1 　The periodical categories of the 55 articles reporting papers in question 药学专业 综合性医药 医学专业 核心 一般 核心 一般 核心 一般 A/ 篇 5 12 2 3 - - B/ 篇 3 16 - 12 - 2 3 　讨论 β2内酰胺类抗菌药物具有过敏性和不稳定性 ,其不稳定 性又与过敏性之间有某些联系 [1 ] ,故而临床中单独或与其他 药物配伍使用时 ,均必须充分考虑这两种特性。 调查中发现有文章在含量测定时 ,用配伍的主药分别作 空白 ,互相抵消测定的干扰 ;更有一文 ,既无测定条件 ,也无 样品处理叙述 ,直接列出与头孢类抗菌药物配伍进行稳定性 实验后的 6 种药物含量。 在被调查 55 篇文章中 ,有 32 篇采用紫外分光光度法测 定 ,其基本格式为 :配伍溶液外观检查 + p H 测定 + 紫外光谱 + 紫外分光光度法测定配伍药物的量 ;该 32 篇文章都是论 述溶液环境中头孢类抗菌药物与其他药物配伍的稳定性及 合理性 ;溶液环境中 ,药物是以分子或离子形式存在的。按 紫外光谱定性理论 :结构完全相同的化合物应有完全相同的 紫外吸收光谱 ,但有相同吸收光谱的 ,不一定是同一化合物 ; 以纯化合物之间的吸收光谱比较 ,才有定性意义 [2 ] 。在两种 或两种以上药物配伍后若以其混合溶液的紫外吸收光谱与 其放置一定时间后的吸收光谱变化比较 ,评价药物之间没有 相互作用、相互影响及新物质生成 ,这违反了紫外光谱定性 的基本理论。药物配伍稳定性实验所测样品之中除含有要 测定的主药之外 ,还含有相关的降解产物 ,在未证明降解产 物是否有干扰时 ,不能用紫外分光光度法直接测定 ;被调查 文章中有一篇提到 :配伍溶液颜色随着时间的推移 ,颜色在 变深 ,用紫外分光光度计测其含量却不变 ,甚至有时越来越 高 ,改用 HPLC 法后 ,发现主药量在减少 ,分解产物在增 加 [3 ] 。鉴于上述因素 ,紫外分光光度计法不能用于不经任何 处理的配伍稳定性实验样品的含量测定。 2005 年版药典收载的所有头孢类抗菌药物的含量测定 均采用 HPLC 法测定 ,同时也有有关物质检测及限定 [4 ] 。在 被调查 55 篇文章中有 22 篇采用 HPLC 法其中 ,有 12 篇表 述中涉及到分解产物干扰的问题 ,其中 3 篇提及未见分解产 物峰 ,4 篇色谱图中有其他物质峰 ;所以 ,采用 HPL C 法对头 孢类抗菌药物药物配伍稳定性实验时 ,应考察主药峰与其他 物质峰分离的情况 ;另外 ,为了了解其他配伍药物对头孢类 抗菌药物影响的具体程度 ,建议 :在实验中 ,可以将头孢类抗 菌药物用相应的溶剂配制一空白对照样品 ,以此评价配伍药 物对其影响的程度 ,同理也可评价头孢抗菌药物对其他配伍 药物的影响。 参考文献 : [1 ] 　陈新谦 ,金有豫 ,汤光主编. 新编药物学 [ M ] . 第 15 版. 北京 : 人民卫生出版社 ,2005 . 48249 . [ 2 ] 　黄世德 ,梁生旺. 分析化学 (下册) [ M ] . 北京 :中国中医出版 社 ,2005 . 26 [ 3 ] 　黄振伟 ,陈建中 ,黄少丽. 头孢曲松钠输液稳定性影响因素研 究[J ] . 国际医药卫生导报 ,2004 ,10 (14) :162 . [ 4 ] 　中国药典. 二部 [ S] . 2005 . 1342160 . [收稿日期 ]2006203209 高效液相色谱法测定芍药中芍药苷的 含量 刘玉红 ,张惠珍 　(山东中医药大学药学院 ,山东 济南 250014) [摘要 ] 　目的 :比较赤芍和白芍中芍药苷的含量。方法 :采 用 HPLC 法 ,色谱柱为 Spherisorb ODS C18柱 ,流动相为甲醇20 . 5 %醋酸 (28∶72) ,检测波长 230 nm ,流速1 . 0 mL·min - 1 。 结果 :赤芍中芍药苷含量为3 . 83 % ,白芍中芍药苷含量为 1 . 67 %。结论 : HPLC 法测定芍药苷灵敏、快速、准确 ,赤芍 中芍药苷含量明显高于白芍。 [关键词 ] 　高效液相色谱法 ;赤芍 ;白芍 ;芍药苷 [中图分类号 ] R927 . 2 　　[文献标识码 ] A 　　[文章编号 ] 10012 5213 (2006) 1021308202 　　芍药 ( Paeonia lacti f lora Pal l . ) 的根既作中药赤芍 ,又 作白芍用 ,一般认为 :野生品的根直接干燥是赤芍 ,而栽培品 的根去皮水煮后为白芍。随着野生资源的减少 ,目前很多栽 培品的根直接干燥作为赤芍应用 ,去皮水煮后作为白芍应 用。赤芍和白芍虽为同一植物来源 ,但主治病症有很大区 别。白芍可养血柔肝、缓急止痛、敛阴收汗 ,赤芍则有行淤、 止痛、凉血、消肿之功。为探讨这种临床区别应用的科学性 , 本研究采用高效液相色谱法对同为栽培品的赤芍和白芍中 的活性成份芍药苷进行了含量测定。 1 　材料 LC - 10A 高效液相色谱仪 (日本岛津) ; SPD - 10A 检测 器 (日本岛津) ;赤芍、白芍 (山东菏泽泰山中药饮片加工有限 责任公司 ,经本校生药教研室徐凌川副教授鉴定) ;芍药苷对 ·8031· 中国医院药学杂志 2006 年第 26 卷第 10 期 Chin Hosp Pharm J ,2006 Oct ,Vol 26 ,No. 10 照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 07362200116 ,供含量 测定用) ;醋酸为分析纯 ;甲醇为色谱纯 ;水为纯化水。 2 　方法与结果 2. 1 　色谱条件 　色谱柱为 Spherisorb C18 柱 (200 mm ×4 . 6 mm ,5μm) ,流动相为甲醇20 . 5 %醋酸 (28∶72) ,检测波 :230 nm ,流速 : 1 . 0 mL ·min - 1 , 进样量 : 20 μL ,灵敏度 : 0 . 01 AU FS ,柱温 :室温。此条件下样品得到了较好的分离。 2. 2 　供试品溶液制备 　赤芍粉碎 ,过 40 目筛 ,精密称取 1 . 00 g 置于 100 mL 圆底烧瓶中 ,精密加入甲醇 50 mL ,称 重 ,加热回流提取 30 min ,放冷 ,称定重量 ,加入甲醇补足减 失重量 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 ,精密量取续滤液 10 mL ,转 入 50 mL 量瓶 ,定容 ,0 . 45μm 微孔滤膜滤过 ,即得赤芍供试 液。同法制得白芍供试液。 2. 3 　曲线测定 　精密称取芍药苷对照品4 . 76 mg ,置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解 ,定容 ,分别精密量取上述溶液0 . 8 , 0 . 6 ,0 . 4 ,0 . 2 ,0 . 1 mL 于 1 mL 量瓶中 ,甲醇定容 ,于上述条 件下测定 ,进样量 20μL 。以芍药苷浓度为横坐标 ,峰面积为 纵坐标 ,绘制标准曲线 ,计算回归方程为 : Y = 13 273 417 . 73 X + 49 667 . 70 , r = 0 . 999 2 ,表明芍药苷在0 . 047 6～0 . 380 8 g·L - 1范围内浓度 ( X) 与峰面积积分值 ( Y) 呈良好的线性关 系。 2. 4 　精密度试验 　取赤芍供试品溶液 ,重复进样 5 次 ,依法 测定 ,峰面积积分值的 RSD 为1 . 89 %。 2. 5 　回收率实验 　取已知芍药苷含量的赤芍 5 份 ,各 0 . 25g ,精密称定 ,分别精密加入对照品芍药苷3 . 00 mg ,按 “2 . 2”项下方法制备供试品溶液 ,并进行含量测定 ,计算加样 回收率为97 . 85 % ,RSD 为2 . 93 %( n = 5) 。 2. 6 　重复性试验 　取同一赤芍样品 5 份 ,各1 . 00 g ,精密称 定后依“2 . 2”项下方法提取进样 ,每份测定 3 次 ,取平均值 , 以峰面积值计算 5 份样品的 RSD 为3 . 04 %。 2. 7 　稳定性试验 　对同一供试品液 ,每天进行测定 ,共 5 d , 测其峰面积积分值 ,RSD 为3 . 21 % ( n = 5) ,表明供试品液在 5 d 内基本稳定。 2. 8 　样品测定 　取赤芍、白芍供试液依法测定 ,共 5 次 ,取 平均值 ,外标两点法计算芍药苷含量 ,折合成药材含量 ,结果 赤芍中芍药苷含量为3 . 83 % , RSD 为1 . 23 % ,白芍中芍药苷 含量为1 . 67 % ,RSD 为1 . 34 %。 3 　讨论 HPL C 法测定芍药中的芍药苷 ,不仅线性关系良好 ( r = 0 . 999 2) ,回收率较高 (97 . 85 %) ,而且精密度、稳定性均符 合分析要求 ,方法准确 ,重现性好 ,可用于赤芍和白芍的质量 控制。结果可知 ,同一来源的栽培品 ,赤芍中芍药苷含量 (3 . 83 %)明显高于白芍中芍药苷含量 (1 . 67 %) 。 [收稿日期 ]2005210210 [作者简介 ] 吴洪文 ,男 ,学士 ,副主任药师 ,电话 :077223815091 ,E2mail :pp999999 @21cn. com高效液相色谱法测定抗乳腺小叶增生合剂中阿魏酸的含量吴洪文　(广西医科大学第四附属医院 ,广西 柳州 545005)[摘要 ] 　目的 :建立抗乳腺小叶增生合剂中阿魏酸的含量测 定方法。方法 :采用日本岛津 Shim2pack VP2ODS 柱 (250 mm ×4 . 6 mm ,5μm) ,以乙腈2水 (25∶75) 为流动相 ,检测波 长为 320 nm。结果 :在24 . 8～248μg·L - 1 范围内呈线性关 系 ,平均回收率为100 . 11 % ,高、中、低 3 个浓度的 RSD 值均 小于 1 %( n = 6) 。结论 :本方法简单、准确、可用于抗乳腺小 叶增生合剂中阿魏酸的快速定量分析。 [关键词 ] 　高效液相色谱法 ;抗乳腺小叶增生合剂 ;阿魏酸 [中图分类号 ] R927 . 2 　　[文献标识码 ] A 　　[文章编号 ] 10012 5213 (2006) 1021309202 　　抗乳腺小叶增生合剂是我院的自制制剂 ,处方由当归、 柴胡、白芍等 8 味药材组成 ,方中当归、柴胡为君药 ,具有活 血化淤 ,通络止痛作用。为有效控制该制剂的质量 ,保证临 床疗效的稳定。建立了测定当归主要成分阿魏酸含量的高 效液相色谱法。 1 　材料 LC - 10AV P 高效液相色谱仪 (日本岛津公司) ;阿魏酸 对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 077329910 ,供含量 测定用) ; 抗乳腺小叶增生合剂 (本院制剂室配制 ,批号 050603 ,050421 ,050305 ,500 mL/ 瓶) ;乙腈为色谱纯 ;水为注 射用水。 2 　方法与结果 2. 1 　色谱条件 　色谱柱 :日本岛津 V P - ODS 柱 (250 mm × 4 . 6 mm ,5μm) , 流动相 :乙腈2水 (25∶75) ,用磷酸调 p H 值 为2 . 5～3 ,流速 :0 . 8 mL·min - 1 ,柱温 :30 ℃,检测波长 :320 nm ,灵敏度 :1 . 0 AU FS。 2. 2 　标准曲线 　精密称取阿魏酸对照品0 . 003 1g ,置 25 mL 的量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为储备液。精 密量取储备液 5 ,10 ,20 ,30 ,40 ,50μL ,分别置于 25 mL 的量 瓶中加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得含阿魏酸 24 . 8 , 49 . 6 , 99 . 2 ,148 . 8 ,198 . 4 ,248μg·L - 1的对照品溶液 ,分别取 20μL 进样 ,测定峰面积 ,以药物浓度对峰面积进行线性回归 ,得回 归方程 : Y = 26 350 X + 4 731 , r = 0 . 999 5 ,线性范围24 . 8～ 248μg·L - 1 。见图 1。 图 1 　阿魏酸色谱图 A. 样品 ;B. 对照品 ;C. 阴性对照品 ;12 阿魏酸 ; tR = 17 . 5 min Fig 1 　Chromatograms of ferulic acid A. sample ;B. chemical reference substance ; C. blank sample ;12ferulic acid ; tR = 17 . 5 min 2. 3 　精密度试验 　在上述色谱条件下 ,取99 . 2μg·L - 1 的对 照品溶液 ,重复进样 6 次 ,峰面积的 RSD (日内) 为0 . 52 % , RSD (日间)为0 . 77 % ,精密度良好。 2. 4 　重复性试验 　精密称取同一批号样品 5 份 ,每份 30 mL ,按样品测定方法操作。结果阿魏酸平均含量为30 . 2μg· L - 1 ,RSD 为0 . 72 % ,重复性良好。 2. 5 　样品测定 　精密取 30 mL 样品 ,用 5 %碳酸氢钠溶液 提取 4 次 ,每次 10 mL ,合并提取液 ,再用稀盐酸调 p H 值为 ·9031·中国医院药学杂志 2006 年第 26 卷第 10 期 Chin Hosp Pharm J ,2006 Oct ,Vol 26 ,No . 10