大肠杆菌病Colibacillosis

null大肠杆菌病Colibacillosis大肠杆菌病Colibacillosis一、Summarize： 大肠杆菌是正常肠道菌群的组成部分，有维护肠腔生态平衡、生物拮抗、维生素合成等重要作用，是非致病菌,一些特殊血清型的大肠杆菌对人和各种动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜(禽). 病型复杂多样，临床现以腹泻、败血症、赤痢样症候群以及肠毒血症为特征。 大肠埃希氏菌所致的尿道感染、乳房炎、子宫炎也是重要的大肠杆菌病。随着大型集约化养畜 (禽)业的发展，病原性大肠杆菌对畜牧业所造成的损失已日益明显。 在美国新生动物下痢48%由大肠杆菌引起。二、etiology二、etiology１．  一般特性：无sprout，有flagella，Gram-negative，多数无荚膜、对外界因素抵抗力不强。 ２．  抗原构造： somatic (0) 、 173 capsular (K ) 、 103 flagellar (H)antigens， 60 按抗原成分不同，可组合为几千个血清型。 血清型用O:K:H O:K O:H表示，最近，菌毛 (F)抗原被用于血清学鉴定。nullnullnullnullnull3、categories3、categories1）肠产毒型大肠杆菌 (enterotoxigenic E.coli, ETEC)婴幼儿和旅游者腹泻，动物、婴儿、成人腹泻的重要病原； 致病物质 肠毒素enterotoxin heat labile enterotoxin(LT) heat stable enterotoxin(ST) 定植因子(菌毛）2)肠侵袭型大肠埃希菌 (enteroinvasive E.coli, EIEC)2)肠侵袭型大肠埃希菌 (enteroinvasive E.coli, EIEC)腹泻似菌痢样，有脓血便，有里急后重 致病机理 侵袭结肠粘膜上皮并繁殖 细菌死亡后释放内毒素，引起炎症和溃疡 致人（猴）的痢疾。 还引起食物中毒。 3)肠致病型大肠杆菌 (enteropathogenic E.coli, EPEC) 3)肠致病型大肠杆菌 (enteropathogenic E.coli, EPEC) 在较温暖季节发生 引起婴幼儿腹泻 幼兔腹泻 食物中毒。 致病机理 Intimin (紧密素）粘附和破坏肠粘膜微绒毛 上皮细胞排列紊乱，功能受损，导致腹泻 EPEC4）肠出血型大肠杆菌 (enterohemorrhagic E.coli, EHEC)4）肠出血型大肠杆菌 (enterohemorrhagic E.coli, EHEC)亦称为VTEC，即Vero毒素大肠杆菌 Shiga toxin-producing E. coli, STEC，能产生（Vero）Shiga-like toxin,故称SLTEC 血清型为 O157:H7，引起人出血性肠炎 临床表现 轻重不一 10%小于10岁患儿，有严重并发症，死亡率高 EHEC 致猪水肿病，人结肠炎、溶血性尿毒综合症。 致病因子 菌毛 毒素 Vero毒素 内毒素与溶血素； 5）肠集聚型大肠杆菌 (enteroaggregative E.coli, EAggEC)5）肠集聚型大肠杆菌 (enteroaggregative E.coli, EAggEC)婴儿持续性腹泻 致病因子 肠集聚耐热毒素（EAST） 菌毛 α溶血素 3. categories3. categories6)Septicemic E.coli, SEPEC,产生大肠杆菌素、溶血素及Cytotoxic necrotising factor(CNF)等，引起人、牛、猪、禽等败血症； 7) Uropathogenic E.coli, UPEC,定植于尿道，感染仅于人； 8)Neonatal Meningitis E.coli, NMEC,合成K1荚膜抗原，抗吞噬和补体，感染仅于人；引起腹泻的大肠杆菌引起腹泻的大肠杆菌四、Pathogenesis四、Pathogenesis1.定居与粘附素(colonize&adhesins)：又称菌毛或F抗原， Adhension Factor /Colonizing Factor /Pili /Fimbrise ETEC进入小肠 后，必须首先克服自然清除机制，粘附于小肠粘膜才能发挥致病作用。 正常情况下，小肠前1/3段有少量存在。当抗体缺乏，pH升高，蠕动减弱，机体应激等条件下，可使进入小肠前段 E、coli 大量繁殖，如正常动物空肠中段为104，腹泻动物可达成109，粘附能力与粘附素有关。 粘附素固着于肠粘膜表面细胞的特异性受体上，从而使E、coli定居于粘膜。常见粘附素有以下几种：常见粘附素有以下几种：K88：由质粒编码，能粘着于小肠各段上皮细胞,in pigs; K99：in calves &in lambs、猪源性ETEC，粘着仅限于年幼动物的小肠后段上皮细胞 987P：见于某些牛、猪源性ETEC，粘着限于年幼动物的小肠后段上皮细胞 F41：见于具有O9、O101抗原的牛、猪源性ETEC，有的菌株还具有K99抗原. 从猪源大肠杆菌中发现了K88.K99、987P、F41、F42、F107等6种粘附因子 . 2.Endotoxin (lipopolysaccharide,LPS)2.Endotoxin (lipopolysaccharide,LPS) . PathogenesisPathogenesis3.内毒素：类脂A成份 4.侵袭性:某些ETEC，象各种志贺氏菌一样，具有直接侵入并破坏肠粘膜细胞的能力。 5.大肠杆菌素V(Col·V) :具有产生此质粒与细菌引起败血症的能力有关。 6.过敏反应:仔猪在产前由母猪子宫，产后由初奶或接触外界大肠杆菌，获得或产生特异抗体，使组织致敏;已被致敏的仔猪如摄入相应的病原性大肠杆菌，在肠内繁殖，释出多量抗原作用于致敏的组织，可引起过敏反应，发生腹泻、水肿及其他症状。分离培养与鉴定分离培养与鉴定1．肠外感染。 （1）涂片染色检查： 脓、痰、分泌物可直接涂片，革兰染色后镜检。 尿液和其它液体先低速离心，再取沉淀物作涂片。 （2）分离培养： 血液接种肉汤增菌，待生长后再移种血琼脂平板。 体液标本的离心沉淀物和其它标本直接划线分离于血琼脂平板。35-37℃孵育18-24小时后观察菌落形态。 （3）鉴定：初步鉴定根据IMViC（++--）试验，最后鉴定靠系列生化反应。 尿路感染需作菌落记数，每毫升≥10万才有诊断价值。分离培养与鉴定分离培养与鉴定2．肠内感染 将粪便标本接种于鉴别培养基，挑选可疑菌落并鉴定为大肠杆菌后，再分别不同类型致腹泻大肠杆菌的肠毒素、毒力因子和血清型等特征。分离培养与鉴定分离培养与鉴定（1）ETEC： 过去用动物或细胞培养测定LT或ST，较为复杂； 现可用ELISA法或基因探针检测这些肠毒素。 （2）EIEC：与志贺菌相似，多数EIEC无动力，乳糖不发酵或迟缓发酵。 毒力试验可将被检菌液接种于豚鼠眼结膜囊内，可产生典型的角膜结膜炎症状，在角膜上皮细胞内有大量细菌，为Senery试验阳性。 分离培养与鉴定分离培养与鉴定（3）EPEC：用特异O、H抗血清测定特异血清型，亦可以ELISA和细胞培养法来检测 （4）EHEC：O157：H7血清型多数对山梨醇不发酵或缓慢发酵。VT毒素可用ELISA法测定，灵敏度达60pg/ml，亦可用PCR法结合基因探针检测VT基因。 （5）EAEC：用液体培养-集聚试验检测受检菌的粘附性，或用探针技术测定EAST基因。null三、各种动物的大肠杆菌病 三、各种动物的大肠杆菌病 （一）猪大肠杆菌病 １.仔猪黄痢(yellow scour of newborn piglets )，新生仔猪的一种急性、高度致死性疾病，以腹泻、排黄色液状粪便为特征。 （1）Epidemiology：主要发生于1周龄内，1-3日龄内仔猪最多，生后8-12h即可发病，在自繁自养猪场，尤为头胎母猪所产的仔猪最多发生。一窝中由1头迅速传至全窝，发病率常在90%，但母猪不发病。 带菌母猪排菌，污染地面，皮肤、乳房，仔猪经口感染后又进一步使环境污染严重，传染于其它母猪； 季节性产仔的猪场，则呈季节性发生。 发病诱因：发病诱因：气候剧变，易诱发本病。大型集约化养畜 (禽)场畜 (禽)群密度过大、通风换气不良、消毒不彻底，是加速本病流行的不容忽视的因素。 仔畜未及时吸吮初乳， Insufficient or no colostral immunity 过于拥挤,卫生不良,Overcrowding and poor hygiene 饥饿或过饱，饲料不良、配比不当或突然改变， Digestive tract of young pigs equipped only for easily digested foods. Stress factors such as cold ambient temperatures and frequent mixing of animals 、ventilation poor，humidity 。 receptorsreceptorsPigs retain receptors for some adhesins past weaning age (about 7 weeks,post-weaning diarrhoea) Receptors for ETEC adhesins are present only during first week of life in calves,lambs .（2）Clinical signs and lesions（2）Clinical signs and lesions 生后12小 时以内即可发病，长的也仅1一3日，较以更长者少见。 最急性：一窝仔猪出生时体况正常，经一定 时日，突然有1一2头表现全身衰弱，迅速死亡。 急性：以后其他仔猪相继发病，可见排出水样、黄色液状稀便内含凝乳小片，很快消瘦、脱水，衰竭、昏迷而死。食欲稍减，但一般不发热。 nullnulllesionslesions主要见于肠道，小肠（尤为十二指肠）呈急性卡它性炎症，肠系膜淋巴结肿大，充血、多汁 肝、肾、脾有灰白色坏死灶null2。仔猪白痢 （White scour of piglets）2。仔猪白痢 （White scour of piglets）是2—3周龄仔猪常发的一种以排泄灰白色带腥臭糊状粪便为特征。发生较黄痢为普遍，死亡率要低，但据四川内江地区报道发病率达89.96 % ，死亡率45.22% （1）流行病学：发病日龄10—20日龄，30日龄以上少见，此时乳汁抗体急剧减少，主动免疫刚开始出现，此时仔猪开始舐食异物，特别在应激因素影响下，引起菌体失调症，即肠道细菌微生态环境紊乱，病原性ETEC达小肠大量繁殖，引起发病。多是成窝发病，在产仔季节。 （2）Clinical signs and lesions：（2）Clinical signs and lesions：病猪突然发生腹泻，排出灰（乳）白色浆状、糊状粪便，具腥臭，性粘腻。 腹泻次数不等。病程2一3天，长的1周左有，能自行康复，脱水，消瘦，成为僵猪，死亡的很少。 体温食欲变化不大。lesions： 消瘦、尸体外表苍白。 胃内积食，小肠呈卡它性炎症，结肠物乳白色、浆糊状。肠系膜淋巴结轻度肿胀。 lesions： 消瘦、尸体外表苍白。 胃内积食，小肠呈卡它性炎症，结肠内容物乳白色、浆糊状。肠系膜淋巴结轻度肿胀。 3.仔猪水肿病 Edema disease of pigs 3.仔猪水肿病 Edema disease of pigs 是小猪的一种肠毒血症引起变态反应，发病率虽不很高，但病死率很高，给养猪生产造成损失。 常见的有O8，O45，O138，O139，O141等血清群，多能溶解绵羊RBC，我国也以O139为主。 其特征为胃壁和其他某些部位发生水肿。 初生时发过黄痢的仔猪一般不发生本病。 （１）   epidemiology ：（１）   epidemiology ：①     断奶前后半个月发生，（4－5月龄架子猪也有）与仔猪特异性抗体消失有关。 ②  多为膘肥体壮的猪。 ③ 与饲料单一或浓厚蛋白质饲料或饲养方法突然改变有关，或与气候变化有关。 ④国外报道：发病常常有1－2天轻度腹泻为先兆。 有些呈季节性（4－5，9－10月），散发，一般不传染同栏猪。 （2）   症状：（2）   症状： ①  猪突然发病，精神沉郁，食欲减少或口流白沫， 病猪静卧，肌肉震颤，不时抽搐，四肢划动作游泳状，发呻吟声或作嘶哑的叫鸣。出现运动失调，步态摇摆不稳，盲目前进或作圆圈运动，后肢无力，全身瘫痪 。 ②  水肿是本病的特殊症状，常见于眼睑和面部．结膜、齿龈，下颌间隙等处，有时在颈部和腹部皮下。 ③体温不高或低于常温。nullnull死于仔猪水肿病的猪,眼睑水肿 死于仔猪水肿病的猪,眼睑水肿 null（3）pathogenic changes ：（3）pathogenic changes ：主要为面部、眼睑、胃（大弯部,greater curvature of the stomach ）水肿。 结肠系膜( mysentery of the colon )、胆囊、肠系膜淋巴结、喉头、肺、脑等组织水肿。 胸、腹腔、心包均积有多量胶冻状液体。 组织学 histological examination ：perivascular oedema in the central nervous system 水肿部嗜酸性细胞浸润。 死于仔猪水肿病的猪,胃壁严重水肿死于仔猪水肿病的猪,胃壁严重水肿 病死于猪水肿病的猪,结肠袢肠系膜严重水肿 病死于猪水肿病的猪,结肠袢肠系膜严重水肿 nullnull大肠杆菌引起肠系膜水肿、血管充血null大肠杆菌引起肠系膜水肿液形成nullnullnullDiagnosisDiagnosis根据发病日龄、黄痢等特点，可作出初诊，确诊需作微生物学检查，需作一些类症鉴别。 病料：败血型为血液、内脏组织，肠毒血症为小肠前部肠粘膜，肠型为发炎的肠粘膜。 第一步，简易法鉴定粪便酸、碱性：ETEC属分泌性腹泻，内容物碱性，而吸收不良性腹泻，为酸性（病毒性腹泻）； 第二步，将濒死或死亡不久的仔猪小肠前、中、后段内容物（有时可用新鲜粪便）接种于麦康盖平板，挑取红色菌落作生化、溶血等试验。第二步，将濒死或死亡不久的仔猪小肠前、中、后段内容物（有时可用新鲜粪便）接种于麦康盖平板，挑取红色菌落作生化、溶血等试验。DiagnosisDiagnosis如分离到（从小肠前段）有大量单纯E、coli，可疑为仔猪黄痢的一个特征，进一步对分离出的大肠杆菌应进行血清型鉴定及致病性鉴定。 同一发病猪场，大多可分离到同一种O抗原型，多数有溶血性。 有条件或必要性时，可用10%福尔马林固定小肠组织作病理学检查，粪便液可作电镜检查。 近年来，国内外已研制出猪、牛大肠杆菌病的单克隆抗体诊断制剂。 nullnullnull（4）防治 （4）防治 ①一般预防措施：不从有病猪场引种，固定猪圈、运动场，生产时产房及母猪阴部、乳房用0.1%KMO4消毒，接产时挤棹少许乳汁，注意营养不良（如日粮成分不均衡，维生素缺乏）及影响乳汁分泌疾患（如母猪全身感染 、乳腺炎，不吃常乳仔猪对E、coli同样易感。 ②免疫接种:是减少仔猪黄痢是最有效方法,菌苗有灭活、弱毒及基因工程疫苗及主要0抗原和K88和多价菌毛抗原苗。一般说，自家autogenous killed vaccines（当地流行菌型）疫苗给妊娠母猪（产前3—4周）经口免疫（多价、不用抗生素）效果较好. null安徽按此法免疫，仔猪保护率达85.31%,灭活苗在产前4-6周和1-2周两次皮下或肌肉免疫母猪,也有较好的效果、如湖北兽研所用此法，仔猪保护率达 80.67% ③药物（抗血清）预防：母猪临产—产后3-5天投喂抗生素，仔猪可口服抗血清或使用抗生素，一日二次，连用4—5日。 null④其它预防方法：用微生态制剂，如NY-10为非病原性和一株猪源的嗜酸性乳酸杆菌混合冻干，用它喂刚出生的小猪，肠道中能繁殖处被大量NY-10菌占领，与乳酸杆菌共同组成一个正常肠道菌群，竞争性抑制排斥病原性E、coli繁殖。10天后NY-10菌从肠道中完全消失，对两广，上海等10个猪场试验，结果如下：推广应用防病效果达75%,少数猪场无效或出现轻微症状。推广应用防病效果达75%,少数猪场无效或出现轻微症状。(原因:投了抗生素、之前已感染、母猪中有抗体、其它病原)使用方法：产出后滴0.2-0.3ml经1.5-2h再喂奶。使用方法：产出后滴0.2-0.3ml经1.5-2h再喂奶。 其它如促菌生、乳康生、调痢生（8501）等都有较好作用。 用遗传的方法培育缺乏K88受体的猪，用蛋白酶饲料添加剂控制仔猪腹泻，破坏其消化道表面的蛋白受体分子，使之与成年猪相似,不残留，不会使病原产生抗性。 仔猪白痢防治仔猪白痢防治提早开食，补铁预防贫血，运动场面散黄泥等， 药物治疗：抗菌、收敛止泻助消化等，但下痢应及早投药或注射，若48h再治疗，治愈率30%以下； 中兽医疗法：小种倒勾藤，白痢灵注射液，辣蓼注射液、十滴水、羊红膻等治愈率均在90%以上； CO2 激光治疗：将医疗机导光头对准交巢穴，开动高压微动开关，即有激光束射出烧灼穴位，一次治愈率92—95、8%，药物对照组61、5%,三天疗程。6天后恢复不留疤痕。美国学者Y、C、Hwang等，用针灸治疗ETEC腹泻，治愈率81、8%，超过电针和新霉素疗法。 （增加体内白细胞数，Ig含量，无抗药性，消毒问，烧灼6天后恢复，不留疤痕） 大肠杆菌腹泻大肠杆菌腹泻本病的急性经过往往不及救治，可使用经药敏试验对分离的大肠杆菌血清型有效的抗生素如氟本尼考、氯霉素、磺胺类。 猪水肿病诊断：猪水肿病诊断：注意类症鉴别，确诊需由小肠内容物分离病原性E.coli，血液、脏器一般无E.coli。 山东牧医所有IHA的方法诊断。 angiopathy血管病:fibrinoid necrosis in vessel walls may develop in animals surviving acute disease . 猪水肿病防治：猪水肿病防治： ①逐步改变饲料及饲养方法（尤其断奶前后）。 ②发病地区和季节，用呋喃西林、痢特灵、土霉素、SM、大蒜等药物预防，并少喂精料。例如江西农大研制预防剂，预防率93％，死亡率从10 →2％以下（对1785样品，3个猪场）。 ③治疗：福建泰宁畜．水产局－治愈率90％（121／137）：氢化可的松25mg／im,10%SM20ml/腹腔注射，商陆，生姜，蒜头，红糖熬汤服用(可结合VB1,VB12 im)治疗4日，第5日康复。 nullnull（二）   犊牛大肠杆菌病(犊牛白痢)（二）   犊牛大肠杆菌病(犊牛白痢) 涉及血清群O8,O9,O20,O101，12%的分离物产生肠毒素，通常为ST，总与K99相联系. 1. epidemiology ：1周龄内犊牛最易感，但2—3周龄也有，一般情况下E．Coli感染不发病，但与RV、CV、BVDV、沙门氏菌，隐胞虫混合感染则可发病。 多见于冬春舍饲季节，诱因未食初乳，喂人工乳或乳中缺乏Ab。 1．Clinical signs ；可分三型 1．Clinical signs ；可分三型 1)、败血型 潜伏期很短，仅几个小时。生后—7日龄(未吃初乳)，病犊表现发热， 精神不振，衰弱 ，间有腹泻，常于症状出现后数小时至一天内急性死亡。 有时病犊未见腹泻即归于死亡。 从血液和内脏易于分离到致病性血清型的大肠杆菌。Clinical signsClinical signs2)、肠毒血型：(7日龄内吃初乳)，较少见，常突然死亡。如病程稍长，则可见到典型的中毒性神经症状，先是不安、兴奋，后来沉郁、昏迷，以至于死。死前多有腹泻症状。 3)、肠型：(7—10日龄，吃初乳)，病初体温升高达40C，数小时后开始下痢，体温降至正常。粪便初如粥样、黄色，后呈水样、灰白色，混有未消化的凝乳块、凝血及泡沫，有酸败气味。 有的还表现关节炎和肺炎症状。 LesionsLesions败血症或肠毒血症死亡的病犊，常无明显的病理变化。 腹泻的病犊，真胃有大量的凝乳块，胃粘膜充血、水肿。小肠粘膜充血,出血，覆有粘液，肠内容物水样、常混有血液和气泡，恶臭。 部分粘膜肠系膜淋巴结充血、肿大。 肝脏和肾脏苍白，有时有出血点，胆囊内充满粘稠暗绿色胆汁。心内膜有出血点。 病程长的病例在关节和肺也有病变。4．防治：4．防治：①加强孕牛的饲养管理。 ②尽早喂初乳。 ③抗菌素治疗：注意早期发现，选择敏感药物，投药量初为治疗量的2倍肠型配合补液，防止酸中毒 ④孕牛pregnant cows接种可将带有K99菌毛抗原的单、多价苗，国外常与轮状病毒疫苗联用，也可用同群母牛采取的血清、γ球蛋白制剂用于预防。犬大肠杆菌病 犬大肠杆菌病 (1)流行特点：本病主要发生在1周龄以内的仔犬。病的发生与不良的饲养管理有关。 (2)临床特征：病仔犬表现精神沉郁，体质衰弱，食欲不振，最明显的症状是腹泻，排绿色、黄绿色或黄白色，粘稠度不均，带腥臭味的粪便，并常混有未消化的凝乳块和气泡，肛门周围及尾部常被粪便所污染。至后期，病仔犬常出现脱水症状，可视粘膜发绀，两后肢无力，行走摇晃，皮肤缺乏弹力。死前体温降至常温以下。病死率较高。有的在临死前出现神经症状。     通常根据发病年龄及腹泻特点，即可作出初步诊断。必要时应采取病死大小肠内容物送检。   防治措施：防治措施：      第一、加强饲养管理，搞好环境卫生。尤其是母犬临产前，产房应彻底清扫消毒，母犬的乳房被粪便污染时，要及时清洗。     第二、发现病犬应立即治疗。很多药物对大肠杆菌都有较好的疗效，但必须早期发现、早期治疗。 (1)补液5%糖盐水40—100毫升，静脉注射，每日1次；可选用四环素0.1-0.15克/公斤体重，口服，每日3—4次。 对重症病例，补液中加碳酸氢钠溶液。并保证足够的清洁饮用水，预防脱水。 (2)双嘧啶11毫克/公斤体重，每日1—2次，口服，连服5—7日。 其他药物有氟苯尼考、大蒜酊，以及其他消炎止泻的药物，如泻痢宁(每次口服2-4个胶囊)等。 对同窝未发病的仔犬，可用上述药物预防。预 防预 防用针对本地 (场)流行的大肠杆菌血清型制备的活苗或灭活苗接种妊娠母畜，可使仔畜获得被动免疫。 在ETEC的免疫预防研究中，发现其菌毛抗原在自然感染和人工主动免疫中是关键抗原之一。在家畜中，用菌毛疫苗防治新生畜崽腹泻已获得成功。例如在孕牛产前6个月接种大肠杆菌K99株的菌毛抗原，则新生牛犊吮乳后可被动获得特异菌毛抗体而受到同型菌毛型大肠杆菌感染的免疫保护 .用重组DNA技术研制成功的仔猪大肠杆菌病K88基因工程苗也已投放市场 null