料大鼠脂质代谢及血小板功能的影响

华中科技大学同济医学院 硕士学位 桑蚕蛹油对高脂饲料大鼠脂质代谢 及血小板功能的影响 研 究 生:杨 雪 锋 指导老师:黄连珍教授 摘 要 本文以高脂饲料大鼠为研究对象，观察桑蚕蛹油和桑蚕蛹油加 维生素 E WE)对大鼠脂质代谢和血小板功能的影响，并与红花 油进行比较，对其降脂作用及抑制血小板聚集的机理进行了初步探 讨。雄性成年Wistar大鼠50只，体重150.01 15.0g，按血脂水平 随机 为5组，每组10只动物:A组 (正常对照组)，喂饲基础饲 料;B组 (高脂对照组)，喂饲高脂对照饲料;C组(桑蚕蛹油组)， 喂饲桑蚕蛹油饲料;D组(桑蚕蛹油+VE 组)，喂饲桑蚕蛹油+VE 饲料;E组 (红花油组)，喂饲红花油饲料。每天称进食量，每周 称体重1次。第3周末取尾血测定血清总胆固醇 (TO、甘油三酷 (TG)和高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)水平。饲养6周后，每 组随机取6只动物，乙醚麻醉，心脏取血2.5m1。其中0.9m1用3.8% 拘椽酸钠以9:1抗凝，2h内进行血小板聚集率测定;另外 1.6ml 用消炎痛一EDTANa2溶液抗凝，测定血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮- 前列腺素Fla(6-k-PGFI.)水平。所有动物于6周末断头处死，取血 和肝脏测定相关指标。 实验结果表明，第3周末，C组大鼠血清TG. TC和低密度脂 蛋白胆固醇 (LDL-C)水平显著低于B组，与E组间无显著性差 异，而C组大鼠血清HDL-C水平显著高于B组和E组，致动脉粥 样硬化 (AS)指数 (AI)显著低于B组和E组。这些变化一直持 续至第 6周末实验结束。C组大鼠血清卵磷脂胆固醉酞基转移酶 (LCAT)活性显著高于B组和E组。肝脏脂质测定结果显示，C 组大鼠肝脏TG水平、肝/体比值显著低于B组，与E组间无显著 性差异，而肝脏TC水平显著低于B组和E组。结果提示，桑蚕蛹 油可显著降低高脂饲料大鼠血脂水平，并且与红花油相比，可升高 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 HDL-C水平和LCAT活性，降低肝脏TC水平，促进胆固醇的清除。 这说明富含a一亚麻酸的桑蚕蛹油在降脂方面，特别是降低胆固醇 水平的作用比红花油更为明显。 实验结束时，C组大鼠血小板聚集率、血浆TXB:水平显著低 于B组和E组，与A组间无显著性差异。C组大鼠6-k-PGF ,。水 平显著高于B组，TXB2/6-k-PGF ,o (T/P)比值显著低于B组和E组。 这提示桑蚕蛹油可通过影响血栓素A2(TXA2)与前列腺素I2(PGI2) 的平衡而抑制血小板聚集。 D组大鼠血清VE 水平显著高于C组，血清丙二醛 (MDA) 水平显著低于C组。并且与C组相比，D组大鼠血清TC, LDL-C 水平、血小板聚集率和血浆T/P比值也显著降低。这一结果表明， 桑蚕蛹油中加入VE ，可有效抑制脂质过氧化反应，同时更有效地 降低胆固醇水平和抑制血小板聚集。 从以 降低高脂 实验结果可以看出，富含a一亚麻酸的桑蚕蛹油可显著 料大鼠血清TC、TG和LDL-C水平。并且与红花油相 比，在升高血清HDL-C水平和LCAT活性，降低血清胆固醇的同 时，促进胆固醇清除，降低肝脏胆固醇水平，说明桑蚕蛹油比红花 油具有更强的降胆固醇作用。同时桑蚕蛹油可通过影响花生四烯酸 (AA)的代谢产物TXA2和PGI2的平衡而抑制血小板聚集，从而 抑制血栓形成。桑蚕蛹油中加入VE ，不仅抑制了脂质过氧化反应， 同时具有降低胆固醉和抑制血小板聚集的作用，这对于合理开发利 用桑蚕蛹油，防治AS等心血管疾病有重要意义。 、 丫 V V 关键词 桑蚕蛹浦,“一亚麻酸 维生素E血脂 血小板聚集率 LCAI TXB， 6一k一GFIeLCAT TXB2 6-k-PGF. 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 Effect of silkworm pupa oil on lipid metabolism and platelet function in rats fed high-fat diet Postgraduate :Yang xuefeng Tutor: Prof Huang lianzhen Abstract Effect of silkworm pupa oil on lipid metabolism and platelet function were investigated in rats fed high-fat diet.According to their serum lipids Ievel,50 adult male Wistar rats were divided into 5 groups:A(normal control group);B(high-fat control group); C (silkworm pupa oil group);D(silkworm pupa oil +VE group); E(saftlower oil group).The rats in each group were fed different diet for six weeks respectivelyThe findings were as following: Three weeks later, significant decreases in serum triglycerides (TG), total cholesterol (TC)、low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) level were found in group C compared with the group B, different in comparison with group E insignificantly.However,serum high-density lipoprotein cholesterol《耳DL-C) level in group C was significantly higher and atherosclerotic indices (Al) value lower than that in group E. These changes lasted to the end of experiment. The activity of serum LCAT was significantly higher in group C than in group B and group E. Hepatic TG level, hepar/body weight ratio of group C were remarkedly lower than those of group B, whereas no signicant difference was seen in comparison with group E. But hepatic TC level was signicantly lower in group C than in group E. The results indicate that silkworm pupa oil has a more potent cholesterol-lowering ability than safflower oil. As for platelet function, platelet aggregability, thromboxaneBZ (TXBZ) level and TXB?16-k-PGFI,(T/P) ratio in group C were lower 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 than those in group B and group E,plasma 6-keto-prostaglandin F,a (6-k-PGF,口)level higher than that in group B.The results suggest that effect of silkworm pupa oil on balance between thromboxane A2(TXA2) and prostaglandin 12( PGI2) may be responsible for its inhibition of platelet aggregation. Compared with group C, a significant increase of serum VE level and a decrease of serum MDA level, TC、LDLC level, platelet aggregability and UP ratio were observed in group D. The results suggest that VE supplement may suppress lipid peroxidation effectively,moreover, reduce cholesterol level as well as inhibit platelet aggregation. From the results,we concluded that silkworm pupa oil rich in a -linolenic acid can reduce serum lipids in rats fed high-fat diet.Compared with safflower oil,silkworm pupa oil can increase serum HDL-C level and activity of LCAT and decrease hepatic TC level.Moreover,silkworm pupa oil can inhibit platelet aggregation by affecting balance between TXA2 and PGI2.VE supplement can suppress lipid peroxidation and reduce cholesterol level as well as inhibit platelet aggregation. These are of importance in the effect of silkworm pupa oil on prevention and treatment of atherosclerosis and other cardiovascular diseases Key words:silkworm pupa oil alpha-linolenic acid vitamin E serum lipids platelet aggregability LCAT TXB2 6-k-PGFI.o 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 前 言 膳食中脂肪酸的含量和组成是影响动脉粥样硬化 (AS)等心 血管疾病的重要因素。一般认为(1)饱和脂肪酸和胆固醇加速AS 和其他心血管疾病的进程，而不饱和脂肪酸则减少心血管疾病的发 生。膳食中存在两种人体必需脂肪酸(EFA):亚油酸 (LA)和Q- 亚麻酸(a -LNA)。亚油酸是n-6系多不饱和脂肪酸(PUFAs)的母 体，其对健康的影响己为人们所熟悉，是美国和欧洲一些国家膳食中 EFA的主要来源。近年来，n-3系PUFA的母体a一亚麻酸的生理必 需性和对生长发育的影响以及在疾病和健康中的作用引起了人们 的普遍重视。国内外的流行病学调查和动物实验「2-a」结果表明，。- 亚麻酸具有降低血脂水平，抑制血栓形成以及抗心律失常等多种心 血管保护作用，可明显降低心肌梗塞的再发生率和冠心病死亡率。 随着研究的深入，研究者发现a一亚麻酸在调节脂质代谢和抑制血 小板聚集方面比亚油酸更为有效。Sakai等151人用大鼠和小鼠两种 模型比较了富含a一亚麻酸的苏子油和富含亚油酸的红花油对脂质 代谢的影响，发现苏子油比红花油具有更强的降低血清和组织胆固 醇的作用。Freese等[61的人群实验结果表明，膳食中。一亚麻酸与亚 油酸的比值是影响花生四烯酸(AA)转化为血栓素A2(TXA2)的主 要因素，血小板聚集率随着比值的增加而降低。Watanabe[71的动物实 验也得到了相似的结论。故有人建议，增加膳食中a一亚麻酸的量， 减少亚油酸的量，对于防治AS、心肌梗塞等慢性病有重要意义。 桑蚕蛹油是桑蚕蛾科昆虫家蚕的蛹经一定的工艺过程提炼出 来的油脂，含有80%左右的不饱和脂肪酸，产地不同，脂肪酸的组 成差异较大，但。一亚麻酸的相对含量很高181。目前，国内外对a_ 亚麻酸的研究多数限于植物来源的苏子油和亚麻籽油。仅有一例报 导冈中医用桑蚕蛹油提纯品制成丸剂，治疗高胆固醉血症和冠心 病，疗效显著，还未见有详细的实验资料。我国是产蚕大国，桑蚕 蛹油资源非常丰富，如能合理地开发利用，则在食品、医药等领域 具有巨大的经济价值和社会价值。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 维生素E(VF)通常用做抗氧化剂和自由基清除剂抑制体内的 脂质过氧化反应。也有报道VE 可降低血脂水平not，抑制血小板聚 集fill。本实验在桑蚕蛹油中加入VE，观察其抗氧化反应的同时， 也观察了它对脂质代谢和血小板功能的影响。 因此，本实验的目的在于:一、观察富含a一亚麻酸的桑蚕蛹 油对高脂饲料大鼠脂质代谢的影响，并与富含亚油酸的红花油进行 比较，对其降脂作用的机理进行初步探讨。二、观察桑蚕蛹油对高 脂饲料大鼠血小板功能的影响。三、在桑蚕蛹油中加入抗氧化剂 VE,观察其对脂质过氧化的抑制作用和对脂质代谢及血小板功能 的影响。 1.材料与 1.1实验油 猪油系自行炼制;桑蚕蛹油由湖北大学生命科学院提供， a -LNA/LA=525;红花油由中国科学院植物研究所提供， a -LNA几A<0.01;均低温、避光保存。 1.2动物饲养及分组 湖北省医学实验动物中心提供的雄性成年Wistar大鼠50只， 体重150.0士15.0克，适应性喂养一周，禁食12h，次日晨取尾血 测定血清TG, TC水平。按血脂水平参考体重分为五组:A组，正 常对照组;B组，高脂对照组;C组，桑蚕蛹油组;D组，桑蚕蛹 油+VE 组;E组，红花油组，每组10只动物。分别饲以相应各组 饲料。每天称进食量，每周称体重1次。第3周末取尾血测定血清 TG, TC和HDL-C水平。饲养6周后，每组随机取6只动物，乙 醚麻醉，心脏取血2.5ml。其中0.9m1用3.8%构稼酸钠以9:1抗 凝，2h内进行血小板聚集率测定;另外1.6m1用消炎痛一EDTANa2 溶液抗凝，测定血浆TXB2和6-k-PGF,。水平。所有动物于6周末 断头处死，取血和内脏测定相关指标。 基础饲料由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。高脂 饲料配方:93.5%基础饲料，0.5%牛胆盐，1%胆固醇，5%猪油。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 在高脂饲料中分别加入 5%猪油、5%桑蚕蛹油、5%红花油组成高 脂对照组、桑蚕蛹油组和红花油组饲料。在桑蚕蛹油饲料中加入 50mg/kgVE，作为桑蚕蛹油+VE组饲料。饲料每周配制1次，低温 保存，防油脂氧化。 13主要试剂及仪器 1.3.1主要试剂 胆固醇 武汉天益生化试剂公司 牛胆盐 武汉天益生化试剂公司 VE胶囊 厦门鱼肝油厂 胶原 Sigma公司 TC, TG, HDL-C试剂盒 北京中生生物高技术公司 游离胆固醇试剂盒 上海联阳生物技术有限公司 VE, MDA试剂盒 南京建成生物制品研究所 TXBZ, 6-k-PGF,。试剂盒 解放军总医院科技开发技术 中心放免研究所 1.3.2主要仪器 722型光栅分光光度计 国产 FSH-2型高速电动匀浆器 国产 半自动血凝检测仪 国产 SN-682型放射免疫r计数仪 国产 1.4测定指标及检测方法 1.4.1血清TC, TG, HDL-C水平测定和LDL-C水平、Al值计算 1.4.1.1血清TG, TC, HDL-C水平测定: 酶联比色法，按试剂盒说明书进行。 1.4.1.2 LDL-C水平和AI值: 用计算，LDL-C(mmoVL}--TC-(HDL-C+TGx 0.458)1'21 Al=(TC-HDL-C)/HDL-C a 14.2肝脏脂质测定 以异丙醉制备10%的肝组织匀浆，40C冰箱静置48h后离心， 取上清按酶法测定TG, TC含量。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 1.4.3血清MDA, VE水平测定 MDA采用TBA比色法，VE用紫外分光光度法比色测定，严 格按试剂盒说明书进行。 1.4.4血清卵磷脂胆固醇酸基转移酶 (LCAT)活性测定 采用蒋宪成等[131报道的自身底物法，测定血清在370C保温 40min后游离胆固醇的减少量，并以其减少量表示LCAT活性 (每 小时胆固醇酷化量umol/L血清)，游离胆固醇测定按试剂盒说明书 进行。 1.4.5血小板聚集率测定 以3.8%*#酸钠抗凝的血样在160g离心10min，制得富血小 板血浆(PRP),剩余血样在1000g离心l Omin制得贫血小板血浆 (PPP)。用PPP调节PRP使血小板计数为5x 108m1-'，加入致聚 剂胶原(最终浓度为l Omg/L),测定5min最大聚集率。 1.4.6血浆TXB2, 6-k-PGF, o测定 以消炎痛-EDTANa2抗凝的血样3500g离心，取上清液用1125- 标记放射免疫法测定，严格按试剂盒说明书步骤进行。根据测定结 果计算TXB2/6-k-PGF, e，即UP比值。 15统计方法 采用SAS软件包进行方差分析。 2实验结果 2.1实验油对大鼠平均进食量、体重增长的影响 (表1)。 表1实验油对大鼠平均进食量、体重增长的影响 《了士S,9) 组别 n 平均进食量 初始休重 体重增长 21.3士2刀 19.4士1.5 19.7士1.5 21.0士1.7 20.7士2.3 1492士14刀 149.8土127 1483士124 1487士13.6 149.2士12.6 152.8士14.4 158.9士162 156.9士172 150.2土16.8 162.2士26.4 ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ? ? ? ??? ? ? ? ? ? 从表1可以看出，各组大鼠的平均进食量、初始体重、体重增 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 长均无显著性差异 ((P>0.05). 2.2实验油对大鼠脂质代谢的影响 2.2.1各组大鼠血清TG水平测定 (表2)a 表2各组大鼠血清TG水平测定 任1 s, mmol/L ) 组别 n Ow 070士0.16 071士0.19 0.73士0.08 0.67士0.13 0.70士0.15 0.78士0.1沙 1.18士0.29a 0.66士0.1分 0.70士0.196 0.77士0.136 6w 0.70士0.106 1.38士0.15' 0.73士0.096 0.69士0.116 0.68士0.026 ? ? ? ? ? ， ?? ? ? ? ? ? ? ， ?? ? ? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异，P<0.050 表2的结果表明，实验开始时各组大鼠血清TG水平无显著性 差异 ((P>0.05)。第3周末，C组、D组和E组大鼠血清TG水平 显著低于B组，与A组间无显著性差异，这一变化一直持续至第 6周末实验结束。 2.2.2各组大鼠血清TC水平测定 (表3)0 表3各组大鼠血清TC水平测定 (z1 s, mmo呱) 组别 n ow 3w 6w 1.76士021 1.75士0.18 1.73士0.19 1.78士0.24 1.78士0.26 1.45士0.19, 3.40士0.61' 2.79士0.326 2.42土0.32' 2.80士0.3护 1.51士0.15, 3.52士0.49' 2.58士0226 2.20士0.24` 2.76士0.446 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ??? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异， P<0.05. 表3的结果表明，实验开始时各组大鼠血清TC水平无显著性 差异 ((P>0.05 )。第3周末，各组之间出现了差异，c组和E组大 鼠血清TC水平显著低于B组，C. E两组间无显著性差异。而D 组大鼠TC水平显著低于c组和E组，这一变化一直持续至第6 周末实验结束。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 2.2.3各组大鼠血清HDL-C水平测定 (表4)e 表4各组大鼠血清HDL-C水平测定 (T1 S, mmol/L) 组别 6w 0.84士0.12' 0.5210}07' 0.79士0.17' 0.80土0.10' 0.54士0.1护 0.94士0.18' 0.51士0.11b 0.75土0.14' 0.79士0.25' 0.56士0.15' ? ? ? ? ? ? ? ??? ??? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异， P<0.05} 从表4可以看出，第3周末，C组、D组大鼠血清HDL-C水平 显著高于B组和E组，与A组间无显著性差异，C. D两组间也 无显著性差异。这一变化一直持续至第6周末实验结束。 2.2.4各组大鼠血清LDL-C水平变化 (表5)0 表5各组大鼠血清LDL-C水平变化 (-x1 s, mmol/L) 组别 6w 0.33 1 0.09' 2.30士045- 1.64士0.24b 1.25士029' 191土0346 0.32士0.130 2.34士0.54' 1.63士0356 1.10士0.43` 1.88土0.496 ? ?? ? ? ? ? ? ??? ???? ， ? ， ?? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异，P<0.05. 表5的结果表明，第3周末，C组和E组大鼠血清LDL-C水 平显著低于B组，C. E两组间无显著性差异。而D组大鼠血清 LDL-C水平显著低于C组和E组。这一变化一直持续至第6周末 实验结束。 2.2.5各组大鼠Al值的变化 (表6)0 表6的结果表明，第3周末，C组和D组大鼠Al值显著低于 B组和E组， C. D两组间无显著性差异。这一变化一直持续至 第6周末实验结束。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 表6各组大鼠血清AI值的变化 (X士S) 组别 3w 6w 0.83士0.21 d 5.82士1.32' 2.59士0.71' 1.95土0.59` 4.43士1326 0.70士0.23d 5.95士2.52' 2.69士04矛 2.21土0.80' 3.82士1276 ? ? ? ? ? ?? ? ??? ??? ?? ? ? ? ? ? ? 注;不同的上标表示有显著性差异，P<0.05. 2.2.6各组大鼠血清LCAT活性测定 (表7) 表7各组大鼠血清LCAT活性测定 组别 俪士s,umoVL/h ) LCAI，活性 82.20士32.2沙 112石1士28名46 166.18士48.94' 160.77土33.52' 12030士37.986 ?? ?? ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 注;不同的上标表示有显著性差异， P<0.05. 从表7的结果可以看出，B组、E组大鼠血清LCAT活性相对 于A组有增高趋势，但与A组间无显著性差异。C. D两组大鼠血 清LCAT活性显著高于A组、B组和E组，而C. D两组间无显 著性差异。 2.2.7各组大鼠肝脏脂质及肝/体比值测定 (表8)0 表8各组大鼠肝脏脂质及肝/体比值测定(X- 1g) 组别 n TG(nunol/l00gwetw) TC(nunoVl00gwetw) 1.25士0.26` 3.68士0.62' 2.98士0.49, 3.03士0.7护 2.94土0.41, 1.59士0.20' 7.57士0.56' 6.52士0.50, 6.6511.14' 7.24士0.82' 肝/体比值 2.90士0.18` 5.32士0.46' 4.75士0.1分 4.90士0.13, 4.88土0.33, ? ? ? ? ? ? ? ， ? ? ? ，?， ?? ? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异， P<0-05. 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 从表8的结果可以看出，C组、D组、E组大鼠肝脏TG水平 和肝/体比值显著低于 B组， C, D, E三组间无显著性差异。C 组和D组大鼠肝脏TC水平显著低于B组和E组，C组和D组间 无显著性差异。 2.3各组大鼠血清MDA, VE水平测定 (表9)0 表9各组大鼠血清MDA, VE水平测定 反士s,UMOVL ) 组别 MDA VE 5.08士0.51' 6.30土0.6夕 7.37士0.44' 5.03士0.59` 7.25士1.34' 13.82士3.15' 8.07士1.90` 4.75士1.62' 18.19士4.16' 5.70士1.79"a ?? ? ? ? ?? ? ? ? ? ? 注;不同的上标表示有显著性差异，P<0.05. 表9的结果表明，C组、E组大鼠血清MDA水平显著高于A 组、B组和D组，D组显著低于B组，与A组间无显著性差异。 D组大鼠血清VE水平显著高于其他四组，B, E, C三组间无显著 性差异。 2.4实验油对大鼠血小板功能的影响。 2.4.1各组大鼠血小板聚集率测定 (表10)0 表10各组大鼠血小板聚集率测定FX1S) 组别 血小板聚集率 (%) 53.57士3.23' 62.22士5.12' 52.54士5.6护 47.36土3.34` 59.41士2.76' ?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异，P<0.05. 从表 10可以看出，C组大鼠血小板聚集率显著低于B组和 E 组，与A组间无显著性差异，D组大鼠血小板聚集率显著低于C 组。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 2.4.2各组大鼠血浆TXB2. 6-k-PGF,。及T/P比值测定 (表11)。 表11各组大鼠血浆TXB2. 6-k-PGF]。及T/P比值测定 (`x1s) 组别 n TXB2(mnol几) 2.35士0.666 3.54士0.66' 2.16士0石36'0 1.49士0.25` 327士0.82' 6-k-PGF, o (nmoVL) T/P 1.22士0.16' 0.84士0.096 1.13士0.22' 1.27士0.20' 1.16士0.19' 1.93士0.27` 4.33士0.83' 1.91士0.540 1.20士0.27' 2.86士0.636 ? ? ? ? ?? ? ? ? ? 注:不同的上标表示有显著性差异， P<0.05. 表11的结果显示，C组和D组大鼠血浆TXB:水平显著低于 B组和E组。C. D组间无显著性差异。C组、D组和E组大鼠血 浆6-k-PGFI。水平显著高于B组，与A组间无显著性差异。C组大 鼠T/P比值显著低于B组和E组，显著高于D组，与A组间无显 著性差异。 3讨论 3.1桑蚕蛹油对高脂饲料大鼠脂质代谢的影响 本实验以红花油作为对照，观察富含a一亚麻酸的桑蚕蛹油对 大鼠脂质代谢的影响。红花油含丰富的亚油酸，其降脂作用己被诸 多的实验所证实，以其作为对照，旨在观察富含a一亚麻酸的桑蚕 蛹油是否与红花油具有同样的降脂作用，或者在降脂方面优于红花 油。 实验结果表明，与高脂对照组相比，桑蚕蛹油和红花油可不同 程度地降低高脂饲料大鼠血清TG. TC和LDL-C水平，但是对于 血清HDL-C水平的变化，二者出现了差异。第3周末，桑蚕蛹油 组大鼠血清 HDL-C水平显著高于红花油组。HDL-C是公认的抗 AS因子[141，在外周胆固醉向肝脏的逆向转运中具有重要作用。其 水平的升高有利于外周胆固醉的清除，防止胆固醉在动脉壁沉积， 从而阻碍 AS形成。HDL-C的功能与脂质代谢过程中的重要酶 LCAT的活性有关。LCAT由肝脏合成，分泌入血发挥功能，该酶 催化卵磷脂Sn-2位上的酷酸基转移至胆固醇的3位径基，形成溶 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 血卵磷脂和胆固醇酷，酷化的胆固醇转移给HDL并成为HDL的 核心，促进成熟HDL-C生成和胆固醇逆向转运。实验结果表明， 高脂对照组和红花油组大鼠随着摄入胆固醇的增多，为LCAT提供 了大量作用底物，酶活性相对于正常对照组大鼠有升高趋势，但不 能将胆固醇充分酷化，显示LCAT相对不足。而桑蚕蛹油组大鼠血 清 LCAT活性显著高于正常对照和高脂对照组，这可能与a一亚麻 酸具有升高LCAT活性的作用有关，郭英等p5]有过类似的报道。 临床实践表明，某些具有降脂作用的药物在降低血清胆固醇水 平的同时会导致肝脏胆固醇的聚集。本实验肝脏脂质测定结果表 明，桑蚕蛹油和红花油组大鼠肝脏TG水平显著低于高脂对照组， 红花油组的肝脏TC水平和高脂对照组之间无显著性差异，而桑蚕 蛹油组则显著降低。这一结果与Garg等[161的报道一致。Garg等曾 报道红花油可促进胆固醇从血浆向肝脏池转移，血清胆固醇水平的 降低往往伴随着肝脏胆固醇水平的增加，而亚麻籽油 (富含a一亚 麻酸)则不然。在本研究中，富含a一亚麻酸的桑蚕蛹油降低血清 胆固醇水平的同时，肝脏胆固醉水平也降低。因此，与红花油相比， 桑蚕蛹油具有更强的降低血清和组织胆固醇的作用，这在其长期调 节脂质代谢的作用中有重要意义。 PUFA调节脂质代谢的确切机制还不十分清楚。有研究[171发 现，a一亚麻酸可升高大鼠肝脏线粒体和微粒体与脂肪酸氧化途径 有关的酶活性，通过优先p氧化而加速脂肪酸分解，同时减少了用 于合成TG的底物，抑制了TG的合成。这可能是富含a一亚麻酸的 桑蚕蛹油降低大鼠血清和肝脏TG水平的机理之一。桑蚕蛹油和红 花油调节脂质代谢的差异主要表现在胆固醇水平的调节。有研究者 认为，PUFA可特异性调节与胆固醉代谢有关的基因表达。Ihara[18) 等用Northem杂交测定了341基一3一甲基戊二酞CoA(HMG-CoA)还 原酶mRNA水平。结果表明，与亚油酸相比，a一亚麻酸对胆固醇 合成的关键酶 HMG-CoA还原酶 mRNA水平具有抑制作用。 Horton['91等的研究认为，PUFA(包括。3系和n-6系)通过改变 LDL受体蛋白质和mRNA水平来增加肝脏受体介导的LDL摄取， 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 而降低血清LDL-C水平。此外，n-3系PUFAs可促进胆固醉转化 成胆酸或中性固醇分别从胆汁或粪便排出，或是刺激胆固醇及其代 谢物以皮脂形式分泌以降低体内总胆固醇水平1201。本研究发现， 桑蚕蛹油可显著降低高脂饲料大鼠血清TC. LDL-C水平，升高血 清HDL-C水平和LCAT活性，血清胆固醇水平降低的同时肝脏胆 固醇水平也降低。由本研究结果综合以上研究者的结论可以看出， 桑蚕蛹油降低胆固醇水平的机制可能是其中的。一亚麻酸抑制胆固 醇的合成和/或促进胆固醉的代谢和清除，使体内总胆固醇水平下 降的结果。 3.2桑蚕蛹油对高脂饲料大鼠血小板功能的影响 膳食中a一亚麻酸与亚油酸的比值是影响血小板功能的重要因 素。a一亚麻酸在体内的代谢过程与亚油酸存在着竞争性抑制作用， 虽然两者在体内有各自的代谢途径，但在相同步骤中所需的酶为同 一酶系[211(见附图)。 n-6系列 亚油酸(18:2n-6) ?????? ? ??? ?? ? ? ? ??? ???? ?? 杏 I I e6一去饱和酶 n-3系列 a一亚麻酸(18: Y一亚麻酸(18:3n-6) 1 TXA, PG12 杏 20:3n-6 3n-3) TXA3 PGE, PGEZ\ 杏 / PGI, 花生四烯酸(20 碳链延长酶 i △5一去饱和酶 :4n-6) I 碳链延长酶 i e4一去饱和酶 二十碳五烯酸((20:5n-3) LT4不2糕 4系白三烯 + 备 22:5 杏 入二， 5系白三烯 22:5n-6 j 二十二碳六烯酸(22:6n-3) 附图 。一亚麻酸与亚油酸的主要代谢途径 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 a一亚麻酸通过去饱和酶和碳链延长酶的作用生成二十碳五烯 酸 (EPA)和二十二碳六烯酸 (DHA)，而亚油酸则生成花生四烯 酸(AA).诸多的实验结果[221表明，增加a一亚麻酸的摄入量，会 增加血浆磷脂、甘油三酷和血小板磷脂中 EPA, DHA含量及 EPA/AA比值。AA是合成血栓素、前列腺素和白三烯等类二十烷 酸的重要物质。与亚油酸相比，a一亚麻酸及其代谢产物 EPA和 DHA与合成AA的限速酶4 6一去饱和酶有更高的亲和力，同时取代 了膜磷脂中AA，使生物膜中AA水平降低。EPA可与AA竞争环 氧化酶，使血栓素A2 (TXA2)和前列腺素12 (PGI2)生成减少。 TXA2主要由血小板产生，是重要的收缩血管和促血小板聚集因素， 而PGI:主要由血管内皮细胞合成，作用与TXA2相反。EPA使TXA2 生成显著减少，而对PGI:只是中度抑制。同时，EPA可生成三烯 前列腺素((PGI3)和血栓素凡(TXA3) o TXA3的促凝作用比TXA2 弱，而PGI3与PGI:抗凝作用相当，体内抗凝因素与促凝因素的平 衡发生变化，抑制了血小板聚集1231。本研究测定了胶原诱导的血 小板聚集率以及TXA2, PGI:的代谢产物TXB2, 6-k-PGF, o 0结果 表明，桑蚕蛹油组大鼠血小板聚集率显著低于红花油组和高脂对照 组，血浆TXB2水平降低，6-k-PGF,。水平升高，T/P比值下降。除 了a一亚麻酸及EPA, DHA对类二十烷酸生成的影响外，血小板膜 磷脂脂肪酸成分变化，改变了血小板膜的流动性和微薪度，也改变 了参与血小板聚集的膜定位蛋白如受体或酶的活性，从而影响血小 板功能。血清TG, TC, LDL-C水平的降低，缓解了因高脂血症对 血管内皮细胞的损伤，同时改善了血小板自身及其周围环境状况， 也是桑蚕蛹油抑制血小板聚集的机理之一。 血小板聚集率受多种因素的影响，不同的研究者得到的结论可 能不一样。Watanabe171研究发现，富含。一亚麻酸的膳食对低浓度 (7.5-10m叨J)胶原诱导的血小板聚集有抑制作用。另一些研究[241 表明，a一亚麻酸对ADP诱导的血小板聚集率没有影响，可见致聚 剂的选择很重要。Renaud等125〕的研究提示，血小板磷脂AA水平 与胶原诱导的血小板聚集率强相关。a一亚麻酸对血小板聚集率的 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 影响主要是通过影响AA水平和代谢来实现的，所以本实验以胶原 作为致聚剂。同时Lands等126峥旨出，血小板聚集率与TXA2的代谢 产物TXB:的量存在双曲线关系，只需少量的血栓素就可使血小板 聚集率达到最大，所以本实验以较小浓度的胶原(l0mg/L)作致 聚剂，观察到富含a一亚麻酸的桑蚕蛹油可显著抑制血小板聚集。 3.3桑蚕蛹油加入VE ，对体内脂质过氧化、血脂水平及血小板功能 的影响 桑蚕蛹油含丰富的 PUFA，易受自由基攻击而发生脂质过氧化 反应，加入抗氧化剂VE 可抑制这种反应。有人建议[271成年人，每 摄入lg PUFA约需摄入0.4mg a一生育酚当量。本实验在桑蚕蛹油 饲料中加入VE 后，大鼠血清VE 水平升高，MDA水平降低，有 效地抑制了脂质过氧化反应。VE 对血脂水平的影响报道不一[28.29] 本实验在桑蚕蛹油中加入VE 与不加VE 相比，血清TC. LDL-C 水平显著降低，与王福佛128]的结果一致。VE 对血小板功能的影响 已被诸多实验所证实[301。以往的研究表明，VE 可抑制磷脂酶凡 的活性，从而抑制了AA自血小板膜磷脂释出，减少了TXA2生成， 同时VE 作为抗氧化剂，解除了过氧化物对PG12合成酶的抑制作 用，PG12生成增加，因而抑制血小板聚集。本实验也观察到在桑 蚕蛹油中加入VE 与不加VE 相比，UP比值显著下降，胶原诱导 的血小板聚集率降低。由此可见，VE 除了抗氧化作用外，还具有 降胆固醇和抑制血小板聚集的功能。 3.4桑蚕蛹油在防治AS等心血管疾病中的意义 脂质代谢紊乱，血脂水平升高会导致脂质特别是LDL在受损的 动脉内皮细胞下沉积，引起巨噬细胞、单核细胞粘附和聚集，吞噬 脂质，形成泡沫细胞以及平滑肌细胞增生等一系列复杂的病理生理 过程，最终形成动脉粥样斑快，导致动脉机械性狭窄。同时内皮损 伤会导致TXA2,PG12等生理活性因子活性的变化以及血小板聚集， 并且激活凝血机制，形成血栓，加速动脉粥样斑快的发展，或脱落 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 形成栓塞。可见，高脂血症和血栓形成是AS形成和发展的重要因 素。本实验观察到桑蚕蛹油可显著降低高脂饲料大鼠血清TG, TC, LDL-C水平，显著升高抗AS因子HDL-C水平和血清LCAT活性， 同时抑制血小板聚集，这对于膳食防治AS和心肌梗塞、脑血管栓 塞等心血管疾病有重要意义。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 4.: 本文以高脂饲料大鼠作为研究对象，按血脂水平将大鼠随机 分为5组:正常对照组;高脂对照组;桑蚕蛹油组;桑蚕蛹油+VE 组;红花油组，分别喂饲各组饲料。实验期为6周。结论如下: (1)桑蚕蛹油可显著降低高脂饲料大鼠血清 TG. TC和LDL-C 水平，并且与红花油相比，升高血清HDL-C水平和LCAT活性， 降低肝脏胆固醇水平。这说明桑蚕蛹油在降脂方面，特别是对于降 低胆固醇水平比红花油更为有效。 (2)桑蚕蛹油可显著降低高脂饲料大鼠血小板聚集率，升高血浆 6-k-PGFI。水平，降低血浆TXB2水平及TIP比值。这提示桑蚕蛹油 可通过影响TXA2与PGI:的平衡而抑制血小板聚集。 (3)桑蚕蛹油中加入VE可显著升高大鼠血清VE水平，显著降 低血清MDA水平。同时，与不加VE相比，大鼠血清TC. LDL-C 水平显著降低，血小板聚集率、血浆UP比值也显著降低。这一结 果表明，桑蚕蛹油中加入VE，可有效抑制脂质过氧化反应，同时 具有降低胆固醇水平和抑制血小板聚集的作用。 华中科技大学同济医学院 硕士学位论文 参考文献 1. Grundy SM,Denke MA.Dietary influences on serum lipids and lipoproteins.J Lipid Res,1990,31:1149-1172. 2. de Lorgeril从et al.Miditerranean alpha-linolenic acid-rich diet in secondary prevention of coronary heart disease. Lancet, 1994, 343:1454-1459. 3徐章华，邵玉芬，朱国辉.苏子油对大鼠血脂及血液流变性的影响. 营养学报，1997,19(1)11-16. 4.刘冬，石山，杨玉梅.植物来源的。-3脂肪酸一。一亚麻酸.中草 药，1992,23(9):495-497- 5. Sakai K,et alLipid lowering effects of high linoleate and high u -linolenate diets in rats and mice.Consequence of long-term feedings.ChemPharm Bull, 1992,40(8):2129-2132. 6. Freese民et al.Comparion of the effects of two diets rich in monounsaturated fatty acids differing in their linoleic/ a -linolenic acid ratio on platelet aggregation. Thromb Haemost, 1994, 7(1):73-77. 7. 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