谢物和一氧化氮在羊水栓塞中的作用

A页士 论 文 花 生 四 烯 酸 代 谢 产 物 和 一 氮 化 氮 在 羊 水 检 塞 中 的 作 用 月匕要 英 文 缩 写 省卜称 英文缩写 AFE AA "rXA, PG 1, 英文全称 Amniotic Flu记 Embolism ??? ???? ? ? ??? ?? ? ? ? ? ? ? ??? CGM P ADP 6-K eto-PG F. Arachidionic Acid Thromboxane AZ Prostacyclin 1, Prostaglandins Leukotrienes Leukotriene C, Radioimm unoassay Enzyme Immunoassay Nitric xide Nitric xide Synthase ConstitutiveNitric Xide Synthase Inducible Nitric Xide Synthase Platelet Activating Factor Optical Density Endothelin Disseminate Intravascular Coagulation Cyclic Guanosine Monophosphate Adenosine Diphosphate 6-Keto-Prostaglandin F? 汉语全称 羊水栓塞 花生四烯酸 血栓烷 A, 前歹1i环索 前列腺素 白三烯 白二烯 C, 放射免疫测定 酶联免疫测定 一氧化氮 一氧化氮合酶 结构型一氧化氮合酶 诱导型一氧化氮合酶 血小板激活因了 光密度 内皮素 弥散性血管内凝血 环一磷酸腺fi' 二磷酸腺普 6-酮前列腺素 十二二二川二二二二:::二二二:1’二二二二二二二.二二二二洲+ + 口1侣，日目:留:韶‘吕m韶翻n二璐1四川侣侣侣吕幼‘翻..口助留1口.“吕韶拐留加‘n口，:::亡，:+ 簇员士 论 文 花 生 四烯 欧代 谢 产 物和 一氧 化 氮 在 羊 刁、桂，塞 中的 作 用 中 文 摘 要 「目的」通过离体全血与自体羊水培养和羊水栓塞模型动物实验，量化 分析了血中前列环素(PGI, )、血栓素(TXAZ )、白三烯C, (LTC,)和NO的浓 度，探讨这类生物活性物质在羊水栓塞中发挥的作用。 「方法」产妇羊水与自体全血进行培养以及用新西兰孕兔进行羊水栓塞 模型实验。分别用放射免疫分析法兔实验性羊水栓塞前后不同时间血中和 培养前后血中血栓素B,(TXB,)和6-酮前列腺素F,a(6-Keto-PGF,,)的含量;用酶 联免疫法检测白三烯C, (LTC, );用福还原柱层析和比色法检测血硝酸盐和亚 硝酸盐的浓度(NO,-NO,-). 〔结果〕1.加入羊水培养后血中的TXBZ和LTC,上升，分别由63.5 1 g/L和 40.1 1 39.2ng/L增 加 到 189.1士 ? ? 、?? 206. lng/L，尤其以加入胎粪污染的羊水更显著， 45. 3 ng/L增加到培养后的289.21113.2 增加到387. 2士214.6 ng/L T/K值由2.1士1 ng/L, 102. Ong/L和 293.5士 TXBZ由培养前的62.9 1 LTC,由42.2士39. 4 ng/L 2上升到7.412.5 (p<0.01)0 但血中6-Keto-PGF,,和NO, /NO,一在培养前后变化不明显，且它们在清亮羊 水组与胎粪污染羊水组之间亦无差异 (p>0.05 L 2.注入不同性质的羊水刺激机体释放TXAZ, PG12, LTC;和NO的程 度不同，但以胎盘组织提取液组和人羊水组血中浓度升高明显·胎盘组织 提取液组注入前血中的浓度分别为TXBZ=273.5士173.4ng/L, 6-Keto- PGF,}=49.7士17. ng/L, LTC,=31. 9士17.3ng/L, NO,-/NO.、一 26.9士10.3 umol/L，注入胎盘组织液致兔迅速死亡，死亡时上述介质在血中的浓度分 别 是 TXBZ= 976. 1 1 563. 9ng/L, 6-Keto-PGF,,=103. 6 } 91. 4ng/L LTC,=252. 8士133.7ng/L, NO‘/N0,-=137. 8士57.9umo1/L C p<0.01 )。人羊 水组注入前兔血中TXB,浓度是295.71201.8 ng几，注入后兔存活者45分 钟血中浓度上升到最高为397.61143.9 ng/L，而死亡兔死亡时血中浓度 十:::二:~二二二二二二二二韶二:二二二二二二二二+ 2 +:二二二:~ 。~ 二二一 二二二::+ 名员士 论 文 哥乞生 四 烯 酸 代 谢 产 物 和 一氧 化 氮 在羊 水 检 密 中的作 用 为852.6士365.1ng/L(PO. 05) ,胎粪液组呈迟发性 上升:原羊水组血TX81在注入后5分钟无变化，45分钟后血中浓度上升 (P0.05). The levels of TXAZ、LTC,、PG12 and N02 /No,_ in plasma with experimental amniotic fluid embolism in rabbits were elevated obviously in cell-free filtrate of placental extract, the concentrations of TXB2 from 273.5士 173.4ng/L to 976.1士563.9ng/L,LTC, from 31.9土17.3ng/L to 252.8士 133.7ng/L, 6-Keto-PGF,, from 47.9土17.5 to 103.6士91.4ng/L,NOZ /NO,- from 26.9士10.3 to 137.8士57.9umol/L(P<0.01).All rabbits in cell-free filtrate of placental died in 5 min after injected the fluid. The levels of the mediators in plasma increased in human amniotic fluid group. the levels, were elevated to peak after injected human fluid 45 min, but fallen down at 120 min. Three rabbits died in 15 min in human amniotic fluid group. The concentrations of the mediators in plasma in Rabbit raw amniotic fluid and meconium-stained group were varied at different time-point. All animals what were injected with rabbit self-raw amniotic and meconium-stained were alive. Conclusions:Amniotic fluid might stimulate the release of TXAZ and LTC, from oneself blood and affect the balance of TXAZ and PGIZ .Different character in amniotic fluid resulted biosynthesis and release of TXAZ、 LTC4、PGI2 and NO2 /NO:一with diversity, it were higher in human amniotic ? ? ? ? ?? ??? ??? ? ? fluid and cell-filtrate of placental extract than rabbit raw amniotic fluid meconium-stained fluid. It was found that the level of nitrite/nitrate positively correlated with the levels of TXAZ、 LTC, 、 PG12 and the of rabbits died. These results suggest that arachidonic acid metabolites NO may play an important role as mediator inamniotic fluid embolism and 十拼“，二:二二拙沼粼，二二“。出二二二二二二二...}?.r+ 5 十 丈。:冷忍四二二盟瑞韶韶知欲比“吊甘砚t四.切月贻肠I---璐吟民口口留翻目川市山价:幼廿 + 石盯生，论 文 花生 四烯 肤 代谢 产 物和 一 从化 氮 在 羊 水 检 塞 中的 作 用 individual host determining the reaction to amniotic fluid component also plays a major role in severity of clinical symptons. Key Word: Embolism, Amniotic Fluid Arachidionic Acid Leukotriene C, Thromboxane A, Nitrogen Oxide Prostacyclin 1, 十 ::rt:二:::二二二二二二二二二二二二二二;二二二二二+ 6 十 二“:~:二二。。:~ 二二二二二‘ 十 不觅d:论 李( 花生 四烯 酸 1弋谢 j左物和 一氛 化 氮49z-单 水 检 塞 中的 1乍用 漪r 言 羊水栓塞(AFE)是产科中一种极其严重的并发症，是导致孕产妇死亡的 主要原因之一!’〕。羊水栓塞的病情变化扑朔迷离，死亡率极高，人们一直试 图明确其病因、发病机理，以期能对其进行预防和治疗，但经过几十年的临 床观察和动物实验，发现许多观察和实验结果存在互相矛盾14. 21. 361，以致 多年来人们对羊水栓塞的认识进步不大。因此进一步明确羊水栓塞的病 因、发病机理，为预防和治疗提供理论依据非常重要。 一 羊水栓塞的病理生理变化 迄今，大约有 300多例临床羊水栓塞的文献

报告

软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载

，其典型的临床特征 是在分娩时突然出现呼吸困难，循环血压下降，紧接着发生心血管功能衰竭， 超过半数的病人在发病后 1小时内死亡，或出现继发性凝血功能障碍。由 于羊水栓塞发病急骤，病情进展迅速，所以，详细、准确和完整的病理生理 变化数据在临床上难以收集。Clark等通过多中心合作，收集了从 1988年 到 1995年46例羊水栓塞的病人，对收集到的各项病理生理指标进行综合 分析，发现羊水栓塞的病理生理变化主要在血液动力学改变和凝血功能异 常两方面:出现体循环血压下降;左心功能衰竭、心输出量减少;肺水肿或 成人呼吸窘迫综合征;凝血功能障碍;少数病人记录到了暂时性肺动脉高压 U) (一)，血液动力学变化 许多动物羊水栓塞模型出现明显的肺动脉高压，肺血管痉挛和肺血管 阻力增加〔川。但临床观察到的羊水栓塞病人血液动力学改变主要是左心 功能衰竭，心输出量下降，体循环血压降低，中心静脉压有不同程度的升高， 肺动脉压仅有轻到中度升高，且肺动脉压的升高与肺毛细血管楔压的增加 成比例，这就不能用传统的肺血管痉挛和机械性阻塞机制来解释肺动脉高 压的成因，这些血液动力变化似乎起源于左心功能衰竭。羊水栓塞左心功 能衰竭的原因不十分清楚，推测可能与低氧对心肌损害、冠脉血流下降至 + :二 二“二二二二。:二二二二，二二二二二二二二.二十 7 十二.二二二.。二二二二二二。二二二:~ 二二。二 + 不口t 全仑岁忆 刁〔生 四 赚欧 代 匆绪产 物和 一 氧化 氮在 羊 水 检 塞 中的 作 用 心肌缺血、羊水中的生物活性物质对心肌的直接影响等因素有关。但 Clark认为动物实验和人临床血液动力变化可能存在一致性，推测人发生羊 水栓塞时在血液动力学方面存在双相反应，当羊水刚进入肺血管时，引起肺 血管痉挛产生肺动脉高压，肺换气功能受影响，出现低血氧，使机体遭受严 重的缺氧损害，这也可以解释为何羊水栓塞心肺复苏成功后大约50%的病 人出现中枢神经系统损害甚至脑死亡Iii，由于肺动脉高压出现的时间短暂， 动物实验大约在羊水栓塞后10到30分钟发生，而有记录的人羊水栓塞血液 动力变化最早是在症状发生70分钟以后，因此，难以捕捉到羊水栓塞一开始 时的血液动力变化，记录一F来的可能是急性阶段过去后继发于左心功能衰 竭后的血液动力变化。 (二).凝血功能异常 羊水栓塞的死亡病人中有40%死于凝血功能障碍所致的出血，出血机 制不十分清楚1’‘1。在试管内研究羊水具有缩短全凝血块时间的作用，有类 似凝血酶活性的功用，可诱发血小板聚集以及血小板因子m的释放以及激 活补体，此外羊水中含有能直接激活凝血因子X的因子。Charles J等报 告羊水的促凝血活性随着妊娠月龄的增加而增加，而促凝血活性可能与羊 水中含有组织因子有关，组织因子具有发动凝血的作用，它同样随着妊娠月 龄而增加[44,45]。羊水中组织因子的来源仍有争议，有文献报告培养后的羊 膜细胞有合成组织因子的作用，胎儿上皮细胞、呼吸道、胃肠道粘膜细胞 都含有组织因子，可成为组织因子的来源128,1。但是Phillip、强调在普通羊 水中的促凝物质不足以引起有明显临床意义的凝血，只是使孕产妇血液处 于高凝状态，在分娩过程中容易止血[293。只有遇到某些病理因子的刺激， 大量含有组织凝血活酶的因子进入血中，激活外源性凝血系统，诱发DIC，所 以羊水栓塞伴有胎盘早剥者DIC的发生率有50%，伴胎儿宫内死亡者DIC的 发生率约40%1'30 二， 水栓塞发病机理研究回顾 + 二:::。二二治二二二二二二二 二二二二二二二:二+ + 二二二二二二二:二留二二二二二二~ 二二:二二二二+ 不员士 」仑文 花生 四幼 故 代翻少产 物和 一 札化 氮 在 苹 刁‘检 班 中的 作用 自从1926年Meyer作了第一例关于羊水栓塞的病例报告后，直到1941年 Sleiner等对八例分娩时突然死亡的病人进行尸解，发现其中七例病人有肺 水肿，且侮一例病人的肺血管里发现有来自胎儿的鳞状上皮细胞和粘液蛋 白，以后其他的学者也有类似的发现，人们对羊水栓塞的认识才逐渐引起重 视。 有许多学者在不同种类的动物进行过羊水栓塞的实验，实验结果不完 全一致。Halmagyi等从动物实验中发现，将羊水从静脉注入可导致肺动脉 压升一高，肺血管阻力增加，且证实有胎粪污染和未滤过的羊水比清亮的、滤 过的羊水所引起的血液动力学变化更为严重1,15.361)，因此，当时认为羊水栓塞 是由于羊水中的有形物质进入肺循环引起机械性阻塞和反射性血管痉挛导 致肺动脉高压，羊水栓塞症状的严重程度决定于进入母体羊水中有形成分 数量的多少。 与此同时，另外一些动物实验发现注入动物自体羊水不会引起动物出现 有关羊水栓塞的症状，用抗过敏药非那根治疗能缓解兔羊水栓塞时的呼吸 困难，使休克好转以及其它症状得以复原，而用阿托品和婴粟碱治疗只能缓 解其痉挛不能使休克改善也不能防止死亡。由此，人们认识到肺血管机械 性阻塞不是羊水栓塞的唯一因素。抗组胺药非那根对兔羊水栓塞的治疗作 用，提示羊水栓塞的发生与过敏反应有密切的关系[171 近十年来，Clark在羊水栓塞的研究中提出了许多新的观念和见解。他 认为羊水栓塞时病人的血液动力学变化主要

表

关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf

现是左心功能不全:肺动脉 压仅轻到中度升高，而肺毛细血管楔压的升高显著，中心静脉压上升，肺 血管的阻力在正常范围1141。羊水栓塞的典型临床症状是呼吸困难、急性休 克、大出血，特别是心血管症状方面似乎与过敏反应非常相似，因此，提出其 发生机理可能与个过敏反应发生机制有联系，一些细胞介质象白三烯、组 胺、缓激肤、前列腺素等可能参与了发病队，盆。 三. 花生四烯酸代谢物在羊水栓塞中的作用研究进展 小 ， 伞 ::: 不页士 论 文 花 生 四烯 砍 代 谢 产物 和 一 氧化 氮在 羊水 检密 中的 作用 从 70年代开始就有关于不饱和脂肪酸主要是花生四烯酸代谢产物 (又称脂类介质)与羊水栓塞发生机理有关的报道，亦有不少实验支持这 些观点。如有学者将分娩时产妇的羊水注入猫体内引起猫出现体循环血压 下降，中心静脉压升高，与单纯将 PGF:进入猫体内出现的症状一致tin 在兔羊水栓塞时发现 LTD,, LTC,增高，用脂氧酶抑制剂AA861可减轻兔 羊水栓塞的症状，降低死亡率Isl.国内有

研究报告

水源地可行性研究报告美术课题研究中期报告师生关系的个案研究养羊可行性研究报告可行性研究报告诊所

川羊水与血细胞培养后制 成的羊水栓塞样血浆灌注兔离体灌流肺，发现未与血细胞培养的羊水对肺 的损伤程度明显轻于与血细胞培养后的羊水对)l4的损伤，在培养时加入环 氧酶抑制剂布洛酚抑制前列腺素的生成可减轻肺的损伤161，这些研究证实了 脂类介质可导致羊水栓塞时机体发生严重的病理生理改变。 尽管花生四烯酸代谢产物与羊水栓塞的关系己引起重视，但迄今为 止有关这方面的系统实验研究仍不多。山于羊水栓塞发病急骤，死亡率 高，给临床观察带来困难，所以主要通过动物实验进行研究，但目前多数 实验是采用异体或异种羊水在麻醉状态下进行，这种情况不能排除异体反 应以及麻醉对动物的影响卜“!。 四一氧化氮在羊水栓塞中的作用探讨 近十多年来，人们对小分子物质 NO 的病理生理作用非常关注，认为 失血性休克、中毒性休克、创伤性休克时NO的大量释放，导致血管过度 扩张，血压进一步下降，加重循环衰竭。而 AFE时的血液动力学变化是 否与 NO有关，目前仍未见这方面的报道。我们对 AFE与 NO的关系进 行了初次探索。 木实验从两方面对羊水栓塞后脂类介质和一氧化氮的变化进行研 究。一是用孕产妇的羊水与自体血液培养，观察离体状况下羊水刺激自体 血细胞产生前列腺素、白三烯、血栓素和一氧化氮的情况。二是动物羊水 栓塞实验，在清醒无麻醉状况下进行兔羊水栓塞实验，研究不同性质的羊 水注入兔耳静脉后5分钟、45分钟、120分钟前列腺素、白三烯等脂类介 + 二二洲加二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二十 功 十二二“。二::t二二二二。二二二二二。，‘，二二二二。。+ 花生 四蜂 胶 代 住r产 物和 一 氧化 氮在 年 水翔2塞 中 的 作用 质和一氧化氮的变化，旨在进一步明确羊水栓塞时脂类介质和一氧化氮的 动态变化以及在羊水栓塞中作用，为阐明羊水栓塞的发病机制，预防和治疗 羊水栓塞提供理论依据。 +二二:二‘。二二二二二二二。二二二:l4二二二二二二二十 日 十二二:;二:二二二:二::二二二:二二。二二:二二二:二:二“:十 石月士 论 文 花 生 四玲 故 代 谢 产 物月口一承化 氮在 竿 水 检 塞 中的 作 用 利，料 与 方 法 一. 实验分组: (一).人羊水与自体血培养组:分为胎粪污染组和清亮原羊水组。 (二).兔羊水栓塞模型组:根据引起兔羊水栓塞模型注入的液体性 质不同，将实验兔随机分为5组:兔原羊水组8只，胎粪液组8只，胎盘 组织提取液组6只，人羊水组8只，生理盐水组5只。 二. 研究指标: 花生四烯酸代谢产物PGI,, TXA:和LTC;以及NO. 三. 实验动物: 雌性新西兰大白兔 (购于穗北动物养殖场)35只，重3. 1-4.4kg>孕 龄25-31天。 四， 标本收集: 选择1997年 12月一1998年2月在南方医院和从化市人民医院妇产科 进行剖宫产的产妇 15例，年龄 24-36岁，孕 36--43周，未破膜。剖宫产 指征分别是:6例瘫痕子宫，5例胎位不正，3例双胎妊娠，1例高龄初 产，其中胎粪污染 6例，清亮羊水 9例。每例产妇在麻醉前抽取静脉血 12m1，加肝素抗凝。在剖宫产时取羊水，当切开宫壁暴露胎膜时，需拭净 血液，确保所取羊水无血液污染。 五.主要试剂和设备: (一)主要设备 低温离心机 (ZK-510 made in Germany) CO,恒温箱 (上海跃 进医疗器械厂) Y一计数仪 (南方医院放免中心提供) 405nm酶标仪 (made in Austria) 真空泵 (上海产) 低温冰箱 (南方医院外科 实验中心提供) 分光光度计 (made in German) +二二二:二二二二二二二二二二二:二~:二二~二二二二十 12 十二二:二二二:二二二二二二二二:::二二二二二:::二:二二+ 不斑习匕论 二k 花生 四烯 酸 代 谢 产 物 和 一 氧化 氮在 单 水 栓 塞 中 的作 用 铜福还原柱 (自制):市场购得金属锚 〔北京 57601厂)颗粒锯成粉 末，蒸馏水洗，滤纸吸干。隔粉末++1.5倍体积 5%硫酸铜 (上海化学试剂 厂)溶液，轻轻搅动5分钟使溶液颜色变浅后弃液体，用蒸馏水冲洗至无 明显黑色。加等体积 OA M欲酸溶液，轻轻摇动 5分钟，弃掉液体，用蒸 馏水冲洗。将福颗粒装入约 120 X 8mm的层析村中，颗粒之间相互压紧， 不能有气泡，用0.05% NH,CL溶液平衡后即可使)1J o (二) 主要试剂及其配制: "'I-Txsz和 ”'I-6-Keto-PGF,。放免试剂盒购自苏州医学院血栓室， HPLC级己烷 (Labscan Co. Ltd), C-18顶处理柱 (购于 Waters公司)， LTC, EIA试剂盒 (购于Cayman化学试剂公司)，无水乙醇 (汕头市光华 化学厂)，磷酸氢二钠、磷酸二氢钠 (广州化学试剂厂〕，30%ZnSO,(广 州化学试剂厂)。 0.05%NH,CL(PH=9.0): NH4CLO.05g+四硼酸钠 (All头市光华化学 厂)O.Ig，用蒸馏水配成 100m1溶液，再用硼酸钠或 0.1 MOI盐酸调定使 其 PH=9.00 5% NH,CL(PH=5.0): NH,CL5.Og+四硼酸钠 2.5g，加蒸馏水至 1 OOMI o Griess试剂:2%的磺胺 (广州化学试剂厂)和 0.2%蔡乙二胺水溶液 (中国化学试剂进出口公司)，等体积混合后使用。 硝酸钠 (广州化学试剂厂)

标准

excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载

品:lml硝酸钠+9 ml蒸馏水稀释， 则为I OOumol，再倍比稀释成50. 25, 12.5 6.25 3.125 1.5625umolo 亚硝酸钠标准品:同上法配制。 六.实验方法 (一)人羊水与自体血培养 在无菌条件下，取羊水 I ml加入自体肝素抗凝血 10m1,置于 37 0C CO,培养箱培养30分钟，然后4 0C 3000rpm离心30分钟，取上清液，于 +川二二二二二:二二“二洲二二二二:::二二二二二‘二二二二二+ 13 十二二二。二二二二二二二二俪二二二:ln二，。二二二1.11+ 司致气七论 文 花 月二四烯 欧代 谢 产 物和 一氛 化 氮在 羊 水 检 塞 中的 作 用 一70℃冷冻保存待测。 (二)兔羊水检塞模型的制备 I.兔羊水收集方法:取妊娠25-31天兔，3%戊巴比妥(国产)1 ml/kg耳静 脉注射麻醉，仰卧位固定，下腹正中切开，行子宫次全切除术后关腹。兔 注射庆大霉素8万单位，继续喂养。将切下的子宫用温盐水纱布覆盖并拭 净子宫表面的血液，切开宫壁，暴露胎膜，穿刺抽取羊水，注意羊水不能 被血液污染川。 2.胎粪液的制备:切开胎兔腹壁，取下胎兔大肠，轻轻挤压出胎粪，共收 集胎粪1000mg，加入生理盐水50ml，制成2%浓度的胎粪液[”〕。 3.胎盘组织提取液的制备:行子宫次全切除术后，取出胎儿胎盘胎膜单 位，清除胎盘上的蜕膜、胎膜，取5克胎盘组织，生理盐水反复冲洗后， 干纱布吸干水份，用组织研磨器研磨成组织匀浆，加入 loml生理盆水， 4000rpm离心 30分钟，取上清液即制备好的无细胞胎盘组织提取液[[4] o 经显微镜检查证实无细胞。 4.兔羊水栓塞模型制备:待兔恢复到活动自如，将制备好的注射液在兔清 醒时以2. 5m1/kg从兔耳静脉注入，分别在注入前、注入后 5分钟、45分 钟、120分钟从兔耳动脉抽血2m1加肝素抗凝11. 181。死亡的兔立即心脏取 血。所取血液标本3000rpm离心30分钟，取上清液-70℃冷藏待检。 (三 )检测方法 1.放射免疫测定:由于TXA:和PGI:代谢迅速不易检测，故分别测定它 们比较稳定的代谢产物TXBZ和 6-Keto-PGF,a。每例标本均行复管检测， T一计数由南方医院放射免疫中心测定。TXB:药盒质控指标为: Total=6540 Nsb/Total=3.00%, Bo/Total=33.8%，标准品的直线回归相关系 数是0.97. 6-Keto-PGF,:药盒质控指标为:Total=9574, Nsb/Total=2.60%, Bo/Total=31.5%,标准品的直线回归相关系数是0.99。具体操作步骤严格按 说明书执行。 十 :::::::二二二:二二二二二:::韶:::二二二二:二二二二二::4二二+ 14 十二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二:::二二韶::十 刁而士 1仑文 花生 四场 胶代 谢产 物 和 一 从化 氮 在 苹习‘枪 塞 中 的作 用 2.酶联免疫测定:LTC;检测前首先进行样木纯化，去除有机杂质，减少假 阳性率{，，]。纯化lilt先取样本2u1 bll入乙醇2m1混匀，1500rpm离心10分 钟取上清液加0.1 M PI14的磷酸缓冲液8m1;将C-18预处理柱用乙醇激活， 样本过柱，用 IIPLC级己烷和超纯水洗柱去杂质;最后用 90%的乙醇5ml 洗脱 LTC,,，真空蒸发乙醇加 200ul EIA缓冲液。样本纯化后严格按照说 明枯进行检测，用酶标仪在波长 405nm测定光密度 (OD)，所有 OD值 均减去空白值再计算，以标准品浓度和相应OD值在半对数坐标纸上绘出 标准曲线，标准曲线的相关系数T=-0.99, P=0.000,用 SPSS统计软件包 处理标准品数据得出计算样本的线性回归方程为x=ee 1,2-00150D+12.00 3.锅还原柱层析和比色法""I: NO的半衰期极短，在血中与氧或血管壁 上超痒基起反应，生成亚硝酸盐和硝酸th等稳定产物，因此，通过测定血 中NO-:和NO)可反应血NO水平。我们参照Ilegesh介绍的方法，并加 以改进测定血中的NO-，和NO-,o I)去血浆标本中的蛋白:0.3m1血浆样品+0.015ml30%ZNSO,，充分振 荡混匀，5000rpm离心5-10分钟:取上清液0.25m1+等体积5%NH,CL, 充分混合后，3000rpm离心5分钟;IN F 7青液0.5m1. 2)过柱 (使硝酸盐还原成亚硝酸盐):将 0.5m]上清液样品过柱，用 0.05%NH声1洗脱，弃最初流出的1.5 ml液体，收集随后的2.5 ml洗脱液 比色。 3) l匕色:2.5m1洗脱液+1 mlGriess试剂，室温放置 10分钟，用分光光 度计在540nm波长处比色，洗脱液+Griess试剂为空白对照。 4)将NaNO,配制成1-100umol的标准u溶液分别取0.5m1按以」:步骤 操作绘制标准曲线。 5) NO,-/NO;浓度的计算:以标准品浓度和相应的OD值，绘出标准曲 线，得出线形回归方程:Y=0.3530D-7.97( x为0.99),根据方程计算样品中 NO,"/NO,’的含量。 十二二二二二::lJ二二二二二二二二二“.二二二二:二二二‘二二+ 15 十韶二::l。二二二二二二二二二二二二二二二二。二二二翻+ 花生四赚翻之代侧tt尸七中勿月劝一氧化氮-V-*-水检农中的IV用 所有实验数据用SPSS 7.5统计包进行统计，数据以均数士标准差 (X 士s)表示，人羊水与血培养组培养前后用配对t检验，组间用t检验。兔 羊水栓塞模型组组内数据用方差分析，组间比较用4检验法(多个样本均 数间的两两比较)。 ·奋 :韶掇拙批沼拙川;::拙川川击拼淤拙川拼 'z 16 ::: 二二二二 二 二二二二二 :S. 花 生 四片 欧 代 谢 产 物 和 一氧化 氮在 羊水 检 赛 中的 作 用 讨 论 一 环氧化酶代谢产物与羊水栓塞 (一)环氧化酶代谢产物及其作用 花生四烯酸 (AA)是从细胞膜磷脂中释放出来，正常细胞内游离 AA 的含量极低，大量的花生四烯酸以酷化形式存在于各种磷脂中。AA 由磷脂释放的过程需由酞基水解酶催化，当细胞缺血、机械刺激引起细胞 损伤能激活这种酶，使 AA释放出来。AA在各种酶的作用下生成具有生 物活性的物质。主要的代谢途径包括环氧化酶代谢途径、脂氧化酶代谢途 径和细胞色素 P450依赖的单氧化酶代谢途径。AA经环氧化酶途径首先 生成内过氧化物 (PGGZ), PGG:为极不稳定的中间产物，在体内经酶或 非酶作用转化为各种前列腺素。在以血栓素 A:合成酶占优势的血小板中 生成含有氧丙环的化合物，称为血栓素 A2 (TXAZ )，而经血管内膜微粒 体中的前列腺素合成酶作用生成前列环素 (PGIZ) o PGI2和TXA2(即T/K值)对机体许多系统及器官具有相反的作用， 前者促进血小板和白细胞聚集，强烈收缩血管和气管平滑肌:后者却能抑 制血小板聚集并舒张血管平滑肌。妊娠后这两者的含量都有增加，一方面 使母胎外周阻力下降，有利于维持母胎之间正常的循环;另一方面可使妊 娠后期血小板聚集增加，有利于分娩时的止血，两者之间维持一种新的平 衡，适应妊娠分娩这一生理过程1261。当机体受各种生理、病理的刺激时， 白细胞、血小板、血管内皮细胞和神经细胞处于应激反应可刺激膜磷脂代 谢加速，产生大量的脂类代谢产物，打破正常的平衡状态，从而造成机体 组织器官功能和形态的严重异常。因此，研究这些物质本身，它们的衍生 物，拮抗剂以及抑制合成途径中各种酶的活性物质可为疾病的预防治疗提 供新途径。 (二)环氧化酶代谢产物与羊水栓塞 有文献报道用人羊水与库存血进行培养发现其培养后的TXB:和 6- 十二:二二~ 二二二二二:~二二:二二二二二:二+ z5 +二二二:。二 二二二二二一 二。二 .二二二 十 E阂创七论 夕二 花 生 四嫌 胶 代谢 产物 和 一氧 化 氮 在羊 水检 血 中的作 用 Keto-PGF,。浓度明显增加{‘’〕;用前列腺素抑制齐g布洛酚能减轻羊水栓塞样 血浆对兔离体灌流肺的损伤['I. Kitzmille:用分娩时的羊水注入猫体内引 起 AFE症状而用妊娠时的羊水注入却不会出现仟何反应，他认为由于分 娩时羊水中含有高浓度的PGF,。进入母循环后引发一系列病理生理变化出 现 AFE[0'1。但以上实验都是用异体羊水，不能排除存在异休反应。木实 验用人羊水与自体血进行培养，观察离体状况下羊水刺激血液产生TXA, 和 PGI,的情况。发现不管是胎粪污染的羊水或者是清亮的羊水与血培养 后都可引起血中 TXA,的含量明显上升，但胎粪污染的羊水升高更加显 著;而PGI,的代谢产物6-Keto-PGF,。仅有轻微上升，导致羊水与血培养 后TXA,/PGI,即T/K值升高。 本实验为了排除麻醉对兔的影响，在兔清醒状态下注射不同性质的羊 水，比较注入不同性质的羊水后血中TXA,, PGI,浓度的变化。通过木实验 发现注入不同性质的羊水都可引起兔血中’PXf3，和 6-Keto-PGF】升高，但 以胎盘组织提取液组和人羊水死亡组升高明显，而且死亡兔血浆丁/K值上 升显著高于存活兔。当机体受到各种有害刺激时TXA:的释放增加，平衡 被破坏，T/K值_Lr升，与肺动脉高压、内脏缺血、弥散行血管内凝血有 关;而 PGI:的持速增高可能与休克时心血管失代偿有关120-231。说明羊水 进入血循环可引起环氧化酶激活，产生花生四烯酸类代谢产物 TXA,和 PGI,，而这类生物活性物质可能在羊水栓塞的发病机理中起了重要作用。 二。脂氧化酶代谢产物与羊水栓塞 〔一)脂氧化酶代谢产物及其作用 花生四烯酸和有关的多价不饱和脂肪酸也可在脂氧酶(此酶仅见于肺组 织、血小板和白细胞内)的催化下形成白三烯类化合物。脂氧化酶催化一个 氧分子加入花生四烯酸中，分别有5一脂氧化酶、12-脂氧化酶、15一脂氧化 酶，其中在多种细胞中经5-脂氧化酶作用生成白三烯类化合物包括LTC,, D,, B?等。日.后一条合成途径不被环氧酶抑制剂如消炎痛、布洛芬所阴断， 十二二二二二::n二二二二二二二二二二二二二，二二二二+ 26 +二二朋二二:二二二二二二二，二二二二二。二二二二湘+ 花生 四烯胶代谢产物习.一取化氮在羊m巾食容中的作用 反而，在环氧酶抑制剂的作用下，脂氧酶催化的白三烯合成增强。白三烯的特 点是能使支气管平滑肌强烈而持久地收缩，此外，还能增高毛细血管的通透性 和促进粘膜分泌。当机体受到各种刺激如抗原抗体反应会引起肥大细胞、 嗜碱性粒细胞脱颗粒，可合成和释放多种生物活性物质包括组胺、白三 烯、54'1色氨等，它们是过敏反应的重要介质，可导致过敏性哮喘或过敏性休 克1111。 (二)脂氧化酶代谢产物与羊水栓塞 妊娠后胎膜和蜕膜富含磷脂，蜕膜有丰富的磷脂酶 A,，可分解膜磷脂 形成花生四烯酸，再在脂氧酶作用下生成白三烯类化合物。现认为白三烯 类物质特别LTC;和LTD;是引起过敏性休克、中毒性休克血液动力学变化最 重要的原因，它所致的病理生理变化与羊水栓塞有惊人的相似[za-zsl Azegami用人羊水诱发兔羊水栓塞后测得肺白三烯 C和 D含量增加，且用 脂氧酶抑制剂AA861可减轻 AFE的症状和降低死亡率[1151。有文献报道分娩 时产妇羊水中花生四烯酸代谢产物的浓度是妊娠时的十到三十倍[27, 本实验发现离体状况下羊水能刺激血液产生LTC,，不管是胎粪污染的 羊水或者是清亮的羊水与血培养后都可引起血中LTC,的含量明显上升，但 胎粪污染的羊水升高更加显著;同时动物实验发现注入不同性质的羊水都 可引起兔血中LTC;升高，但以胎盘组织提取液组和人羊水死亡组升高明 显。这个结果与Azegami的实验相一致，这也可解释Clark等报道的数十例 羊水栓塞的病人其临床症状、血液动力学变化、实验室检测与过敏性或中 毒性休克有惊人的相似，说明脂氧化酶的代谢产物参与了AFE的病理生理 和血液动力学变化。 三. 一氧化氮与羊水栓塞 (一)一氧化氮的病理生理作用 NO是一种活性很强的自由基气体，是从 L一精氨酸经一氧化氮合成 酶 (NOS)合成，与机体许多病理生理变化相联系，其在血压及微循环调 +。二二二二二二二二二洲二二二二二二~二二二~+ 27 十二:~ 二:二一 ~‘。.二. 二。‘二二+ 名员d匕论 文 花 生 四姗 胶 代 谢 产 物 和 一氧 化 氮在 月R-I" 食息 中的 作 用 节中的作用越来越受到重视。NO除有舒张血管作用外还有调节血压和组 织灌注，抗血小板聚集等作用[401。目前己检测出两种不同类型 NOS，分别称 为结构酶 (cNOS)和诱导酶 (iNOS)e cNOS由内皮细胞和星形胶质细胞产生， 是依赖 Ca'‘调节蛋白的一种酶，在生理状态下具有活性，因而在多种生物过程 中起作用。iNOS不依赖Ca'十调节蛋白，最初在巨噬细胞中发现，现发现它存在 于血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、绒毛滋养细胞和血小板内，肿瘤坏死因 子、白细胞介素一1 (IL-1)和Y一干扰素是最强的NO合成与释放的介导剂，而许 多血管活性物质如缓激肤、组胺、5-经色胺、凝血酶等亦通过释放 NO起舒张 血管的作用[39] 正常情况下，血管张力由内皮原血管扩张剂包括 NO、前列环素 (PGI,)和血管收缩剂内皮素 (ET)的相互作用所决定。NO和 PGI:抑 制血管平滑肌收缩、血小板聚集、血小板或单核细胞在内皮细胞上的钻 附。NO有助于维持各种脏器血流灌注的自身稳定，是微循环的重要调节 机制。但休克时NO的合成增多，可导致血管扩张，_血管失代偿，使血压 进一步下降，组织灌注异常，并可损伤血管内皮细胞，造成弥漫性血管内 凝血 (DIC) [4'1, NO生成过多还可抑制心肌功能。已有实验证明感染性 休克、失血性休克NO值显著升高，造成严重低血压，加重休克[4i[ o NOS 抑制剂如 N一单甲基一L一精氨酸 (L-NMMA)能改善休克，动物实验能升高 血压，使肾血流和肾小球滤过率明显升高，能抑制心机抑制因子和对抗 TXA,, PAF等休克介质的活性[431 (二)一氧化氮与羊水栓塞 我们前面的研究提示 AFE的发生可能与羊水中含有特殊物质和机体 对羊水中的物质产生特别反应及过敏样反应有关，这种羊水进入血循环导 致机体产生和释放大量LTC4, PGI,. TXA,等脂类介质，此外，我们推测 羊水亦有可能刺激血管内皮细胞、血小板、巨噬细胞和绒毛滋养细胞等释 放大量 NO;羊水中含有凝血酶样物质，通过激活凝血酶，进一步激活 +二二二“二:二二二二二二二二:::二韶二二二~二~ + 28 十二‘二 。 一 二二二二二二二二二二二+ 不员创卜宝仑岁戈 花 连‘四 嫌 酸 代 侧廿尸丢物 和 一 氧 化 氮 在 羊 习‘检 塞 中 的 作 用 NOS，产生NO;1血L栓素也可激活血小板中的N()5生成N()[:，，]。 我们的研究表明用自体原羊水和有胎粪污染的羊水与全血培养，不会 弓}起lfll中Nq用认’的升高;同时动物实验发现注入自体羊水和胎粪液， 虽然在注入后5、45 分钟血中浓度升高，但在 120分钟回落至注入前，而 且其上升的程度低于胎盘组织提取液和人羊水组，认为自体羊水对血 NO 的水平影响不大。从实验中发现胎盘组织提取液组和人羊水组血中的 Nq/Nq‘的浓度升高显著，而这两组兔血中的LTc;、PGIZ、TxA:的浓度 也明显高于其它组，从此川一看出LTc。、PG12、下xA:的升高与No呈正相 关，与致兔死亡亦呈正相关。提示AFE 的发生与NO和脂类介质存在量效 关系，脂类介质的增高以及NO的大量释放，加速循环衰竭，是导致 AFE 病理生理变化的重要原因，但 AFE 时 NO的释放和脂类介质之间是否存在 相互作用及脂类介质是否刺激NO的释放和机制仍有待进一步探讨。 通过本实验我们认为羊水栓塞的发病与花生四烯酸的代谢产物和一 氧化氮有密切关系，同时提出几个问题进行商榷。 1.在实验中从兔耳静脉注入新鲜、自体原羊水无一例兔死亡，实验结 果与 Spence相一致;胎粪液组亦无兔死亡，这一结果与 Clark报道的人 发生羊水栓塞时清亮的羊水与胎粪污染的羊水在心衰、母体死亡、新生儿 预后等方面并无显著性差异不矛盾。检测这两组兔在注入液体后不同时间 血中的TXB:和LTC，有升高，注入后2小时有下降倾势。注入兔原羊水和 胎粪液尽管血中TxBZ和 LTc;升高，但不能引起兔死亡，说明单纯是羊水 即使是被胎粪污染的羊水进入血循环似乎不是 AFE致死的主要原因，在 解E的发生中除了前列腺素、白三烯外，还有其它因素参与发病。 2.用异体羊水即人羊水注入兔耳静脉，共八只兔，其中三只兔死亡， 另五只存活。兔死亡的时间分别在注入羊水后 4分钟、JO 分钟和 15 分 钟，且死亡兔血浆TxBZ、6一Kot。一PGF.，和 LTC，的上升高于存活兔。这与 瓶ega丽用人原羊水注入雌性日本白化兔致 100%兔死亡不完全符合。异体 十二二二二二二二。二二“洲。二二.二二二川二