脑得生片中阿魏酸薄层色谱鉴别展开剂的选择

收稿日期 : 2008203201; 　修订日期 : 2008209201 作者简介 :罗音久 (19722) ,男 (汉族 ) ,重庆荣昌人 ,现任西南大学药学院 中医药学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药学相关研究工作. 脑得生片中阿魏酸薄层色谱鉴别展开剂的选择 罗音久 , 曾忠良 (西南大学药学院 ·中医药学院 ,重庆 　400716) 摘要 :目的 筛选脑得生片中阿魏酸薄层色谱鉴别的展开剂。方法 比较 6种不同的展开剂系统的展开效果。结果 以甲 苯 -三氯甲烷 -醋酸乙酯 - 冰醋酸 (6∶5∶2∶1)作展开剂 ,分离效果好 ,斑点清晰。结论 此展开剂专属性强 ,重复 性好。 关键词 :脑得生片 ; 　阿魏酸 ; 　薄层色谱 ; 　展开剂 中图分类号 : R282. 5　　文献标识码 : B　　文章编号 : 100820805 (2009) 0420973201 　　近年来 ,高效液相色谱、气相色谱、高效毛细管电泳等仪器分 析在药品检验中发展迅速 ,但薄层色谱法以其操作方便、设备简 单、分离效率高、专属性好、速度快、色谱参数易调整等特点 , 在药物分析 ,特别是中药材和中成药鉴别中应用广泛 [ 1, 2 ]。《中 国药典 》2005年版 Ⅰ部中收载中药材和中成药 1 146种 ,薄层色 谱法用于鉴别的达 1 523项 ,但有相当数量薄层色谱法的展开剂 中仍然使用了毒性较大的试剂 ———苯。苯对人体血液系统有很 大的危害 ,长期接触苯可导致白血病等危及到人体生命安全的严 重疾病 ,因此有必要进行改进。 脑得生片由三七、川芎、红花、葛根、山楂等多味中药经适当的 工艺加工制成 ,具有活血化淤、调经通络的功效。用于瘀血阻络所 致的眩晕、中风等 [3 ]。阿魏酸是川芎中主要化学成分之一 [4 ]。在 现有的脑得生片质量中阿魏酸的鉴别采用的是薄层色谱法 , 其展开剂苯 -三氯甲烷 -冰醋酸 (6∶5∶1)中仍然使用了毒性较 大的试剂苯。本研究通过对多种展开剂的选择 ,筛选出不含试剂 苯 ,且鉴别效果良好的新的展开剂系统。现报道如下。 1　仪器与材料 1. 1　仪器 PBQⅡ薄层自动铺板仪 (重庆南岸新力实验电器厂 ) ; ZF - I型三用紫外分析仪 (上海顾村电光仪器厂 ) ;自动通风橱 (成都倍特实业有限公司 )。 1. 2　药品与试剂 薄层层析硅胶 G (青岛海洋化工有限公司 ,薄 层层析用 ) ;化学试剂均为分析纯。 脑得生片 (武汉东山制药厂 , 050918, 060309;广西纯正堂制 药厂 , 20051208;江西省黄岗山制药厂 , 051112)。阿魏酸对照品 , 购自中国药品生物制品检定所。 2　方法与结果 2. 1　薄层板的制备 0. 5%的 CMC - Na钠溶液与硅胶 G (3∶1)混 合搅拌 ,去除气泡 ,以自动铺板仪涂板 ,厚度为 0. 3 mm,水平放置 , 室温下晾干 ,放入烘箱内 110 ℃烘 30 m in,取出 ,放于干燥处备用。 2. 2　溶液的制备 [ 3 ] 取脑得生片 2片 ,研细 ,加醋酸乙酯 - 甲酸 (9. 5∶0. 5)的混合溶液 20 m l,加热回流 4 h,滤过 ,滤液蒸干 ,残 渣加甲醇 2 m l使溶解 ,作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品加 甲醇配制成浓度为 0. 5 mg·m l- 1的对照品溶液。 2. 3　薄层条件及结果判断 [3 ] 吸取供试品溶液 5μl,对照品溶液 2 μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,分别置于不同展开剂中 ,上行 展开 ,展距约 8 cm,晾干 ,喷以新配制的 1%三氯化铁和 1%铁氰化 钾 (1∶1)的混合溶液显色或 365 nm紫外光灯下检视 ,观察结果。 2. 4　展开剂系统筛选 2. 4. 1　展开剂系统 Ⅰ 以石油醚 - 醋酸乙酯 - 冰醋酸 ( 7∶3∶ 1)为展开剂 ,喷以新配制的 1%三氯化铁和 1%铁氰化钾 (1∶1) 的混合溶液显色。供试品色谱中 ,斑点不圆整 ,出现明显分层现 象 (图 1a)。 2. 4. 2　展开剂系统 Ⅱ 以甲苯 - 醋酸乙酯 - 甲酸 (5∶2∶1)为 展开剂 ,置紫外光灯下检视 ,供试品色谱中 ,各斑点分离不够明 显 ,有拖尾现象 ,在对照品阿魏酸斑点的相应位置 ,供试品虽也有 斑点出现 ,但颜色与之不同见图 1b。 2. 4. 3　展开剂系统 Ⅲ 以三氯甲烷 - 醋酸乙酯 - 甲酸 ( 5∶4∶ 0. 5) 为展开剂 ,置紫外光灯下检视 ,供试品色谱中 ,在对照品相 应斑点的位置 ,有其它斑点的干扰 ,且 Rf值较大见图 1c。 2. 4. 4　展开剂系统 Ⅳ 以甲苯 - 甲醇 - 冰醋酸 (9∶1∶0. 1)为 展开剂 ,紫外光灯下检视 ,供试品色谱中 ,在对照品斑点相应处 , 出现分离不好的多个斑点 ,且颜色与相应的供试品斑点颜色有所 差异 ,无法正常分辨见图 1d。 2. 4. 5　展开剂系统 Ⅴ 以环己烷 - 二氯甲烷 - 冰醋酸 ( 8∶8∶ 1)为展开剂 ,喷以新配制的 1%三氯化铁和 1%铁氰化钾 (1∶1) 的混合溶液显色。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置 上 ,显相同颜色的斑点 ,斑点形状较圆整 , Rf值适中见图 1e。 2. 4. 6　展开剂系统 Ⅵ 以甲苯 - 三氯甲烷 - 醋酸乙酯 - 冰醋酸 (6∶5∶2∶1)为展开剂 ,紫外光灯下检视 ,对照品色谱中 ,在与 对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 ,斑点清晰 ,圆整 , Rf值适中 ,展开效果良好见图 1f。 1～3. 样品　　4. 阿魏酸对照 图 1　脑得生片在不同展开剂中的薄层色谱图 3　讨论 阿魏酸为有机酸 ,具有一定的极性 ,以甲苯 - 三氯甲烷 - 醋 酸乙酯 -冰醋酸 (6∶5∶2∶1)和环己烷 - 二氯甲烷 - 冰醋酸 (8 ∶8∶1)为展开剂的色谱中 ,斑点清晰 ,较圆整。但是采用 1%三 氯化铁和 1%铁氰化钾 (1∶1)的混合溶液显色 20 m in后整块薄 层板就可能染成蓝色 ,不利于薄层板的保存。而以甲苯 -三氯甲 烷 -醋酸乙酯 -冰醋酸 ( 6∶5∶2∶1)为展开剂 ,在紫外光 ( 365 nm)下显色可以使薄层板得以较长时间的保存。而且该法具有 良好的重复性 ,也不含对人体危害较大的苯 ,可代替 2005版《中 国药典 》中脑得生片的质量标准中阿魏酸鉴别的含苯展开剂。 参考文献 : [ 1 ]　郭清峰 ,王晓琦 ,毛巍巍 ,等. 对《中国药典 》一部薄层色谱法中含 苯展开剂的改进 [ J ]. 中国药事 , 2003, l7 (5) : 309. [ 2 ]　吕长淮. 薄层色谱法在药物分析中的应用进展 [ J ]. 中国药房 , 2006, 17 (22) : 1748. [ 3 ]　国家药典委员会. 中国药典 , Ⅰ部 [ S ]. 北京 :化学工业出版社 , 2006: 571, 131. [ 4 ]　杨　云 ,冯卫生. 中药化学成分提取分离手册 ,第 Ⅱ版 [M ]. 北京 : 中国中医药出版社 , 1998: 16. ·379· L ISH IZHEN MED IC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2009 VOL. 20 NO. 4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期