实验核医学(第七章)

null第七章 放射自显影术第七章 放射自显影术null 利用放射性样品自身所放出的核射线使感光材料中的卤化银感光，形成潜影，经显影、定影后形成图像。 借助感光颗粒的部位和强度，通过影响分析，能准确判断放射性示踪剂的分布部位和数量。 特点： 分辨力好、灵敏度高； 可累积成像，影像逼真； 可观察形态功能变化； 精确测量放射性物质的分布； 操作简单。第一节 放射自显影的原理第一节 放射自显影的原理一、潜影形成 1.核射线引起AgBr晶体电离，射出电子； 2.电子向敏化中心移动、聚集，形成阴电层； 3.银离子向阴电层移动，俘获电子，形成银原子； 4.银原子聚集敏化中心，形成潜影。 二、潜影的消退 形成潜影的银原子，在水、氧作用下，又变成离子返回晶格。第二节 放射自显影的材料第二节 放射自显影的材料一、感光材料的种类及选择 卤化银：含量、颗粒－灵敏度、分辨率 明胶：支持作用 1.原子核乳胶 ①液体核乳胶 溴化银:明胶－80:20，常温下为半固体，低温下为胶胨状，温度至40℃为液态。稀释度可自由调节，直接涂在样本或支持物上，用于光镜自显影和电镜自显影，根据需求选择不同大小卤化银颗粒的乳胶。null②核乳胶干板及核乳胶片 将液体核乳胶均匀涂布在玻璃或塑料等做成的片基上制备而成。根据实验要求选择合适的乳胶层厚度。用于宏观及低倍的光镜自显影。 ③揭膜核乳胶（脱底核乳胶） 制备与核乳胶干板相似，使用时将干板上的核乳胶揭下使用。用于光镜自显影的定量研究。 2.氚片 由溴化银、碘化银和明胶组成。银晶体颗粒平均直径为1μm，对低能β射线敏感度高。乳胶涂在醋酸纤维素酯片基单面，无保护层。用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍光镜自显影。null3.X线片 由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒平均直径为2.5μm。乳胶涂在醋酸纤维素酯片基的两面，外覆保护层，分辨率较差，主要用于射线能量较高核素的宏观自显影或低倍光镜自显影。 4.自显影增强剂和增强屏 为缩短实验周期，增加自显影效率，添加了对射线敏感的荧光材料。吸收射线，发射光子，光子不易被保护膜和基底材料吸收，射程远。 增强屏是用荧光材料制成厚度均匀、透光度良好的薄膜。将标本紧贴在增强屏一面，另一面贴在感光片上。null5.磷屏成像 磷屏：由一薄层BaF:Br:Eu2+或SrS:Ce:Sm2+组成。 读出装置：激光共聚焦扫描装置、后续电子线路、 光电倍增管、计算机数据处理。 射线与磷屏接触，使晶格发生亚稳态变化，处于高能量状态，激光使亚稳态高能量晶格复原，多于能量以光子形式释出，被PMT探测，其亮度与能量呈正相关，激发态晶格位置被扫描头准确反应到计算机。 与传统方法相比，无需显影、定影等操作，曝光时间缩短，敏感度提高，可在室温、可见光下操作。磷屏可反复使用。适用与核素的宏观自显影。null二、放射自显影常用的放射性核素 第三节 基本技术和方法第三节 基本技术和方法一、放射自显影技术的主要类型和特点 1.宏观自显影 观察范围大、要求分辨力低，可用肉眼、放大镜或低倍显微镜观察，用灰度或黑度判断示踪剂部位和数量。 2.光镜自显影 观察范围较小，要求分辨力高，高倍显微镜下的银颗粒分布及数量来判断放射性核素的部位和数量。 3.电镜自显影 观察范围更小，要求分辨力更高，以电子显微镜下的银颗粒分布及数量来判断。null二、放射自显影的基本方法 引入示踪剂→标本制备→自显影片的制备 →曝射→显像处理 1.示踪剂引入的方法 途径：体内、体外 方法：脉冲标记、持续标记 2.标本制备 切片、涂片或其它 3.自显影片的制备 接触法、浸膜法、单层乳胶膜制备等null4.曝射 根据示踪剂的量、示踪剂的特点等多方面因素考虑曝射时间。 5.显像处理 显影、定影 6.干燥、染色、封固 7.阅读分析第四节 放射自显影的影响因素第四节 放射自显影的影响因素一、放射自显影的分辨力 1.含义 放射自显影像与其所记录标本中的标记结构之间相互符合的程度。 理论上放射性核素在标本中的位置与显影银颗粒的位置应完全重叠，实际上由于乳胶的厚度、样本与乳胶间的距离都会造成不完全重叠。 两个相邻放射性核素分子在标本中的距离近到多少才能在显影银颗粒上显示为两个颗粒。null2.影响分辨力的因素 ①示踪核素的能量 ②样品的厚度 ③样品与乳胶间的距离 ④乳胶层厚度 ⑤乳胶中银颗粒的大小 ⑥曝射时间 ⑦显影时间null二、放射自显影的本底 除标本内放射性核素外，其它原因造成的显影颗粒。本底高，影响分辨力，影响低水平样品测量。光镜自显影将本底控制在1颗银粒/100μm2以下。 一般曝射时间、显影温度、显影时间、材料保存温度、一些物理化学张力等均可引起本底过高。 三、放射自显影的效率 指待测标本中的放射性核素在曝射时间内，每100次衰变所给出的显影颗粒数目。 null四、示踪剂量和曝射时间 在尽量提高自显影效率的前体下，采用的剂量既不引起放射性损伤的过大剂量，也不是要过分延长曝射时间的小剂量。 五、扩散性示踪剂 标本制备或自显影片制备过程中，造成示踪剂的流动、扩散或损失。