不同提取方法对麻黄中麻黄碱提取得率的比较研究

一 170 一 南京中医药大学学报 2004年5月第 加卷第 3期 JOURNAL OFNANJEVG TCM UNIVERSITYVof．20 ．3 Ma'r．2004 不同提取对麻黄中麻黄碱提取得率的比较研究 沈红，狄留庆，黄耀洲 (南京中医药大学新药及海洋药物研究开发中心，江苏南京 210029) 摘要：目的 比较优选麻黄浸提方法。方法 以盐酸麻黄碱为化学成分指标，对中药麻黄5种提取方法(半仿生法、水煎 煮法、温浸法、酸性乙醇回流提取法、水蒸气蒸馏法)进行平行比较研究。结果 麻黄碱的提取得率为半仿生法>水煎煮 法 >酸性乙醇回流提取法>温浸法>水蒸气蒸馏法 结论 半仿生法提取效果最好： 关键词：麻黄；浸提方法；麻黄碱；提取得率 中图号：R284．2 文献标识码：A 文章编号：1000—5005(2o04)03一o17o一03 麻黄为麻黄科植物草麻黄 (Ephedra sinica Stapf)、中麻黄(Ephedra intermedia et C A Mey)或木 贼麻黄(Ephedra equisetina Bge)的干燥草质茎，是 中医临床常用的药物之一，具有发汗解表、平喘、 利水等功效，常用于治疗风寒表症、麻疹初期透发 不畅、咳嗽气喘等病症。麻黄所含主要有效成分 为小分子生物碱类化合物。具有挥发性。在含有 麻黄的中药制剂工艺研究过程中，如何提高麻黄 生物碱在制剂中的提取得率是工艺研究的主要内 容之一。有关麻黄中麻黄碱的提取方法文献报道 的有半仿生法、水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流 提取法、水蒸气蒸馏法。本实验以麻黄碱为 品，采用 I-IPLC对提取物成分进行含量测定，对中 药麻黄 5种提取方法进行平行比较研究，为进一 步考察麻黄的提取工艺奠定基础。 1 仪器及试剂 1．1 仪器 Waters高效液相色谱仪；600E型输液泵；2487 型紫外检测器；CAPULUGS RC．Ⅱ进样器，Millenni． um3 工作站；Lichrospher C18 5 m 4．6 Bin×250 Bin 柱；YXJ．2台式高速离心机；BP 211D德国Sartorius 电子天平；色谱恒温仪(南京谐和色谱配件研究 所)。 1．2 试剂及药品 盐酸麻黄碱(中国药品生物制品检定所，批 号：0714．9903)；甲醇(江苏汉邦科技有限公司，批 号：2001111706)；三乙胺(上海光华化学试剂厂， 批号：20000306)；乙酸胺(南京化学试剂厂，批号： 991057)；麻黄购于南京市医药公司，经鉴定符合 《中国药典》一部标准。 2 实验方法与结果 2．1 麻黄浸提方法 2．1．1 半仿生提取方法l J 取麻黄 20 g，平行 5份，分别加 10倍量水，用 盐酸调 pH 1，浸泡0．5 h，煎煮 1 h，趁热滤过，药渣 加 8倍量水，Na0H调 pH 1O，煎煮 2次，每次 0．5 h，均趁热滤过，合并 3次滤液，取 1／3液体，80~C 0．08 MPa减压薄膜浓缩成浸膏，备用。 2．1．2 水煎煮法 取麻黄20 g，平行 5份，加 10倍量水浸泡0．5 h，煎煮 1 hl ，趁热滤过，药渣加 8倍量水再煎 2 次，每次 0．5 h。合并 3次滤液，取 1／3液体，80~C 0．08 MPa减压薄膜浓缩成浸膏，备用。 2．1．3 温浸法 取麻黄20 g，平行 5份，加 10倍量水，先冷浸 0．5 h，再 80~C温浸 1 hl ，趁热滤过，再加 8倍量 水，80oC0．08 MPa温浸 2次，每次 0．5 h。合并 3次 滤液，取 1／3液体，80~C 0．08 MPa减压薄膜浓缩 成浸膏，备用。 收稿日期；2003—12—08；修稿日期：2004—02—08 基金项目：江苏省教育厅自然科学基金(99KJB360004) 作者简介：沈红(1979一)，'江苏昆山人，南京中医药大学 2001级硕士研究生 维普资讯 http://www.cqvip.com 沈红，等：不同提取方法对麻黄中麻黄碱提取得奎的比较 箜3_塑 2．1．4 酸性乙醇回流提取法 取麻黄 20 g，平行5份，加 lO倍量70％乙醇， 用盐酸调 pH l，浸0．5 h，回流提取 1 h，趁热滤过， 再加 8倍量 70％乙醇回流提取 2次，每次 0 5 h， 合并 3次滤液。取 1／3液体，8Occ 0．08 MPa减压 薄膜浓缩成浸膏，备用。 2．1．5 水蒸气蒸馏法 取麻黄 100 g，先用少量水润湿，用 NaOH调 DH l2，浸 0．5 h，水蒸气蒸馏得蒸馏液 700 mL，备 用。 2．2 麻黄碱的HPLC含量测定方法学研究 2．2．1 色谱条件 Liehrospher C培ap5／an 4．6 mill x 250 I／IITI色谱 柱；流动相甲醇．0．02mol／L乙酸胺．0．5％三乙胺 (5O：25：25)【 ；流速为 l mlJmin；检测波长 257 nm；柱温 30．2cc。 2．2．2 麻黄碱标准曲线的绘制 精密称取盐酸麻黄碱 49．95呜 ，用甲醇溶解 定容至 50 mL。精密吸取该母液 2 mL、4 mL、6 mL、8 mL至 10 mL量瓶 中，甲醇定容，配成 0．199 8 InL、0．399 6 Ing／InL、0．599 4 mg／mL、 0．799 2 mg／mL及 0．999 0 me,／mL的标准液。每 一 浓度平行进样 2次，每次进样 2O ，按色谱分 析条件测定色谱峰面积，以此为纵坐标，标准液浓 度为横坐标，得标 准曲线：Y=408．617 5X一 一 l7l — l 504．175，r=0．999 7，线性范围 199．8～999．0 ~g／mL。 2．2．3 精密度 取浓度为799．2~g／mL的标准液，连续进样 6 次，每次2O 。结果 RSD=0．83％，符合规定。 2．2．4 稳定性 取2．1．4项下样品，处理成供试液，每 2 h进 样 1次，每 次 2O ，共 6次。结 果 RSD = 2 997％ 。 2．2．5 重现性 取 2．1．4项下所得溶液的2／3，7Occ减压薄膜 浓缩成浸膏 5．927 9 g，取 0．4 g左右，精密称定， 用甲醇 8 mL超声 10 min，转移至离心管中以3 000 r／min离心 10 min，取上清液定容至 l0 mL，高速离 心(20 000 r／min)2 min。按以上方法平行取 6份， 每份进样 2O 。结果 RSD=1．82％，并得到该浸 膏中麻黄碱的含量为 0．931 9％。 2．2．6 加样回收率 取 2．1．4项下浸膏 0．18 g左右精密称定，平 行试验9份，每 3份为 l组，分别加入0．933 2 me,／ mL的标准液 1．6 mL、2．0 mL、2．4 mL各3份，分别 加入甲醇 8 mL超声 10 min，转移至 10 mL量瓶 中，最后用甲醇定容至刻度。每份进样 2次，每次 2O 。结果 RSD=2．21％，见表 l。 表 1 麻黄碱加样回收率试验 2．3 麻黄药材及其不同提取物中麻黄碱的含量 。 测定 2．3．1 生药中麻黄碱的含量测定 按《中国药典》一部(2000年) 麻黄含量测 定方法中药材项下的处理方法制备样品3份，挥 去溶剂，用甲醇定容至 10 mL，取 2 mL加甲醇至 10 mL，离心，取上清液，每份进样 2次，每次 2O 结果见表 2。 表 2 麻黄药材中麻黄碱的含量 维普资讯 http://www.cqvip.com 一 172 — 2．3．2 不同处理方法所得样品中麻黄碱的含量 测定 南京中医药大学学报 2004年 5月第 加 卷第 3期 膏(水蒸气蒸馏法除外)，取稠膏的 2／15左右，加 甲醇 8 mL超声 10 min，定容至 10 mL，离心后，每 取5种方法所得药液的 1／3，减压浓缩成稠 份进2次，每次20 。结果见表3。 表 3 不同浸提方法浸提麻黄中麻黄碱含量的比较(n=5) 注：水蒸气蒸馏法所得药液经 NaOH调 pH后，用氯仿多次萃取后挥去溶剂，最后用甲醇定容，进样后在相应保留时间无峰。 结果表明，经 q检验，对麻黄中麻黄碱的提 取，半仿生法与水煎煮法、温浸法、酸性乙醇回流 提取法存在显著性差异，麻黄碱的提取得率为半 仿生法 >水煎煮法 >酸性乙醇回流提取法>温浸 法 >水蒸气蒸馏法，半仿生法提取效果最好。 3 讨论 由各方法所得样品含量测定结果，经多组样 本均数比较(q检验)，知半仿生法、煎煮法及有机 溶剂法与温浸法相比较均数均有显著性差异，半 仿生法与煎煮法及有机溶剂法也有显著性差异， 煎煮法与有机溶剂法间无显著性差异，且用半仿 生法提取麻黄中麻黄碱得率最高。 分析“半仿生提取法”在具体工艺选择过程 中，既考虑到单体成分，又考虑到活性混和成分， 以单体成分做指标和(或)适宜的药理模型做指 标，提取活性混合物，这样单体寓于混合物中，即 融成一个新的统一体，称之为“活性混合物” 一。 这样做既能充分发挥混合物成分的综合作用特 点，又有利于用单体成分控制制剂质量。麻黄药 材调 pH l后，碱性成分成离子态，易溶于水，以盐 酸麻黄碱作为定量指标，用 HPLC法测得得率较 其他方法高。且之后又调 pH 10可将部分碱性成 分游离，脂溶性大，易被人体吸收。故该方法提取 麻黄中的有效成分较科学。 参考文献： [1]战旗，张兆旺，孙秀梅．麻黄两种方法提取液的成分含 量比较[J]．山东中医杂志，1999，18(7)：322． ：2]马爱华，张俊慧，陆晓和，等．煎煮时间对麻黄中麻黄碱 溶出率的影响[J]．中国实验方剂学杂志，1995，1(2)：44． [3]刘昌美，陶建生．中药麻黄浸提方法的比较研究[J]．上 海中医药杂志，2000，(4)：47． ：4]庞磊，李久彤，阎明．高效液相色谱法测定麻黄浸膏粉 中总麻黄碱含量[J]．新疆中医药，20OO，l8(1)：14． [5]中华人民共和国药典委员会 ．中国药典(一部)[S]．广 州：广东科技出版社，2000．262． [6]张瑞亭，张兆旺，孙秀梅．思维方式的转换与中药“半仿 生提取法”[J]．中国中药杂志，1997，22(9)：542． Effect of Different Extrac~on Methods on Ephedrine Extraction Yield SHEN Hong，DI Liu-qing，HUANG Yao-zJmu (Research Institute ofNew嘶 and Marine嘶 ，Nanjing Universit~of Traditional Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu Province， 210029，China) AB! RACT：OBJFXYllVE To compare between different methods of extraction ofHerba Ephedrae．M咂 日10D With ephedrine hydroehloridum as the chemical index，five methods of extraction of Herba Ephedrae(semi—bionics，decoction，warlTl—soaking，acid aleohol reflux extraction，distillation)were compared．RESULT The optimal extraction methods for ephedrine were in the following order．-semi —bioniCS，decoction，acid aleohol reflux extraction，warlTl soaking and distillation．C0NCI Is10N Semi —bioniCS is the optimal method of extraction． KEY W0]RDS：Herba Ephedrae；extraction methods；ephedrine，extraction yield 维普资讯 http://www.cqvip.com