实验五 人淋巴细胞的培养（3）.jsp

null实验五 人类淋巴细胞株培养实验五 人类淋巴细胞株培养 三、细胞传代培养 一、实验目的一、实验目的熟练掌握细胞传代培养的操作。 观察外培细胞在不同时期的形态变化及生长状况。二、实验原理二、实验原理 null悬浮型细胞培养常见于淋巴细胞、白血病细胞、骨髓瘤细胞和腹水型恶性细胞等的培养。由于这类细胞或细胞集体可悬浮在液体培养基中，而不附着在固体表面上，因此无论原代培养或传代培养的细胞增殖过程都没有贴附性细胞那种明显可辨的3个变化阶段，其培养的可见效果是细胞数目的增多及溶液中细胞浓度和密度的加大。null悬浮型细胞传代培养的最大特点是原代细胞不必经过机械分离或消化酶消化处理，传代时只须把培养的悬浮细胞做适度稀释或把培养细胞经简单的离心处理后再加入适量的培养液即可培养。因此，细胞在从原代到传代的转变过程中遭受的机械损伤和化学损伤的可能性较少，损伤程度也较轻，相对而言，传代的成功率较高。三、仪器、材料和试剂三、仪器、材料和试剂超净工作台 微量加样器（移液枪） 倒置显微镜 光学显微镜 高压灭菌锅 蒸馏水器 超低温冰箱 二氧化碳培养箱（一）仪器（二）用具、材料（二）用具、材料细胞培养瓶 血球计数板 滴管 培养细胞（三）试剂（三）试剂台盼蓝（染料） 乙醇四、实验步骤四、实验步骤选取拟作传代培养的样本，取0.5mL细胞悬浮液加入等量台盼蓝染液，混匀后用血球计数板计算细胞的成活率。如果样本成活率高，无污染即可用于传代。 用弯头吸管将原代培养瓶内的细胞吹打均匀，注意将那些半贴壁生长的细胞吹打脱离以免在移换容器时丢失。 把细胞悬液吸入无菌离心管中，塞紧反口橡皮塞以防止空气污染，用1000r/min离心5min。 吸去上清夜，加入适量的培养液，用吸管打匀制成细胞悬液。 重复步骤1，计算细胞数，加入适量培养液把最终细胞数调节至1×105～3×105个/mL。 把细胞悬浮分装至新备的细胞培养瓶中，置于37℃二氧化碳培养箱中继续培养。null操作：操作：每小组先用一个培养瓶配制50ml的生长培养基 每人取10ml培养基到自己的细胞培养瓶内 然后向细胞培养瓶内接种400ul的人淋巴细胞株原液 放入二氧化碳培养箱，旋松瓶盖 根据细胞的数量看细胞瓶是否平放或直立放置观察观察倒置显微镜的使用方法 利用课余时间和下次实验课时间用倒置显微镜进行观察。 五、实验 描绘在倒置显微镜下观察到的现象。 六、思考 如何防止传代过程的可能污染？