双黄连注射液标准

双黄连注射液质量草案 双黄连注射液 Shuanghuanglian Zhusheye 【处方】 金银花250g 黄芩250g 连翘500g 【制法】 以上三味，黄芩酌予碎断，加水煎煮二次，每次1小时，分次滤过，合并滤液，滤液用盐酸（2mol/L）调节pH值至1.0～2.0，在80℃保温30分钟，静置24小时，滤过，沉淀加8倍量水，搅拌，用40%氢氧化钠溶液调pH值至7.0，并加等量乙醇，搅拌使溶，滤过，滤液用盐酸（2mol/L）调节pH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗涤至pH值至4.0，加10倍量水，搅拌，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至6.0，加入0.5%活性炭，充分搅拌，50℃保温30分钟，加入1倍量乙醇搅拌均匀，立即滤过，滤液用盐酸（2mol/L）调pH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下干燥。 金银花、连翘分别加水浸渍30分钟后，煎煮二次，每次1小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25（70-80℃测），放冷至40℃，缓缓加入乙醇使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加入3～4倍量水，调节pH值至7.0，充分搅拌并加热至沸，静置48小时，滤取上清液，浓缩至相对密度为1.10-1.15（70-80℃测），放冷至40℃，加入乙醇使含醇量达85%，静置12小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，分别制成金银花、连翘提取液，备用。 取黄芩提取物，加水适量，加热并用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0使溶解，加入金银花、连翘提取液，加水至1000ml，加入0.5%活性炭，保持pH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。 【性状】 本品为棕红色的澄明液体。 【鉴别】（1）取本品10ml，置水浴上蒸干，残渣加85%乙醇5m1使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加85%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 （2）取本品4ml，置水浴上蒸干，残渣加甲醇5m1使溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，热浸1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各2～5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（8：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】 溶液的颜色 精密量取本品0.5ml，置25ml纳氏比色管中，加水稀释至刻度，摇匀，与黄色7号标准比色液（附录Ⅺ A第一法）比较，不得更深。 pH值 应为5.5～6.5（附录ⅦG）。 蛋白质 取本品2ml，置试管中，滴加鞣酸试液1～3滴，不得产生混浊。 鞣质 取本品1ml，依法检查（附录Ⅸ S），应符合规定。 树脂 取本品5m1，置分液漏斗中，加三氯甲烷10ml振摇提取，依法测定（附录Ⅸ S），应符合规定。 草酸盐 取本品10ml，用稀盐酸调节pH值至1～2，保温滤过，滤液调节pH值至5～6，取2ml，加3%氯化钙溶液2～3滴，放置10分钟，不得出现混浊或沉淀。 炽灼残渣 取本品10ml，置已恒重的坩埚中，依法测定（附录IX J），不得过1.5%（g/ml）。 钾离子 取本品2ml，依法测定（附录Ⅸ S），应符合规定。 总固体 精密量取本品25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，置水浴上蒸干后在105℃干燥3小时，置干燥器内冷却30分钟，称定重量。遗留残渣应为2.2～2.8%（g/ml）。 重金属 取本品2ml，依法检查(附录Ⅸ E第二法)。含重金属不得过百万分之十。 砷盐 取本品1ml，加2％硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500～600℃炽灼至完全灰化，放冷，残渣加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查(附录Ⅸ F第一法)。含砷量不得过百万分之二。 溶血与凝聚 2%红细胞混悬液的制备 取兔血或羊血数毫升，置盛有玻璃珠的容器内，振摇10分钟，或用玻璃棒搅动10分钟，除去纤维蛋白原使成脱纤血液，加约10倍量的生理氯化钠溶液，摇匀，离心，倾去上清液，沉淀的红细胞再用生理氯化钠溶液洗涤2～3次，至离心后上清液不显红色为止，将所得红细胞按体积用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液（当日使用，用时摇匀）。 试验方法 取试管3支，分别加入供试品溶液0.0、0.3、0.3ml，然后分别生理盐水2.5、2.2、2.2ml和上述红细胞混悬液2.5ml，迅速置36.5(0.5℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，一般观察4小时，不得有溶血和凝血现象。若有凝聚，可取其中加有供试液的一支试管振摇，凝聚物应能均匀分散。 热原 按热原检查法（附录Ⅻ A），剂量按家兔体重1m1/kg缓缓注射，应符合规定。 异常毒性 取本品，加氯化钠注射液稀释3.5倍，依法检查（中国药典2005年版二部附录XI C），静脉注射，应符合规定。 过敏试验 取本品，依法检查（中国药典2005年版二部附录XI K），应符合规定。 山银花 取本品20ml，加盐酸3滴，边加边搅拌，滤过，滤液加氢氧化钠试液调节pH值至7，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，不得显与对照品完全一致的紫红色斑点。 其他 应符合注射剂项下有关的各项规定（附录IU）。 【指纹图谱】精密吸取本品2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；YMC-Pack ODS-A 色谱柱(柱长为150mm，柱内径为4.6mm)；梯度洗脱，以甲醇为流动相A，以0.25%冰醋酸（V/V）为流动相B；检测波长为350nm；柱温为30(C；流速为每分钟1ml。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。 时间 (分钟) 流动相A (%) 流动相B (%) 0～15 15→35 85→65 15～20 35 65 20～50 35→100 65→0 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，60分钟内色谱图。供试品色谱图应与标准指纹图谱基本一致，有相对应的12个特征峰，特征峰出峰时间应在40分钟之内。将供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004，1.0B版），与标准指纹图谱相比较，剪切5分钟之前和50分钟之后的溶剂峰，计算相似度，相似度应不低于0.80。 双黄连注射液对照指纹图谱 附：（1）岛津2010 CHT液相色谱仪数据处理积分参数 Width：5；Slope：1000；Drift：0；T．DBL：1000；Min Area：1000；10号色谱峰（黄芩苷）不积分。 （2）安捷伦HP1100液相色谱仪数据处理积分参数 斜率灵敏度：1；峰宽：0.1；最小峰面积：1；最小峰高：0.01；谷底积分：开；10号色谱峰（黄芩苷）不积分。 【含量测定】 金银花 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以1%冰醋酸为流动相B，按下进行梯度洗脱；检测波长为324nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0～25 16→26 84→74 25～27 26→100 74→0 27～35 100 0 35～37 16 84 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品和咖啡酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml各含40μg、30μg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品2ml，置10ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含金银花以绿原酸（C16H18O9）和咖啡酸（C9H8O4）的总量计，应为0.20～0.27mg。 黄芩 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（48：52：1）为流动相；检测波长为276nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1000。 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，应为7.0～9.4mg。 连翘 照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈—水（25：75）为流动相；检测波长为277nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加65%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含连翘以连翘苷（C29H36O15）计，应为0.14～0.20mg。 【功能与主治】 清热解毒，清宣风热。用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。适用于病毒及细菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎、咽炎等。 【用法与用量】 静脉滴注，每次每公斤体重1ml，加入氯化钠注射液中（250～500ml）。肌注一次2～4ml，一日2次。 【规格】 每支装20ml 【贮藏】 密封，遮光，置凉暗处。 PAGE 1