恶性肿瘤细胞过继免疫治疗研究进展

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net pendent NF2kappaB activation provides radioprotection to the intes2 tinal epithelium. Proc Natl Acad Sci USA , 2004 , 101 (8) :24522 2457. 24 　Berenson J R , Ma HM , Vescio R. The role of nuclear factor2kap2 paB in the biology and treatment of multiple myeloma. Semin On2 col , 2001 , 28 (6) :6262633. 25 　Bold RJ , Virudachalam S , McConkey DJ . Chemosensitization of pancreatic cancer by inhibition of the 26S proteasome. J Surg Res , 2001 , 100 (1) :11217. 26 　Hideshima T , Richardson PG , Anderson KC. Targeting protea2 some inhibition in hematologic malignancies. Rev Clin Exp Hema2 tol , 2003 , 7 (2) :1912204.27 　Nimmanapalli R , Porosnicu M , Nguyen D , et al. Cotreatmentwith STI2571 enhances tumor necrosis factor alpha2related apopto2sis2inducing ligand ( TRAIL or apo22L)2induced apoptosis of Bcr2Abl2positive human acute leukemia cells. 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All rights reserved. http://www.cnki.net 随着分子生物学技术和免疫技术的不断进步 , 越来越多的特异性肿瘤抗原被发现 ,这些抗原不仅 包括被 MHC2Ⅰ分子和 MHC2Ⅱ分子识别的抗原 , 不但可以用来激活 CD8 + T 细胞 ,而且可以激活 CD4 + T 细胞 ,为体外扩增特异性 T 细胞提供了基 础。 2 　细胞因子刺激的特异性 T细胞体外扩增 传统体外刺激 T 细胞增殖的细胞因子是白细 胞介素22 ( IL22) 和抗 O KD3、抗2CD28 ,现在发现其 他一些细胞因子也在 T 淋巴细胞的特异性扩增中 起重要作用。 2. 1 　IL212 IL212 是一种异源二聚体的细胞因子 ,由 B 淋 巴细胞、巨噬细胞和 APC 细胞产生 ,在与小剂量 IL2 12 同时应用时可产生协同作用 ,能够激发 CD4 + 的 T 细胞反应 ,维持特异性 CD4 + 细胞的增殖 ,而单独 应用 IL22 则得不到相同结果[4 ] 。最近 Xu 等[5 ]的研 究发现 IL212 对 CD8 + 的 T 细胞也有作用 ,能够明 显增加 CD8 + T 细胞对肿瘤细胞的亲和力从而增加 抗肿瘤免疫作用。 2. 2 　IL27 IL27 是一种干细胞来源的细胞因子 ,能够刺激 未活化 T 细胞增殖并维持 T 细胞在体内的增殖稳 态 ,目前研究表明其对刺激特异性 T 细胞增殖有很 大作用 ,还能明显增加树突状细胞 (DC) 负荷抗原肽 刺激特异性 T 细胞的能力。最近的文献报道 , IL27 可通过对 CD4 + T 细胞提供生存信号而促进其向记 忆细胞转化[6 ] 。Robinson 等[7 ] 的研究结果表明 ,应 用脐血来源的单个核细胞进行体外刺激时 ,加入 IL27 可以与 IL22、IL212、抗2CD3 产生协同作用 ,增 强 T 细胞 IFN2γ的分泌 ,增加 T 细胞对肿瘤细胞的 杀伤作用。 2. 3 　IL215 IL215 也是一种体外扩增特异性 T 细胞的生长 因子 ,与 IL22 的结构功能相似 ,与 IL22 共用的受体 IL22Rβ和 IL22Rγ只是在α链上有不同之处。IL215 也是一种多效性的细胞因子 ,能够引起 T 细胞、DC、 自然杀伤细胞的增殖和功能改变 ,并有助于抗原特 异性细胞毒性 T 细胞 (CTL) 的成熟[8 ] 。IL215 还有 促进记忆性 T 细胞产生的作用[9 ] ,并且对 CD8 + T 细胞的归巢有促进作用。在 IL215 刺激下培养的 CD8 + T 细胞更容易回到淋巴组织中 ,如脾脏和淋巴 结 ;而在 IL22 刺激下培养的细胞更容易积聚在炎症 组织中[10 ] 。 2. 4 　CD40 最近有研究表明应用 CD40 或三聚体的 CD40L 也可以扩增特异性 T 淋巴细胞增殖。CD40L 位于 T 细胞表面 , CD40 位于 APC 细胞表面 ,两者的相互 作用通过不依赖 IL22 和 CD28 信号的其他信号转 导途径 ,刺激淋巴细胞向 Th1 型转化 ,并能够延长 肿瘤特异性 CTL 的寿命[11 ] 。Terheyden 等[12 ] 的研 究发现 , 当应用 DC 细胞加上肿瘤溶解产物刺激肿 瘤浸润淋巴细胞 ( tumor infilt rating lymphocyte , TIL) 时 ,得到的 T 淋巴细胞克隆大多是 CD4 + 的 Th2 细胞 ;而加上抗2CD40 McAb 作用于 DC 细胞 时 ,得到的则是 CD4 + 和 CD8 + 的混合克隆。这两种 细胞的协同作用 , 能够明显增加抗肿瘤作用的效 果。 2. 5 　DC 细胞 DC 细胞是专职进行抗原递呈的细胞 ,能够分 泌大量细胞因子 ,在刺激和扩增特异性 T 细胞中具 有重要作用[13 ] 。目前应用 DC 的方法主要有以下 几种 : ①将肿瘤细胞和 DC 细胞融合[14 ] ; ②将 DC 细胞和抗原的蛋白、多肽、肿瘤细胞裂解产物、凋亡 的肿瘤细胞等共同培养[15 ] ; ③将编码肿瘤抗原或某 些细胞因子的 DNA 或是 RNA 转入 DC 细胞中[16 ] ; ④对血液系统的肿瘤可通过特定细胞因子的刺激 使肿瘤细胞分化为 APC 细胞 ,增加肿瘤细胞的免疫 原性 ,这种方法在髓系和淋巴系的白血病中都已经 得到证实[17 ] 。DC 细胞的应用已从实验室走向临 床 ,为增加免疫治疗效果起着更重要的作用[18 ] 。 3 　克服免疫耐受延长免疫持续时间 使用体外培养技术得到的大量特异性淋巴细胞 输入给患者后 ,要面临体内更加复杂的微环境。例 如体内一些免疫抑制因子会抑制输注的淋巴细胞的 增殖和功能。在早期的过继免疫治疗中大多应用 IL22 作为刺激转移细胞在体内增殖和维持功能的 细胞因子。但由于 IL22 在人体应用时有明显毒副 反应 ,不能大剂量应用 , 从而严重限制了 IL22 使 用。目前研究人员正在尝试应用某些新方法。 3. 1 　延长效应细胞体内持续时间和功能 3. 1. 1 　CD4 + 和 CD8 + T 细胞的协同作用 : CD4 + T 细胞以交叉激活机制激活 APC 细胞的抗原递呈能 力 ,使未成熟的 DC 进入活化状态。CD4 + T 细胞在 体内还可通过分泌关键性的细胞因子如 IL22 ,来控 制和维持 CD8 + CTL 的生长。同时还可以调节其他 效应细胞 ,如自然杀伤细胞和巨噬细胞的功能[19 ] , 这在动物模型中已得到证实 [20 ] 。最近的 Dudley ·914·国外医学肿瘤学分册 2004 年 6 月第 31 卷第 6 期　Foreign Med Sci 　Oncol Sect , J une 2004 , Vol. 31 , No. 6 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 等[21 ]的临床报道也证实了应用 CD4 + T 细胞和 CD8 + T 细胞共同输注能明显增加 CD8 + T 细胞在 体内的寿命 ,增加临床疗效。 3. 1. 2 　OX240R 的应用 :OX240R 属于 TNF 受体超 家族 ,表达于激活的 CD4 + T 细胞 ,其配体 OX240L 主要表达于 APC 和 B 淋巴细胞。在各种小鼠肿瘤 模型中 ,通过 OX240R 和 OX240L 的作用 ,可明显激 活体内 CD4 + T 细胞的抗肿瘤免疫反应强度[22 ] 。最 近有一项研究应用抗 OX240 McAb 激活 OX240R , 结果显示应用 OX240 McAb 时 ,较少的 CTL 细胞就 能消除体内的肿瘤细胞 ,已经用于治疗小鼠的脑肿 瘤和肺部转移癌。体内的 T 细胞示踪研究也表明 , OX240 McAb 的应用并不是通过在肿瘤部位积聚 CTL 细胞而发挥作用 ,而是通过增加 T 细胞的功能 而起效[23 ] 。 3. 1. 3 　改变 T 细胞的抗原性 :目前还有其他通过 基因修饰增加 T 细胞的功能。例如通过转基因技 术将粒2巨噬细胞集落刺激因子 ( GM2CSF) 和 IL22 的受体基因转入转移的 CTL 细胞中 ,在 CTL 输注 后 ,应用 GM2CSF 的刺激就可以维持细胞在体内的 增殖而又避免了 IL22 常见的毒性和副作用 ,而且机 体内分泌的 GM2CSF 也会对转移的 CTL 细胞发挥 作用[24 ] 。CTL 细胞是通过其表面的 T 细胞受体 ( TCR)来识别肿瘤细胞表面人的细胞抗原 ( HLA) 呈递的抗原肽 ,以攻击和破坏肿瘤细胞的。如果将 识别某些已知抗原的特定 TCR 受体基因转染至未 激活 T 细胞中 ,则可以获得抗原特异性 T 细胞。例 如 Calogero 等[25 ] 将 HLA2A2 限制性识别 MA GE23 多肽的 TCR 基因转移给 T 细胞 ,再经多肽的刺激 , 成功得到特异性 T 细胞克隆。最近 Heemskerk 等[26 ]研究分析了异基因骨髓移植后微小组织相容 性抗原 HA22 ( minor histocompatibility antigens , mHags HA22)的 CTL 细胞 TCR 受体重排情况 ,选 择具有共性的片段 ,转染供者的淋巴细胞 ,不仅使 HLA 相合供者的 CTL 细胞能够特异性杀伤 mHags HA22 抗原特异性肿瘤细胞 ,而且可以使 HLA 不相 合的供者淋巴细胞经过基因修饰 ,同样能够达到以 上效果 ,从而成为免疫治疗的突破性进展。 3. 2 　免疫耐受细胞的清除 3. 2. 1 　CD4 + CD25 + T 细胞的清除 :在人的外周血 中存在 6 %的 CD4 + CD25 + 的免疫抑制 T 细胞[27 ] , 通过细胞间的直接作用可抑制 CTL 细胞的功能和 增殖 ,下调 APC 细胞共刺激分子 CD80、CD86 的表 达 ,并能够释放免疫抑制因子 ( TGF2β) 。在动物模 型中已经证实 , 通过清除免疫抑制细胞就可以明显 增加机体的抗肿瘤能力。在人体研究中也发现 ,卵 巢癌患者外周血中和非小细胞肺癌患者 TIL 细胞 中 ,免疫抑制细胞的比例明显增高[28 ] ,应用抗 CD25 抗体可明显降低外周血中免疫抑制细胞的数量 ,明 显增加抗肿瘤免疫反应的强度 ,是今后提高过继免 疫治疗效果的策略之一。 3. 2. 2 　不成熟髓样细胞的清除 :在机体内还有一种 免疫耐受细胞 ,称为不成熟髓样细胞 (immature my2 eloid cells , ImC) ,该细胞来源于造血前体细胞 ,但 不能顺利分化成 DC 样细胞 ,目前已有研究发现 ImC 细胞在肿瘤患者体内要比正常人多 5 倍以上 , 在细胞培养中可观察到 ImC 细胞能够明显抑制特 异性 T 淋巴细胞增殖[29 ] 。目前克服这种免疫耐受 的机制主要是应用全反式维甲酸使这些细胞进一步 分化为 DC 而降低其免疫抑制作用。 3. 2. 3 　非清髓性化疗 :此外在效应细胞进行输注之 前 ,应用非清髓性化疗进行淋巴细胞清除术 ,可明显 增加过继免疫治疗的效果 ,这在动物实验和临床试 验中已得到证实。进行淋巴细胞的清除 ,能够为输 注的效应淋巴细胞提供增殖空间 ,更重要的是能够 清除免疫抑制的细胞 ,重新建立 T 亚群的稳态平 衡 ,以及消除其他一些免疫耐受的机制[30 ] 。 4 　结语 随着分子生物学、免疫学技术的不断进步 ,人们 对肿瘤免疫反应和免疫耐受机制的了解不断深入 , 新的肿瘤抗原不断被发现 ,体外筛选和扩增特异性 淋巴细胞以及克服免疫耐受的问题得到进一步解 决。这些成果有待于应用到临床最佳的选择 , 以进一步提高抗肿瘤免疫反应的临床疗效。 参 　考 　文 　献 1 　Jager E , Jager D , Knuth A . 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