77RP-HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量

中澡材 1ouma1ofChineseMedicinalMaterials 第30卷第3期2007年3月 ·361· 摇匀，进样20闪，进样3次，以三次测定结果的平均 值作为含量测定值。结果样品平均含量为98.2% (RSD二1.08%)。本实验得到纯度较高的大黄素甲 醚。 3 讨论 本品经用巧%HZSO;二周时间水解后较完全， 然后提取二次，提取也较完全。但分离的方法笔者 曾经试用过几种不同的方法，分别用pH梯度萃取- 薄层色谱分离一薄层色谱一反复重结晶;pH梯度萃取- 薄层色谱分离一柱层分离一薄层色谱一反复重结晶及 pH梯度萃取一柱层分离一薄层色谱一柱层分离一反复重 结晶等分离方法，前两种方法分离经以薄层板跟踪 检测，效果不如后者。故利用本法分离效果较佳。 但柱层析时柱体温度较高，有柱体裂开的现象。 (20()6一08一07收稿) RP一HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量 赵晓莉，狄留庆，单进军 (南京中医药大学中医药研究院，江苏南京210029) 摘要 目的:采用HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量。方法:用zoRBAx sB一cl。(250mm x4.6mm，5 卿);以乙睛刁.1%磷酸溶液(40:60)为流动相;检测波长228nm;流速1.OlnFmin;柱温30℃。结果:丁基苯酞在 浓度16.4卜合产耐一262.4林扩nil范围内呈良好的线性关系(r二0.9999)。平均回收率为98.20%，RSD为1.14%。 测得络通胶囊中丁基苯酞的含量分别为1.Zlm岁9、1.18m岁9、1.19m岁9。结论:本方法简便，准确，重复性好，可 用于络通胶囊中丁基苯酞的含量测定。 关键词 络通胶囊;丁基苯酞;RP一HPLC 中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:100154(2oo7)03刁361刁2 络通胶囊是由金银花、当归、黄蔑、甘草等几味 药组成的复方制剂，具有养阴清热、活血化疲的功 效，用于治疗血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、脑 血栓形成及其后遗症等。丁基苯酞(NBP)是当归的 主要活性成分之一，药理研究明，丁基苯酞具有调 节脑缺血状态下脑能量代谢〔’〕、增加缺血区脑血流 量〔2〕、缩小脑梗塞面积、减轻脑水肿〔’〕、改善脑缺血 后神经功能缺损症状的作用。建立本制剂中丁基苯 酞的含量测定方法有助于控制制剂的质量。因此本 实验参考相关文献t4)，建立了络通胶囊中丁基苯酞 HPLC法测定方法，所测丁基苯酞色谱峰与相邻色 谱峰得到良好的分离，该法简单、准确、重复性好。 ， 仪器与试药 1.1 仪器 Agilenilloo液相色谱仪，二极管阵列 检测器(DAD);METr比RAE240电子天平;HH石数 显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司);J岱一50 超声波清洗器(上海安谱科学仪器有限公司)。 ，.2 试药与试剂 丁基苯酞对照品(中国医学科 学院药物研究所提供，经HPLC检测，纯度在98% 以上);络通胶囊(江苏南星药业有限公司生产，批 号为051106、051112、051120);乙睛(美国Tedia公 司，色谱纯);重蒸去离子水(实验室制备);其余试 剂均为纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAXSB一C;:(250mm x4.6mm，5林m);流动相:乙睛刁.1%磷酸溶液 (如:60);检测波长:228nm;流速:1.oml/min;柱 温:30℃。理论板数:按丁基苯酞峰计算不低于 3(众)。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取丁基苯酞对照 品32.80mg，置100耐棕色容量瓶中，加乙睛稀释 至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取络通胶囊10粒，倾出 内容物，研匀，取19，精密称定，置50 nil具塞锥形 瓶中，加乙醚30ml以封口膜封口后，超声提取两 次，每次15min，合并乙醚液，置通风厨中常温挥干 乙醚，残渣用乙睛溶解并完全转移至25nil容量瓶 中，加乙睛至刻度，摇匀，过0.45林m微孔滤膜，备 墓金项目:国家863计划“通塞脉微丸的研究与开发(2003AA223247)”;江苏省科技厅自然基金项目(BK2005150) 作者简介:赵晓莉(1976一)，女，江苏南京人，南京中医药大学2(X)3级中药学博士研究生。 ·362· 中澡材 Joum己otchineseMe山cin目Mated幽 第30卷第3期2(X)7年3月 用。 2.4 阴性对照试验 按络通胶囊生产工艺制备缺 当归的阴性制剂，取此阴性制剂适量，按2.3项下方 法制得阴性供试品溶液。分别精密吸取对照品溶 液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10闪，注人色谱 仪，记录色谱图。在本试验条件下，络通胶囊中其他 成分对丁基苯酞的含量测定无干扰。 2，5 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液 0.5、1.0、2.0、4，0、8.oml分别置于10ml容量瓶 中，加乙睛稀释至刻度，摇匀，制得浓度分别为16.4 卜岁ml，32.8林岁ml，65.6卜岁Inl，131.2林扩Inl， 262.4卜盯ml的对照品溶液系列，分别进样2次，每 次10闪，测定峰面积，以对照品浓度x(林岁ml)为 横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制曲线，得回归 方程:Y二13.737X+6.049，r二0.9999。表明丁基 苯酞浓度在0.164卜『nil一311.0林留ml范围内与 峰面积呈良好的线性关系。 2.6 精密度试验 精密吸取浓度为65.6林扩耐 的对照品溶液10闪，连续进样6次，记录峰面积并 计算其RSD为1.47%(n=6)，表明仪器精密度良 好。 2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 林1，分别于0.4、8、12、16、20、24h测定，结果丁基苯 酞的峰面积RSD二1.53%(n二7)，表明供试品溶液 在室温条件下24h内稳定。 2.8 重复性试验 取同一批号络通胶囊样品5 份，按样品含量测定项下依法平行操作，测定每份样 品中丁基苯酞量，RSD二2.12%(n=5)。 表1 络通胶囊中丁基苯酞加样回收率试验结果 项下方法操作，依法测定，计算得丁基苯酞平均回收 率95.20%，Rsn为1.14%(n=5)，结果见表1。 2.10 样品含量刚定 按2.3项下操作，分别制得 供试品溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 ro讨，按上述色谱条件测定丁基苯酞的峰面积，以 外标法计算丁基苯酞的含量，结果见表2。 表2 络通胶囊中丁基苯酞的含t《n=5) 样品批号 丁基苯酞含量(m留9) RsD(%) 051106 051112 051120 1.21 1.18 1.19 1.82 1.54 1.63 Added /协9 Conients /协9 Detected /卜9 Recovery /% (x) /吸， RSD % 613.0 以)2.8 1214.3 99.76 605.4 以抖.3 1207.8 98. 1209 .4 98- 98.20 1.14 ?? ， ? ? ，?? ， ? ? ??? ??? 日抖.7 12(X) .2 97. 6036 11989 97. 3 讨论 3.， 检侧波长与流动相的选择 以流动相配制一 定浓度的NBP溶液，在200一400nm波长内扫描， 结果表明，NBP在228nm和274nm处有最大吸收， 为提高NBP的检测灵敏度，选择响应值较强的228 nm作为检测波长。由于络通胶囊是一中药复方制 剂，所含化学成分复杂，我们试用了甲醇一水、甲醇- 酸水、乙睛一酸水等多种流动相体系进行试验，在乙 睛刁.1%磷酸水溶液(60:40)时，丁基苯酞和相邻色 谱峰分离度大于1.5，故最终选定此流动相条件。 3.2 样品提取条件的考察 在络通胶囊的制备工 艺中，当归采用超临界CO:萃取制得提取物，加人 到其余药材的提取物中共同制成微丸，充填胶囊。 考虑到丁基苯酞的脂溶性，试验比较了70%乙醇、 95%乙醇、乙醚三种不同溶剂超声提取，结果以乙醚 为溶剂丁基苯酞的提取得率最高，因此采用乙醚超 声提取的方法制备供试品溶液。 参 考 文 献 〔1] 冯亦璞，胡盾，张丽英.丁基苯酞对小鼠全脑缺血的保 护作用.药学学报，1995，30:741. 〔2〕徐皓亮，冯亦璞.丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜 微循环障碍的影响.药学学报，1999，34(3):172一175. 【31 徐皓亮，冯亦璞.丁基苯酞对大鼠血栓形成及血小板功 能的影响.药学学报，2的1，36(5):329一33· 【41赵春顺，崔升森，刘晓红，等.3一正丁基苯酚含量及有关 物质测定的方法学研究.沈阳药科大学学报，20(只，24 (1):2427. (2006一09一20收稿) ? ? ? ? ????? … ? ? ?? ?? ? ? ? ?? ? ? ? ， ? ? ， ? ? ? ? ? 2.9 加样回收率试验 取同一批号络通胶囊内容 物0。59，共5份，精密称定，每份分别加人丁基苯酞 对照品溶液(122.6卜留ml)sml，按供试品溶液制备