用检测甲胎蛋白的定性ELISA试剂作定量测定的尝试

每医学 检验 杂志 2002年 第 l7卷第 4期 S 或 HBe Ab(+)HBc Ab(+)者共 21例 ，其中有 1 例 HBeAb(+)HBcAb(+)者 血液 和 唾液 HBV DNA均阳性 ，唾液 HBV DNA含量为 6．61。此例 感染者是 否是 HBsAg含量低于下限或由于 “前带现象”未能检出，或者存在其它原因，有待于 进一步观察 参 考 文 献 [1 j NopD~mpanth S，Sathirapongsasuti N，Chongsrisawat V，et a1．Detection of HBsAg and HBV DNA in serum and．saliva of HBV carriers[J]．F-．~utheast Asian J Trop Med Public Heath．2000．31：419—21． [2 Zhevac hevsky NG，Nomokonova NY， BekIemishev AB．et a1．Dynamic study of HBsAg and HBeAg in sali— va samples from patients with hepatitis B infection：diag— nostic and epidemiological significance[J]．J Med Virol， 2000．61：433—8． (收稿 日期 ：2001．12-19) (本文编辑 ：范基农 ) ， ， i — < 0 — —；c一—0 ， —； 一—ie 一 一 ， — ／ ， ，= ，： ∞ 气 文章编号：l()()l一2087(2002)04—0254—03 中图分类号：R392．6 文献标识码：A 用检测 甲胎蛋白的定性 ELISA试剂作定量测定的尝试 章秀兰 (上海市徐汇区永嘉路地段医院，上海 200031) 摘要：目的 尝试将酶标定性检测 甲胎蛋 白(AFP)技术改为定量测定 ：方法 以 Murax—Coda系统测定 的 病人血清结果为准 ，在原定性 系统上建立 AFP定量 测定 的校准 曲线 ；确定在该系统上的定量报 告的最小 限值 (功能灵敏度 )；与原 Murax-Cc~a系统作方法学比较 ，观察准确度 。结果 建立的定量测定系统的可报告定量低 限为 20／xg／L；可报告范 围为 20～300／xg／L；与原定量系统 的方法学比较 =40，P=1．139X一6．85，r=0．976。 结论 改 良后的原定性 AFP酶标检测系统 ，可以对含量在 20～300 t~g／L的 AFP结 果作定量报告 ，有利于临床 对病人的随访监视 。 关键词：甲胎蛋 白；定性 ；定量 甲胎蛋白(AFP)检测是用于原发性肝癌等疾 病诊断的主要检测项 目，但许多基层医院限于条 件，仍以定性检测为主。临床认为仅用定性指标无 法对肝癌的术后或治疗后 的随访监视发挥作用。 为此 ，根据我院的实验条件，尝试在定性检测的基 础上改良为报告定量结果。实验说明，可以满足基 层医院临床需要。 材料 和方法 一 、材料 1．仪器与试剂 Bio—Rad 550酶标仪。Murax AFP定量试剂盒 (Wellcome公司)。BioRad—Coda 自动酶标检测系统 (BioRad公司，为方便说明，以 下内容中凡是用这样的系统检测的结果称为 Mu— rax—Coda系统结果 )。AFP定性试剂盒(上海捷门 生物技术公司)。 2，AFP阳性血清 由上海市东方肝胆外科医 院检验科赠送。共得到阳性血清 40份 ，每份血清 分装小管 ，低温保存。临用前，置室温融溶 、平衡， 温和混匀后使用 。使用后血清弃去 ，不重复使用。 3．15份健康人混合血清，分装低温保存，用 法同上。 二 、方法 1，以 Murax试剂和 Bio—Rad的 Coda系统为 准确度的依据。用该系统对高 AFP的阳性混合血 清作多次测定 ，取 AFP均值。也对健康人混合血 清做多次测定，确认检测不出内含 AFP。 2，取 1份经 Murax—Coda系统测得 AFP为 400／~g／L的血清，用上述健康人混合血清按不同 比例 混合 ，形成 AFP预期 值 为 10、20、50、100、 200、300、400／~g／L的系列血清 。用捷门定性测定 试剂盒，参照说明，对每份血清做 4次重复测定 ， 在 Bio—Rad 550酶标仪上读取 A450 值，在坐标纸 上绘制曲线 维普资讯 http://www.cqvip.com 海医学 检验 杂志 2002年 第 17卷第 4期 Shangh I of Med Lab sci 2002，V( 17 No 4 3．在 15 d内，每天对上述的系列血清作 1次 定性试剂盒的检测 ，读取 A 值。由这些数据确定 可定量报告结果的低限。 4．对 40份 AFP血清同时由 Murax—Coda系 统和捷 门试剂盒一Murax—Coda校准 系统 (即：捷 门 试剂盒和检测方法；校准品为经 Murax—Coda系统 测定的定值血清 ；从校准曲线查阅结果。以下简称 为捷门一Murax系统 )对 比测定。测定结果作回归 分析 结 果 一 、绘制校准曲线的吸光度和对应 AFP预期 值见 1。 由表 1可知，减去空白AFP管的吸光度后，曲 线在 10--300 t~g／L线性较好 ；400~tg／L处吸光度 读数 已偏 高，300～400 t．~g／I 范围内曲线过 于平 坦 ，定量误差大 ，不宜使用。 表 l 校准曲线的吸光度和 AFP预期值 由表 2说明，AFP为 10~tg／L的天问重复 CV (％)达 26．4％，AFP为 20 g／L的 CV(％)为 19．4％，正好 略小于 20％。按照功能灵敏度的定 义一 ，可以定量报告结果的低限处的天间 CV(％) 为 20％?因此 ，建立的捷门一Murax的定量系统 ，可 定量报告 AFP低限为 20 t~g／L。与校准曲线表现 相结合 ，该系统的可报告范围为 20～300 t~g／L。 三 、捷门．Murax—Coda校准系统与 Murax—Coda 系统的相关性 对 40份 AFP含量在 20～300 t~g／L的病人血 清用 Murax—Coda和捷门一Murax系统同时做对 比。 结果 以直线 回归处理。Murax—Coda系统结果 为 X；捷门一Murax系统结果为 Y。”=40，回归式为 ^ Y = 1．139X 一6．85．r=0．976． 讨 论 一 、建立定量 的检测方法应具有基本条件- ： 1．不论分析物浓度和检测信号间的关系是线性或 非线性的，但是分析物和检测信号问应有合适的比 例大小：具有线性关系的按线性方式处理数据 ；属 于非线性的(如本实验结果)，可 以绘制曲线，从曲 线上查阅结果 2．建立分析物浓度和检测信号问 的关系时，最好使用真实病人样 品绘制校准曲线 ， 才可以克服真实样品和校准品间的基体差异l_3一。 3．应使用国际上认可的检测系统作为准确度的溯 源对象，这样才能使检测系统得到的结果与其他系 统具可比性 4．应对如 AFP等肿瘤标志物的测定 方法确定可报告的低限，使测定结果可靠。5．检测 系统对病人样品的测定结果应与认可的检测 系统 的测定结果具有可 比性 。6．测定结果的重复性属 可接受。新建立的捷门一Murax系统按照这些要求 进行了探索 二 、捷 门公司 AFP定性试剂盒在 日常使用 中 检测结果稳定 ，重复性可接受 ，天间重复精密度 良 好(见表 2)，这是改 良为定量测定的基础。为了使 测定结果可靠 ，以 Murax—Coda自动酶标检测系统 为检测标准 ，它对实际病人样品的 AFP定量结果 的准 确 度 可溯 源至 国际认 可 的世 界卫 生组 织 (WHO)标准。因此 ，以该系统测定 的病人血清为 新建立的定量方法的“标准”，这将是最好的校准 品 ，也使今后的测定结果可溯源至 WHO标准。使 用真实病人血清进行曲线的绘制 ，并和天问重复性 一 起确定了捷门一Murax系统定量报告的低限和实 际使用的可报告范 围 又将该系统对实际病人样 品的测定结果与 Murax—Coda系统对比，结果良好 。 实验的初步评估说 明原定性试剂可以改作定量测 维普资讯 http://www.cqvip.com · 256 · 上海 医学 检验杂 志 2002年第 l7卷第 4期 Sha~ha|I()f Med Lab Sci 2002，Vo【l7．No 4 定用一 ’： 三 、从实验过程的实践中，体会到：1．必须严格 注意操作中的每一个步骤，尤其是手工操作。2．坚 持每次操作中作 6个水平的“校准血清”，每个水平 作双份测定=低于 20 ptg／L或高于 300 ptg／L的病 人样品均不可报告定量结果 ，以保证结果的可靠。 对高于300 l*g／L的样品可用健康人混合血清作适 当稀释后重新测定。3．每 6个月与 Coda系统做一 次对比，如发现明显偏倚 ，应对低温保存的“校准血 清”用 Murax—Coda系统重新测定，以保持结果的可 比性 ： 致谢 ：本实验承蒙第二军 医大学东方肝胆 医院实验诊 断科的帮助 ，特致谢 ! 参 考 文 献 1 StameyTA．Lower linfits of detection，biological detec !ion limits，functional sensitivity，or residual cancer de 、1 ，0 ； 一— ∞ ； ； ‘ ·书 讯 · tection'?Sensitivity reports on prostate—specific antigen a~says mislead clinicians[J]．Clin Chem，1996，42： 849～852． 1 2 l U．S． I)epartment of Health and Human Services． Medicare． Medicaid and CLIA programs：Regulations implementing the Clinical Laboratory Improvement A— mendments of 1988(cI IA)．Final role[R]．Fed Reg— ist，l992，57：7002—7186． 【3 l National Conunittee for Clinical La boratory Standards． Evaluation of Matrix Effects．Approved Guideline[S]． CCLS．2000．EPI4一A．W ayne PA，USA． [4] 郭 玮 ，潘柏申．血清载脂蛋白 A-1和 B测定 的标准 化进展 [J]．上海医学检验杂志，1999，14：54—58． [5] 潘柏申，许 俊 ，严国昌，等．血清载脂 蛋白免疫透射 比浊测定试剂盒评价 [J]．上海医学 检验 杂志 ，1999， l4：292—294 (收稿 日期 ：2002—03一l5) · 、 (本文编辑 ：范基农 ) 《现代医学检验仪器导论》出版 由上海市临床检验中心陶义训，吴文俊主编的《现代医学检验仪器导论》一书已由上海市科学技术 出版社近期出版发 行=全书共分五篇二十八章，分别介绍临床化学 、临床血液学和尿液、临床微生物学 和临床分子生物学等五大医学检验领 域的各类分析仪器，特别是 自动化 、智能化检验仪器的发展概况 、基本结构 、工作原理和应用展望。同时还摘要介绍了具有 一 定代表性 、先进性 的各种医学检验仪器的性能特点 、技术指标等有关资料。 该书约 45万字 ，每本定价 45元。现本 刊编辑部有少量该书供应。本市读者可直接前来购买，外地读者可 由邮局汇款 至上海市泰安路 120弄 3号《上海医学检验杂志》编辑部收 (邮编 ：200052)。并请注明购书者姓名 和详细地址 ，款到即邮 寄，不另收包装、邮寄费。 ，；0，： ； ，； ， = 一∞ ∞ C，； 一 ； -， 气 ·简讯· 全国第五届临床微生物学术会议召开 会议由中华医学会微生物学与免疫学分会临床微生物学组于 2001年 l2月 l0～12日在天津 召开。陈民钧 、倪语星教 授主持会议，邵济钧教授致开幕词，李春海教授、天津市卫生局张愈局长、林立军副局长等先后在大会上讲话。来自全国 17 个省、市及部队的220位代表出席会议。会议特邀 10余位专家围绕病原微生物的鉴定、耐药监测、耐药等问题进行学 术交流 本次会议的成功 召开将对今后微生物学科的发展起到推动作用 。会议对微生物学组进行 了换届改选 ，陈民钧教授任 新一届学组主任委员倪语星 、戴立人 、胡必杰等教授任副主任委员。第六届全国临床微生物学学术会议初步于 2004 年 5月 中旬在北京召开。 维普资讯 http://www.cqvip.com