实验六 胰蛋白酶活力的测定null实验六 胰蛋白酶活力的测定
实验六 胰蛋白酶活力的测定
(先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度)
一、实验目的
二、实验原理
三、器材仪器和主要试剂
四、实验操作
五、思考题一、实验目的一、实验目的掌握定量测定蛋白酶的活性的方法,了解本 实验的酶、底物和生成物的相关性质,以及本反应的环境条件。
进一步理解酶活力和比活力的概念
巩固比色法测定物质含量的基础,掌握721型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法二、实验原理二、实验原理1.胰蛋白酶是一种水解酶,它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。
2.所生成的酪...
null实验六 胰蛋白酶活力的测定
实验六 胰蛋白酶活力的测定
(先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度)
一、实验目的
二、实验原理
三、器材仪器和主要试剂
四、实验操作
五、思考题一、实验目的一、实验目的掌握定量测定蛋白酶的活性的方法,了解本 实验的酶、底物和生成物的相关性质,以及本反应的环境条件。
进一步理解酶活力和比活力的概念
巩固比色法测定物质含量的基础,掌握721型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制
曲线的方法二、实验原理二、实验原理1.胰蛋白酶是一种水解酶,它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。
2.所生成的酪氨酸能与酚试剂反应成蓝色物质.酚试剂又名Folin试剂,是磷钨酸和磷钼酸的混合物,它在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物,680nm)
3.用分光光度计可以定量的比较颜色的深浅,从而推导出酪氨酸的量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。
4.蛋白酶活力单位定义:在40C,pH7.5的条件下,水解酪蛋白每分钟产生1 g酪氨酸为1U。三、器材仪器和主要试剂 三、器材仪器和主要试剂 721 型分光光度计
Folin 试剂甲液,乙液
0.5% 酪蛋白
100 μ g/mL Tyr 溶液 四、实验操作四、实验操作1、酪氨酸标准曲线的制作
以酪氨酸浓度μg/ml数为横坐标, A680nm为纵坐标,作出标准曲线。 2、蛋白酶活力的测定2、蛋白酶活力的测定
胰酶活力单位定义:胰酶活力单位定义:规定在 40 ℃ , pH7.5 的条件下,水解酪蛋白每分钟产生酪氨酸 1 微克为一个酶活力单位。1g 蛋白酶在 37 ℃ , pH7.5 的条件下所具备的总活力单位为:
( A 样 — A 对 )× K × V/t × N
A 样 :样品液光吸收值;
A 对 :对照液光吸收值;
K :标准曲线上光吸收为 1 时的酪氨酸微克数;
t :酶促反应的时间(分),本实验 t =10 ;
V :酶促反应管的总体积(毫升数),本实验 V =6 ;
N :本次实验酶液的稀释倍数:2000
五、思考题五、思考题酶的试验为何设对照又要设空白
稀释的酶溶液是否可长期使用?说明原因。
如何保证本实验测定数据的准确性?
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