GBT 14926.58-2008 实验动物 传染性犬肝炎病毒检测方法

ICS65．020．30 B44 缮雪 中华人民共和国国家 GB／T14926．58—2008 代替GB／T14926．58—2001 实验动物 传染性犬肝炎病毒检测方法 2008-12-03发布 LaboratoryanimallMethodforexaminationof Infectiouscaninehepatitisvirus 2009-03-01实施 宰瞀粥鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1” 刖 再 GB／T14926．58—2008 GB／T14926((实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法。 本部分自实施之日起代替GB／T14926．58—200l《实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法》。 本部分与GB／T14926．58—2001相比主要技术差异如下： a)传染性犬肝炎是犬的主要烈性传染病之一，在我国犬群中广泛流行，是基础级犬和SPF犬的 必检项目； b)“6结果判定”中增加了“6．3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率一(被检动物 抗体阳性数／被检动物总数)×lOO％。基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70％以上可判 为该犬群免疫合格”内容。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。 本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草。 本部分主要起草人：田克恭、贺争鸣、范薇。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： ——一GB／T14926．582001。 1范围 GB／T14926．58—2008 实验动物 传染性犬肝炎病毒检测方法 GB／T14926的本部分规定了传染性犬肝炎病毒(ICHV)的检测方法、试剂等。 本部分适用于犬ICHV的检测。 2性引用文件 下列文件中的条款通过GB／T14926的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB／T14926．50实验动物酶联免疫吸附试验 GB／T14926．54实验动物血凝抑制试验 3原理 根据免疫学原理，采用ICHV抗原检测犬血清中ICHV抗体；或根据ICttV在一定的条件下，能凝 集人“O”型红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中ICHV抗体。 4主要试剂和器材 4．1试剂 4．1．1ELISA抗原 4．1．1．1特异性抗原 用ICHV感染MDCK细胞，接种3d～4d后，当病变达+++～++++(一阴性；+轻；++中； +++重；++++严重，下同)时收获。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再 经超速离心浓缩后制成ELISA抗原。 4．1．1．2正常抗原 MDCK细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。 4．1．2血凝素 ICHV接种MDCK细胞，培养3d～4d，当病变达+++～++++时收获培养物。冻融三次或 超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液分装后低温保存。 4．1．3阳性血清 ICHV实验感染或自然感染的犬血清。 4．1．4阴性血清 无ICHV感染、未经免疫的犬血清。 4．1．5酶结合物 辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬IgO抗体。 4．1．6人“0”型红细胞。 4．2器材 4．2．1酶标仪。 4．2．237℃培养箱或水浴箱。 】 GB／T14926．58—2008 5检测方法 5．1采用ELISA方法(见GB／T14926．50)进行血清学检测。 5．2采用HAl方法(见GB／T14926．54)进行血清学检测。 6结果判定 6．1基础级犬，接种疫苗后，经ELISA检测抗体效价大于等于1：160，或HAl检测抗体效价大于等 于1：16判为合格。 6．2 SPF级犬，不应进行疫苗接种，对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试，如为阳性则 判为阳性。 6．3基础级犬群体免疫抗体合格率： 免疫抗体合格率一(被检动物抗体阳性数／被检动物总数)×100％ 基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70％以上可判为该犬群免疫合格。 7结果 根据判定结果，作出报告。