一例母猪混合感染猪蓝耳病病毒和猪丹毒杆菌的实验室诊断

栏 目协办 一 例母猪混合感染 猪蓝耳病病毒和猪丹毒杆菌 的实验室诊断 李 波，李润成，肖博仁，余兴龙 (湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：本试验对一猪场疫病进行了实验室诊断以及分离细菌的药物敏感性检测，结果表明该场生猪合并感染了 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (猪蓝耳病病毒)和猪丹毒杆菌。该丹毒杆菌对青霉素及几种头孢 喹诺酮类药物敏感 而对卡那霉素、5．-I米卡星、新霉素等不敏感。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征，猪丹毒杆菌，药物敏感性 2010年 7月湖南省某猪场配种舍母 猪发病，体温升至 40℃以上，全身发 红、呼吸加快、站立困难、急性死亡， 4d内死亡母猪 l2头。采用多西环素治 疗无效。眼观解剖病变可见弥散性间质 性肺炎，肺呈瘦肉样变。脾脏有肿大出 血、边缘有锯齿状变化、腹股沟淋巴结 稍肿大切面有较多渗出液，其他脏器无 明显病变。猪群免疫情况为 ：猪瘟、猪 伪狂犬疫苗、细小病毒疫苗实行跟胎免 疫 ；2008年起没有再接种过猪繁殖与呼 吸综合征病毒 (PRRSV)疫苗。根据临 床症状及解剖病变将该次疫病诊断为疑 似 pRRSV感染并继发了其他细菌侵入 机体。笔者从 3头发病高热期母猪采集 血液并于 1头母猪解剖后采集实质脏器 进行了实验室诊断。现将结果报告如下： 1 1．1 主要试剂 Trizol Reagent购自Invitrogen公 司 ：Frist Strand Synthesis Kit购 自 TOYOBO公司 ：PCR试剂购 自北京天 根生化科技有限公司 ；厌氧发生袋购 自 南京一基生化科技有限公司。 1．2 待检材料 来 自湖南省某猪场的母猪血液以及 实质脏器。 2 2．1 PRRSV的RT-PCR检测 2．1．1 引物合成 参照文献 ⋯合成扩增PRRSV基因 的引物 ，引物序列如下 ： Fb：CGCGTAGAACTGTGACAA CAACG Rp：GACARGGAGCTGCTTGAT GACAC 引物扩 增特异性 目的片段长度为 2l8 bp。 2．1．2样品总 RNA的提取 取 3头发病母猪血液及 1头发病母 猪的肺脏、淋巴结 50～100mg分别按 常规方法提取总 RNA。 基金项 目：国家科技支撑 (2006BAD06A00) 通讯作者 ：余兴龙 作者简介：李波，男，(1985一)，主要从事病原分子生物学与免疫学研究。 90 猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 201 1年 第3期 2．1．3 反转录扩增 cDNA 将提取的RNA作为模板配置反转 录体系，用 PCR仪进行反转录。具体 操作按反转录试剂盒说明进行。 2．1．4 PCR扩增 以反转录扩增的 cDNA为模板进行 PCR扩增。PCR按常规方法进行，反 应退火温度为 58℃，PCR反应结束后 取扩增产物 6 L进行琼脂糖凝胶电泳 鉴定。 2．2 细菌感染的诊断及药物敏感性 检测 2．2．1 细菌的分离培养 用接种环无菌钩取脾、肝、淋巴结 以及肺脏组织接种普通营养琼脂培养 基，每一种脏器接种 2个平板 ，1个平 板放到 37℃温箱进行有氧培养，1个平 板放于厌氧罐内，并于罐内放好厌氧发 生袋，然后再将厌氧罐密封放于 37℃ 温箱进行厌氧培养，48 h后将长出的细 菌进行涂片，革兰氏染色镜检。 2．2．2 细菌的 PCR鉴定 1)引物 合成。参 照文 献 合 成 16S rRNA的 PCR扩增引物，引物扩 增特异性片段长度为370 bp。引物送上 论猪病的多发原因和应对策略 汪令四’，王德智 (1．安徽省九成监狱养猪场，安徽 九成 246220；2．阜阳市动物卫生监督所，安徽 阜阳 236011) 近几年来猪病频繁暴发，且多种病 交替发生。特别是 自2006年以来，以“高 致病性蓝耳病”为新发的，诸多疾病混 感或继感而暴发所谓 “蓝耳病”、“高热 病”，更是在全国掀起轩然大波，养猪 业蒙受巨大损失，广大养殖户叫苦不迭， 生猪行情波动明显，给人民生活带来巨 大影响。人们痛定思痛之余，当今的猪 为何如此难养，疾病为何如此之多且难 冶，则萦绕在脑海。我从事养猪业近 30 年，纵观历史进程，感触颇深 ：越来越 高档的规模化养猪条件，越来越娇贵的 “洋品种”，越来越严格要求的消毒隔离 条件及，纷繁复杂的生物学防范， 与猪的生物学特性及原本生存环境，形 成巨大的反差和异样，逐渐沦为 “猪将 不猪”的情形。本文所阐述观点，或许 给养猪业的高层决策领导者不无一些有 益的启示 1 猪生活习性的改变 猪具有强大的野外生存能力，和近 l m 的活动范围生存条件的矛盾，使 猪的生物学多种特性受到限制，现在的 “猪”不是原本的猪。 原始的猪采食主要是靠嘴的拱掘觅 食，吻突、四肢、腰荐得以锻炼，肌肉 发达 ；为逃避天敌，奔跑速度加快，辨 别方向能力增强，群居团结一致保护性 增强，寒冷天气努力寻找自己的避风港 口，洞穴、缝隙，加上 自身简单开凿， 就成了临时的 “家”；酷热夏天，寻找 阴凉树荫底下，山的背面遮阳处，于这 些凉爽处营造自己的 “避暑山庄”；到 了发情季节 (春、秋季)头领公猪取得 优先交配权，这是选种选配的自身选择， 繁衍着一代一代同类个体，保证了种群 的稳定遗传性。荒芜季节，人类耕种的 果实也偶尔成为它们一顿饱餐，但主要 是以自给 自足为主。恶劣的野外生存条 件，猪更加茁壮健康。 在长期进化中，由野猪驯化为家 猪，剥夺其本性自由，人类驯化动物都 是野蛮暴力手段如伯乐相马 “⋯⋯马之 到厩，绳之僵之，修冶剪之，蹄之掌之， 饥之饿之，训之练之，奔之跑之，呵之 斥之，然后奔之赏之⋯⋯”为人类所用， 使马失去原有的本性 ，而 《八骏马图》 没有这些束缚，自由狂欢奔跑，“伯乐 是戗害人间动物的罪魁祸首”。人们在 驯化猪的过程中，总是按人类要求，最 边角处，有的与厕相连，最大化节省面 积，最小成本建造一个猪舍，阴暗潮湿， 脏乱不堪，使猪感觉到 “我原来如此生 活着”。这种模式持续了相当长的时间。 近几年来限位栏，产床的使用，更严格 限制种猪的活动范围，引起一系列种猪 病态表现及其综合征，直接影响种猪生 产性能，缩短利用年限，这是得不偿失 的，活动范围变小，而生命在于运动， 运动量变少，生长环境恶劣，势必给机 体正常防御机能和免疫及抵抗力带来损 害，从而诱发一系列疾病，“没有不生 病的猪”，人们如是感叹!是啊，人们 把猪当作 “朋友”、“自家人”来对待， 就能创造效益 ；否则，“反正我是头猪” 有无效益随你的便。 随着日益凸显的矛盾，人类也努力 寻找，弥补这些缺陷的措施，通风降温， 防寒保暖，反复用药，注射疫苗，豪华 猪舍建筑，高营养高蛋白饲料，纯净清 洁饮水，高度隔离封闭等，称之为 “娇 生惯养”，外部环境条件创造得最高级 待遇，食物 ，生存条件接近人类，“你” 就该快快生长吧⋯⋯孰知引起一系列负 面后果。 ①与外界环境不协调，营造人工小 气候，外界小风小雨，气温变化 (应激) 即发生疾病。 ②免疫接种有时会诱感本来该猪不 存在的病原而发病，有的疫 (菌 )苗本 身就是疫源。 ③处在亚腱康，预防保健用药，抗 生素诱发细菌产生耐药性，干扰病毒药 物产生毒株变异，毒性增强，且用药量 逐渐加大，而致残留。 ④猪舍豪华是极大浪费。 ⑤长期高能量高蛋白饲料引起胃肠 功能紊乱，肝肾代谢异常，解毒排毒功 能降低或疲劳，甚至损害衰竭，继发心 血管疾病。 ⑥貌似清洁消毒饮水，其实失去了 富含矿物质、维生素的自然成分摄入和 利用，机体营养极不平衡，因为人类再 解药物的抗菌谱也同样重要。 参考文献 ⋯1 刘忠华 ．猪繁殖与呼吸综合征病毒变异 株检测、分离及病毒特性的研究 [D]．湖 南 ：湖南农业大学 ，2008． [2】李聪智，谭德明，鲁猛厚，等 ．聚合酶 92 猪业科学 SWINE1NDUffFRYSCIENCE 2011年第3期 链反应检测细菌 16S rRNA 基因fJ】．湖 南医科大学学报，1999，24(2)：136． (收稿日期 ：2011-03—02)