姜黄素通过诱导人内皮细胞产生自噬抗氧化应激损伤

中国药理通讯 2011年第二十八卷第二期 碘化N一正丁基氟哌啶醇对缺氧心肌细胞钙稳态的保护作用 肖剑锋 石刚刚 汕头大学医学院药理学教研室 汕头 515041 目的：碘化 N一正丁基氟哌啶醇 (Fz)是我们课组在氟哌啶醇的基础上进行结构改造， 得到的一个新化合物。前期研究发现F2作为L一型钙通道阻滞剂，剂量依赖地拮抗缺血再灌注 所致对大鼠心脏损伤。本研究拟在缺氧过程中观察F 对心肌细胞钙稳态 (主要是钙瞬变)的影 响，并探讨其可能的保护机制。：模拟缺氧情况下的钙瞬变图像通过共聚焦显微镜， 钙瞬变图像采用自编软件。肌质网钙储量通过喷终浓度为 15mM caffeine检测。肌质网钙泵 (SERCA2a)移除Ca +速率 Ca抖通过给予 5tLM Thapsigargin(TG)孵育 6min阻断 SERCA2a 对 Ca。 的移除，其速率VSER 一V—rCrr ，--VNCX+ MC 。细胞膜钠钙交换体移除Ca +速率通过给予 5“M Thapsigargin+5ffM Carboxyeosin(PMCA阻断剂)室温下孵育 6min求得VNCX。结果： 缺氧可以导致舒张期 [Ca ]i升高，钙瞬变幅度降低，RT25—75、DT75—25和T50延长，肌 质网钙储量减少和肌质网钙泵移除Ca。+速率降低，而F。可以剂量依赖地抑制缺氧导致的钙瞬变 的改变及肌质网钙储量减少、肌质网钙泵移除 Ca。+速率的降低。结论：缺氧可以导致心肌细胞 胞内钙稳态失衡，F。对缺氧导致的心肌细胞钙稳态失衡发挥保护作用，其保护作用可能与肌质 网钙储量和肌质网钙泵移除 Ca。+速率有关。 姜黄素通过诱导人内皮细胞产生自噬抗氧化应激损伤 韩婧 李学军 北京大学基础医学院药理系 北京 100191 目的：研究姜黄素在过氧化氢 (H Oz)诱导的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)氧化应激损 伤中的作用，并且研究其细胞可能的保护机制。结果通过 MTT法、TUNEL荧光染色法检测出 提前给予姜黄素 (1gM，5 M，lOt~M)24小时，显著提高其在200tLM Hz02诱导氧化应激损伤 中的存活率，减少凋亡细胞数量，有效减少 Caspase--3与 Caspase--9活性形式的表达，且有剂 量依赖陛。经激光共聚焦显微镜发现 5 M姜黄素在抗氧化应激损伤时可引起 HUVEC自噬。使 用蛋白质印迹及免疫共沉淀技术发现，给予5 M姜黄素可经PI3K／Akt／mTOR途径激活自噬信 号转导，并促进Beclin—l与Bc1—2解离引发自噬。进一步使用免疫荧光法观察到5 M姜黄素 可抑制氧化应激损伤过程中转录因子FoxOl的向细胞核内转位过程，抑制Sirt2表达，增加胞浆 中FoxO1的磷酸化和乙酰化修饰，进一步促进自噬体产生，达到细胞保护的作用。反之，利用 RNA干扰技术敲降 FoxO1表达，则给予 5 M姜黄素的氧化应激损伤组中自噬过程消失。 Caspase--3与Caspase--9活性形式的表达和细胞保护作用与损伤模型组无显著差异。结论：姜 26 中国药理通讯 2011年第二十八卷第二期 黄素可以通过引发 HUVEC自噬过程在氧化应激损伤条件下起到对细胞保护作用。其机制可能 与姜黄素激活自噬信号通路，促自噬起始蛋白Beclin--1从复合体中释放，抑制 FoxO1转录因子 核转位过程有关，从而抑制氧化应激所引起的内皮细胞凋亡。 人T0l1样受体 9结合 CpG ODN结构域的研究 潘夕春 郑江 第三军医大学药学院药理学教研室 重庆 400038 第三军医大学第一附属医院中心实验室 重庆 400038 目的：脓毒症的发生与单核／吞噬细胞的Toll样受体 (To11一like receptors，TI Rs)识别菌 体成分后导致多种炎症细胞因子的大量释放密切相关，因此研究 TLRs识别病原分子的结构和 功能关系，对寻找新的药物作用靶点、获得新的先导化合物进行脓毒症的防治具有重要意义。 本研究拟寻找人 TLR9识别 CpG ODN的结构域，并研究该结构域结合 CpG ODN的重要氨基酸 位点。方法：人工合成人 TLR9的亮氨酸重复序列 (1eucine--rich repeat，LRR)片段 LRR2、 5、8、l1多肽，生物传感器检测其与CpG ODN的亲和力，激光共聚焦检测 LRR多肽对CpG ODN在小鼠腹腔巨噬细胞中内化的影响，ELISA检测 LRR多肽对 CpG ODN诱导腹腔巨噬细 胞 NF一．cB活化及细胞因子释放的影响，确定与 CpG ODN结合的LRR 采用表面电荷分析初 步确定该 LRR与 CpG ODN结合的氨基酸位点，并合成突变多肽进行功能验证，最后用分子对 接技术研究人TLR9与CpG ODN相互作用细节。结果：仅LRR11与CpG ODN具有高亲和力； LRR11在体外可显著抑制 CpG ODN内化及 CpG ODN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞 NF—KB活化、 细胞因子释放；LRR11的 5个正电荷位点 R337、K338、K347、R348和 H353形成 2个正电荷 区域，5个位点突变均可降低 LRR1l与CpG ODN的结合，其中R337、K338影响最大；分子 对接表明 R337和 K338通过氢键与 CpG ODN结合，而 K347、R348和 H353虽然不直接与 CpG ODN结合，但可影响人 TLR9与 CpG ODN结合面的形状。结论：LRRll是人 TLR9结合 CpG ODN的重要结构域，5个正电荷位点尤其是 R337、K338是关键结合位点。 GK和PPAR7双靶点激动剂SHP一14抗糖尿病作用的研究 雷蕾 申竹芳 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所 北京 100050 目的：SHP一14是定向合成的化合物，离体实验表明其为GK和PPARy双靶点激动剂。本 文主要研究其作用特点和相关抗糖尿病作用。方法：离体实验测定 SHP一14对 GK活性和 PPARy转录活性的影响。细胞学实验选用人肝癌细胞 HepG2SHP—l4促葡萄糖消耗作用 和促糖原合成作用，选用小鼠胰岛NIT一1细胞测定其促胰岛素分泌作用。体内活性评价选用正 常ICR小鼠和自发性 2型糖尿病模型KKay小鼠，研究SHP一14对小鼠空腹血糖和口服葡萄糖