大孔树脂对刺葡萄籽中原花青素的纯化

第 36卷第 1期 湖南农业大学学报(自然科学版) Vol.36 No.1 2010 年 2月 Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences) Feb．2010 大孔树脂对刺葡萄籽中原花青素的纯化 王辉宪 a，马玉美 a，罗启枚 a，谢聃 a，刘东波 b， 熊兴耀 b* (湖南农业大学 a.理学院；b.园艺园林学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：运用正交试验筛选树脂，探索原花青素在所选树脂上的吸附和解吸工艺条件．结果明，所考察的 YWD-06C、YWD-09F、YWD-03K7、YWD-04B1、HPD-300、HPD-700、D-101和 DS-401树脂中，YWD-06C树 脂为葡萄籽原花青素纯化的最佳树脂；最佳吸附条件：吸附温度 20 ℃，吸附时间 6 h，溶液 pH值为 4；最佳解 吸条件：解吸液为 60%的乙醇水溶液，pH值为 4，解吸时间 6 h，解吸温度 25 ℃．通过动态试验，确定吸附速 率为 4 B/h，洗脱速率为 2 BV/h，经该工艺所得纯化物中原花青素的含量达 92.57%． 关 键 词：刺葡萄籽；原花青素；大孔树脂；纯化 中图分类号：R284.2；S663.1 文献标志码：A 文章编号：1007-1032(2010)01-0039-06 Purification of proanthocyanidins from grape seeds by macroiporous adsorption resins WANG Hui-xiana, MA Yu-meia, LUO Qi-meia, XIE Dana, LIU Dong-bob, XIONG Xing-yaob* (a.College of Sciences; b. College of Horticulture and Landscape, HNAU, Changsha 410128, China) Abstract：The technics of purification of proanthocyanidins from grape (Vitis davidii Foëx) seeds were studied. Resin was chosen by orthogonal experiment, capability of adsorption and desorption and effect factors of proanthocyanidins on resins were reviewed, the best conditions for adsorption and desorption on the chosen resin of proanthocyanidins were researched. The result were as follows: the best chosen resin was YWD-06C, the optimal adsorption conditions were: temperature, 20 ℃, adsorption time, 6 h, pH, 4；the optimal desorption conditions were: solvent 60% ethanol, pH, 4, desorption time, 6 h, temperature, 25 ℃; the adsorption speed, 4 BV/h and the desorption speed, 2 BV/h, which were established by dynamic testing. The content of proanthocyanidins after purfication reached 92.57%. Key words：grape (Vitis davidii Foëx) seeds; proanthocyanidins; macroiporous adsorption resins; purification 原花青素(procyanidins，简称 PC)是植物中广泛 存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多酚化合物， 有人将其归为生物类黄酮[1-2]，也有人将其归为缩合 鞣质[3]．这类化合物由不同数量的儿茶素或表儿茶 素结合而成，最简单的是儿茶素、表儿茶素或儿茶 素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四 聚体等直至十聚体．原花青素具有极强的抗氧化特 性，一般存在于植物的果实、种子、花和皮中，在 葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中 的含量都很丰富[4]．在原花青素各种不同聚合体中 以二聚体 B2的抗氧化能力最强．原花青素具有多种 生物活性，能防治多种疾病，具有高效、低毒、高 生物利用率等特点，在植物中的主要作用是保护植 物中易被氧化的成分，在人体内的抗氧化和清除自 由基的能力是 V-E的 50倍、V-C的 20倍[5-6]，并 且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐 射、抗突变及美容等作用[7]．中国葡萄资源丰富， 每年用于酿造酒和其他饮料的鲜葡萄超过 10万 t， 每年生产葡萄酒后的废渣中就有(400~600)万 kg的 葡萄籽[8]．葡萄籽中含有大量的原花青素，因此充 收稿日期：2009-10-09 基金项目：国家科技支撑计划项目(2006BAI06A20-050) 作者简介：王辉宪(1961—)，女(白族)，湖南省张家界市人，教授，主要从事天然药物化学研究；*通讯作者，xiongxy@hunau.net 40 湖南农业大学学报(自然科学版) 2010年 2月 分利用好酿酒后的葡萄籽资源，不仅物尽其用，而 且还会带来巨大的经济效益．笔者研究大孔树脂分 离纯化葡萄籽原花青素的方法和工艺，旨在为刺葡 萄的综合利用提供理论依据． 1 材料和方法 1.1 材料、仪器与试剂 以湖南怀化市芷江地区出产的高山刺葡萄籽 为试材；原花青素B2标准品购自SEGMA公司；原 花青素标准品(≥95%)购自天津市尖峰天然产物研 究开发有限公司(探索试验条件所用原花青素为 80%的低聚原花青素产品)；8种大孔树脂(表1)均为 乳白色不透明球状颗粒，购自沧州远威化工有限公 司和沧州宝恩化工有限公司． 表1 8种树脂的性能参数 Table 1 Capability parameter of 8 macroporous resins 树脂型号 比表面积/(m2·g－1) 平均孔径/Å 粒度/mm 极性 YWD-06C ≥250 160 0.30~1.20 极性 YWD-09F 500 120 0.30~1.20 非极性 YWD-03K7 ≥500 130 0.30~1.20 弱极性 YWD-04B1 ≥600 70 0.30~1.20 中极性 HPD-300 800~1 000 50~55 0.30~1.20 非极性 HPD-700 650~700 85~90 0.30~1.20 非极性 D-101 500~550 90~100 0.25~0.84 弱极性 DS-401 480~520 130~140 0.30~1.25 弱极性 主要仪器为组合恒温磁力搅拌器、RE-52AA旋 转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、SHB-Ⅲ循环水式 多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)、DLSB-5/10 型低温冷却液循环泵(郑州长城科工贸有限公司)、 D2-2BC型真空干燥箱(天津泰斯特仪器有限公司)、 ES-1100电子天平(长沙湘平科技发展有限公司)、 VIS-7220紫外分光光度计(北京瑞利分析仪器厂)和 玻璃层析柱． 主要试剂乙醇(95%)、乙酸乙酯、正丁醇、浓 盐酸、NH4Fe(SO4)2、NaCl均为分析纯；甲醇为色 谱纯． 1.2 方 法 1.2.1 葡萄籽中原花青素的提取与初步分离 将 1 kg刺葡萄籽粉碎，用超临界 CO2法提取葡 萄籽油脱脂[9-10]后，用 5%NaCl 水溶液以 1∶5 的 料液比搅拌 1 h去蛋白质，然后进行原花青素的提 取[11]．提取液为 70%的乙醇溶液，料液比 1∶7， 温度 60 ℃，提取时间 2 h．提取 2次．将上述原花 青素的提取液减压蒸馏(45 ℃)至无醇，离心分离， 上清液用 4倍体积的乙酸乙酯分 6次萃取，合并乙 酸乙酯萃取液，减压蒸馏(≤35 ℃)至有少量沉淀析 出后置于真空干燥箱干燥(≤30 ℃)2 h，得低聚原花 青素粗产品，备用． 1.2.2 提取物中原花青素含量的测定 在文献[12-13]的基础上，对铁盐浓度和浓盐酸 -正丁醇的比例进行改进后，测定提取物中原花青素 的含量． 1.2.3 大孔树脂的预处理 取 8种型号的大孔树脂用无水乙醇浸泡 24 h， 湿法装柱，用无水乙醇冲至无浑浊，用蒸馏水洗至 无醇味．经酸、碱处理后用蒸馏水洗至中性[14-15]． 1.2.4 树脂静态吸附与解吸试验 (1) 静态吸附试验．分别准确称取 0.500 0 g预 处理过的 8种大孔树脂于锥形瓶中，分别加入 5 mL 无水乙醇使树脂充分涨溶，再分别加入 50 mL原花 青素水溶液(原花青素含量为 0.4 mg/mL)，封口，置 于 25 ℃水浴摇床中振摇 24 h，测定溶液吸光度， 检测树脂的吸附量． Qe = 0 1 1( ) /C C V W− ． Qe为树脂吸附量(mg/g)； 0C 为吸附前溶液中原 花青素的质量浓度(mg/mL)； 1C 为吸附后溶液中原 花青素的质量浓度(mg/mL)； 1V 为溶液体积(mL)； W 为树脂干重(g)． (2) 静态解吸试验．将上述充分吸附后的原花 青素水溶液进行过滤，去除水液，再将其置于锥形 瓶中，各加入 50%的乙醇水溶液 50 mL，封口，置 于 25 ℃水浴摇床中振摇 24 h，检测树脂的解吸率， 并根据静态吸附和静态解析试验确定最佳树脂． Qd＝C2V2/W； D＝Qd/Qe ． Qd为解析量(mg/g)；C2为解析液中原花青素的 质量浓度(mg/mL)； V2为解析液体积(mL)；D为解 析率． 1.2.5 吸附、解吸条件的确定 (1) 吸附条件的确定．取0.500 0 g预处理过的所 第 36卷第 1期 王辉宪等 大孔树脂对刺葡萄籽中原花青素的纯化 41 选最佳树脂，加入0.4 mg/mL原花青素水溶液50 mL， 以吸附时间、吸附温度和供试液pH值设计L16(43)正 交试验，用盐酸-正丁醇法测定吸附完全后原花青素 溶液的吸光度，考察吸附条件对树脂吸附性能的影 响，确定最佳吸附条件． (2) 解吸条件的确定．取0.500 0 g所选最佳树 脂，加入0.4 mg/mL原花青素水溶液50 mL，在相同 条件下吸附饱和后，滤去水溶液，以乙醇水溶液浓 度、pH值、洗脱时间及洗脱温度设计L16(44)正交试 验，用盐酸-正丁醇法测定解吸完全后原花青素溶液 的吸光度，考察洗脱条件对解吸效果的影响，确定 最佳解吸条件． 1.2.6 树脂动态吸附试验 (1) 上柱速率对吸附量的影响．分别取一定量 处理过的所选树脂湿法装柱，以 0.4 mg/mL原花青 素溶液上柱，调节不同上柱速率，收集流出液．每 收集 10 mL 流出液用盐酸-正丁醇法测量 1 次其中 原花青素的含量，考察上柱速率 2、4、6 BV/h对树 脂吸附性能的影响． (2) 洗脱速率对洗脱解吸率的影响．分别取一 定量处理过的所选树脂湿法装柱，给定相同的上柱 条件，按最佳吸附条件进行吸附，使其饱和，以不 同的洗脱速率洗脱，考察洗脱速率 1、2、3 BV/h 对洗脱效果的影响． 通过上述试验，确定所选树脂对原花青素吸附 分离的最佳工艺条件． 1.2.7 刺葡萄籽低聚原花青素的纯化 将溶剂浸提所得低聚原花青素粗提物溶于蒸 馏水中，以上述试验所选定的树脂为吸附剂，上柱 吸附至饱和，然后以 60%乙醇水溶液按最佳工艺条 件进行洗脱，每 10 mL 收集 1 次洗脱液，用盐酸- 正丁醇法测定洗脱液中原花青素的含量． 1.2.8 纯化物中 B2含量的测定 准确称取 0.001 0 g原花青素二聚体B2标准品， 用甲醇(GR)定容至10 mL，得质量浓度为0.1 mg/mL 的 B2标准液，稀释，配制成质量浓度为 15、30、 45、60、75 μg/mL的原花青素二聚体 B2系列标准 溶液．通过 HPLC 法测定原花青素二聚体 B2标准 曲线．测定条件：流动相甲醇与水的体积比为 24 76∶ ，并经 0.45 μm 滤膜过滤，脱气；流速 0.8 mL/min；检测波长 280 nm；进样量 20 μL．在相同 条件下测定 1.2.1 方法所得低聚原花青素粗产品(质 量浓度为 0.1 mg/mL)和经大孔树脂纯化后纯化物 (原花青素质量浓度为 120 μg /mL)中 B2的峰面积， 计算 B2的含量． 2 结果与分析 2.1 刺葡萄籽中原花青素的初步提取与分离结果 将处理过的 1 kg 刺葡萄籽在最佳提取条件下 进行提取，乙酸乙酯萃取后得到低聚粗产品 4.608 g，正丁醇萃取后得高聚粗产品 4.251 g，产品总质 量为 8.859 g，得率为 0.89%． 2.2 原花青素标准品的标准曲线 以盐酸-正丁醇法测定原花青素标准品的标准 曲线方程为 y =0.859 7x + 0.011 3，R2=0.999 2，式 中 y 为吸光度，x 为溶液中原花青素的质量浓度 (mg/mL)． 2.3 树脂静态吸附试验结果 2.3.1 树脂的筛选 原花青素具有多酚键和糖苷键，有一定的极性 和亲水性，生成氢键的能力较强，有利于极性和弱 极性的树脂吸附，但吸附能力太强不利于解吸．由 表 2可见，所用树脂吸附效果最好的是 HPD- 300， 其次是 HPD-700、YWD-03K7、YWD-04B1 和 YWD-06C，几种树脂的吸附能力相差不大，其中 HPD-700和 YWD-03K7树脂的吸附能力完全相同． 表2 大孔树脂的静态吸附情况 Table 2 Static adsorption of the resin 树脂型号 吸光度 吸附液中原花青素 质量浓度/(mg·mL－1) 吸附量 /(mg·g－1) YWD-06C 0.034 0.026 37.4 YWD-09F 0.055 0.050 35.0 YWD-03K7 0.026 0.017 38.3 YWD-04B1 0.028 0.019 38.1 HPD-300 0.014 0.003 39.7 HPD-700 0.026 0.017 38.3 D-101 0.055 0.050 35.0 DS-401 0.048 0.043 35.7 由表 3可见，解吸率最高的树脂是 YWD-06C， 42 湖南农业大学学报(自然科学版) 2010年 2月 其次是 D-101、YWD-09F和 HPD-700，因此，综合 考虑，选取 YWD-06C为最佳树脂． 表3 大孔树脂的静态解吸情况 Table 3 Static desorption of the resin 树脂型号 吸光度 吸附液中原花青素 质量浓度/(mg·mL－1) 解吸量 /(mg·g－1) 解吸率 /% YWD-06C 0.166 0.179 17.9 47.8 YWD-09F 0.130 0.138 13.8 39.4 YWD-03K7 0.118 0.124 12.4 32.3 YWD-04B1 0.097 0.099 9.9 25.9 HPD-300 0.127 0.134 13.4 33.7 HPD-700 0.133 0.141 14.1 36.8 D-101 0.131 0.139 13.9 39.7 DS-401 0.074 0.072 7.2 20.1 2.3.2 吸附条件正交试验结果 吸附后测得溶液的吸光度越小，吸附效果越 好．由表 4可知，在吸附过程中各因素对吸附效果 的影响都较大，其中吸附时间的影响最大．时间太 表4 吸附条件正交试验结果 Table 4 The orthogonal analysis of adsorption 因 素 试验 编号 A B C 吸光度 1 2 20 2 0.054 2 4 20 3 0.021 3 6 20 4 0.020 4 8 20 5 0.081 5 2 30 3 0.135 6 4 30 2 0.012 7 6 30 5 0.026 8 8 30 4 0.030 9 2 40 4 0.064 10 4 40 5 0.052 11 6 40 2 0.011 12 8 40 3 0.055 13 2 50 5 0.136 14 4 50 4 0.033 15 6 50 3 0.059 16 8 50 2 0.099 K1 0.389 0.176 0.176 K2 0.118 0.203 0.270 K3 0.116 0.182 0.147 K4 0.265 0.307 0.295 k1 0.097 25 0.044 00 0.044 00 k2 0.029 50 0.050 75 0.067 50 k3 0.029 00 0.045 50 0.036 75 k4 0.066 25 0.076 75 0.073 75 极差 0.068 25 0.032 75 0.037 00 A 吸附时间(h)；B 吸附温度( )℃ ；C 供试液 pH值． 短，吸附不完全；时间太长，可能会使原花青素在 树脂中重新解吸出来．50 ℃时吸光度较大可能是 原花青素在较高温度下发生分解生成色素所致．最 佳吸附条件为吸附温度 20 ℃，吸附时间 6 h，溶液 pH 4． 2.3.3 解吸条件正交试验结果 由表 5可知，解吸时间对解吸效果影响最大， 这是由于时间太短，解吸不完全；时间太长，可能 会使解吸出来的原花青素重新吸附到树脂上．其他 3 个因素对解吸效果的影响基本相同．最佳解吸条 件：解吸液为 60％的乙醇水溶液，pH 4，解吸时间 6 h，解吸温度 25 ℃． 表5 解吸条件正交试验结果 Table 5 The orthogonal analysis of adsorption 试验 D E F G 吸光度 1 80 2 2 25 0.787 2 70 3 4 25 0.757 3 60 4 6 25 0.909 4 50 5 8 25 0.820 5 70 4 2 35 0.825 6 80 5 4 35 0.758 7 50 2 6 35 0.729 8 60 3 8 35 0.826 9 50 3 2 45 0.783 10 60 2 4 45 0.794 11 70 5 6 45 0.860 12 80 4 8 45 0.822 13 60 5 2 55 0.805 14 50 4 4 55 0.765 15 80 3 6 55 0.894 16 70 2 8 55 0.790 K1 3.261 3.100 3.200 3.273 K2 3.232 3.260 3.074 3.138 K3 3.334 3.321 3.392 3.259 K4 3.097 3.243 3.258 3.254 k1 0.815 25 0.775 00 0.800 00 0.842 35 k2 0.808 00 0.815 00 0.768 50 0.784 50 k3 0.833 50 0.830 25 0.848 00 0.814 75 k4 0.774 25 0.810 75 0.814 50 0.813 50 极差 0.059 25 0.055 25 0.079 50 0.057 85 D 乙醇浓度(%)；E 解析液 pH值；F 解吸时间(h)；G 解吸温 度( )℃ ． 2.4 树脂动态吸附试验结果 2.4.1 吸附流速对吸附量的影响 以流出液体积为横坐标，以流出液中原花青素 质量浓度为纵坐标，得上柱速率对吸附量影响的关 第 36卷第 1期 王辉宪等 大孔树脂对刺葡萄籽中原花青素的纯化 43 系曲线(图 1)．由图 1可知，当流速为 2 BV/h时， 树脂对原花青素的吸附比较完全，但由于流速太 慢，使得操作时间过长；当流速为 6 BV/h时，由于 流速过快，原花青素还未被树脂完全吸附就随洗脱 液流出，造成原花青素的浪费，因此选取 4 BV/h 为最佳吸附流速． 图 1 不同吸附流速下树脂对原花青素的吸附 Fig.1 Adsorption of different flowing velocity 2.4.2 洗脱速率对吸附量的影响 根据经验[16]，洗脱速率一般为吸附速率的 1/2， 故笔者考察 1、2、3 BV/h 3个洗脱速率对吸附量的 的影响．以流出液体积为横坐标，流出液中原花青 素质量浓度为纵坐标，得不同流速下树脂对原花青 素的解吸曲线(图 2)．由图 2可见，洗脱速率越小， 洗脱越完全；1 BV/h时虽然洗脱效果较好，但由于 流速过慢，使得操作时间过长；流速为 2 BV/h时， 洗脱曲线集中，对称，无明显拖尾现象；流速为 3 BV/h时，流速较快，洗脱不完全，拖尾现象严重， 所以，选取 2 BV/h为最佳流速． 图 2 不同洗脱速率下树脂对原花青素的吸附 Fig.2 Desorption curve of different flowing velocity 2.5 刺葡萄籽低聚原花青素的纯化 根据静态试验和动态试验确定的吸附、解吸条 件，对用溶剂法提取的低聚原花青素粗提物进行纯 化，用盐酸-正丁醇法测定洗脱液中原花青素的含 量，结果表明，原花青素主要集中在第3组洗脱液， 即20~30 mL阶段，此阶段洗脱液中原花青素含量达 到92.57%． 2.6 纯化物中原花青素 B2 的含量 按 1.2.8 色谱条件，用 HPLC 法分别得到原花 青素 B2标准品与纯化物的色谱图(图 3、图 4)． 出峰时间/min 图3 原花青素B2标准品的HPLC图 Fig.3 HPLC spectrum of B2 standard product 出峰时间/min 图4 原花青素纯化物的HPLC图 Fig.4 HPLC spectrum of purified proanthocyanidins 根据试验结果，得刺葡萄籽低聚原花青素纯化 物中二聚体B2峰面积与质量浓度的线性回归方程 10 900 24 629y x= − ( 2 0.9991R = )．由刺葡萄籽低聚 原花青素纯化物中二聚体B2峰面积与质量浓度的 标准曲线可得刺葡萄籽低聚原花青素纯化物中二 聚体B2的质量浓度为40.17 μg/mL，计算可得二聚体 峰 面 积 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 流出液体积 /mL 原 花 青 素 质 量 浓 度 /( m g · m L－ 1 ) 1 BV/h 2 BV/h 3 BV/h 0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60 70 流出液体积 /mL 原 花 青 素 质 量 浓 度 /( m g · m L－ 1 ) 2 BV/h 4 BV/h 6 BV/h 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 峰 面 积 16 22 2418 282620 3014 12 1086420 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 16 22 24 18 282620 3014 121086420 44 湖南农业大学学报(自然科学版) 2010年 2月 B2含量为33.5%．同样方法可测得溶剂法粗提所得 低聚原花青素中二聚体B2的含量为9.19%． 3 结论与讨论 利用大孔吸附树脂对溶剂法所得刺葡萄籽低 聚原花青素粗产品进行纯化．通过静态试验选择出 YWD-06C树脂为最佳吸附剂，并通过正交试验确定 了最佳吸附条件：吸附温度20 ℃，吸附时间6 h， 溶液pH值为4；最佳解吸条件：解吸液为60%的乙 醇水溶液，pH值为4，解吸时间6 h，解吸温度25 ℃； 通过动态试验确定吸附速率为4 BV/h，洗脱速率为2 BV/h．刺葡萄籽低聚原花青素粗提物经YWD-06C 树脂纯化后，收集20~30 mL阶段洗脱液，用盐酸- 正丁醇法测得其中原花青素含量达92.57%．用本方 法纯化刺葡萄籽低聚原花青素，不仅可以去除提取 物中大部分杂质，提高原花青素的含量，而且可以 富集原花青素纯化物中的二聚体B2，葡萄籽低聚原 花青素产品中B2含量的提高，将大大提高产品的抗 氧化能力和药用价值，也将大大提高产品的经济价 值，因此，本纯化工艺对于葡萄籽的综合利用、对 于提高葡萄籽低聚原花青素产品的品质、对于提升 刺葡萄深加工的价值具有非常好的应用前景． 参考文献： [1] 王宪楷．天然药物化学[M]．北京：人民卫生出版社， 1985． [2] 吕丽爽，曹栋． 薄层色谱法分离葡萄籽中的低聚原花 青素[J]．无锡轻工大学学报，2001，20(1)：65-67． [3] 北京医学院．中草药成分化学[M]．北京：人民卫生出 版社，1980． [4] 王辉宪，姜晖霞，王仁才，等．葡萄子油及原花青素 研究与开发利用[J]．果树学报，2005，22(5)：542-547． [5] 王洪新，汤坚，吴晓燕，等．葡萄籽中抗氧化剂的精 制及抗氧活性的测定[J]．中国油脂，1990，15(4)：9-14． [6] 万本屹，李宏，董海洲．葡萄籽原花青素提取及其应 用研究进展[J]．粮食与油脂，2002(2)：43-45． [7] 向阳，马龙，苏德奇．比色法测定葡萄皮和葡萄籽中 原花青素的含量[J]．中国公共卫生，2003，19(10)： 1228-1229 ． [8] 姚方耀．葡萄籽中葡萄籽油和原花青素的提取分离工 艺研究[D]．天津大学化工学院，2004． [9] 熊兴耀 欧阳建文．超临界CO2萃取刺葡萄籽油及其成 分分析[J]．湖南农业大学学报：自然科学版，2006， 32(4)：436-438． [10] 王仁才，欧阳建文．超临界流体萃取技术在果实功效 成分提取中的应用[J]．湖南农业大学学报：自然科学 版，2006，32(2)：225-228 [11] 舒小艳．葡萄籽中原花青素的提取与分离纯化的研究 [D]．长沙：湖南农业大学理学院，2005． [12] 傅武胜，蔡一新，林丽玉，等．铁盐催化比色法测定 葡萄籽提取物中的原花青素[J]．食品与发酵工业， 2001，27(10)：57-61． [13] 孙丽华，江月仙，王巧懿．铁盐催化比色法测定丽诺 养颜片中原花青素含量[J]．广州食品工业科技，2004， 20(2)：117-118． [14] 徐晓云，潘思轶，谢笔钧，等．树脂法精制沙棘籽原 花色素的研究[J]．农业学报，2005，21(1)： 152-154． [15] 向海燕，周春山，杜邵龙．大孔吸附树脂法分离纯化 虎帐中白藜芦醇的研究[J]．中草药，2005，32(6)： 207-210． [16] 郑永丽．葡萄籽中原花色素的分析、提取与纯化[D]．天 津：河北工业大学化工学院，2004． 责任编辑：王赛群 英文编辑：罗文翠