金烫宝烧烫伤喷雾剂治疗烧烫伤创面愈合的研究

第 l7卷第 7期 2011年 4月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vo1．17．NO．7 Apr．，2011 金烫宝烧烫伤喷雾剂治疗烧烫伤创面愈合的研究 罗先钦 ，刘剑毅 ，黄思行 ，何沛霖，梅小利，张莉 (重庆市中药研究院药理毒理研究所，重庆 400065) [摘要] 目的：观察金烫宝烧烫伤喷雾剂对大鼠浅 Ⅱ度烫伤模型的治疗作用以及其抗炎镇痛作用。：采用 sD大鼠 浅 Ⅱ度烫伤和 KM小鼠足部烫伤创面模型评价其治疗烧烫伤作用；采用角叉莱胶致 sD大鼠足肿胀和甲醛致 KM小鼠疼痛模 型来评价其抗 炎镇痛作用 。以上动物试 验在造模 同时分别皮肤涂抹不同质量浓度 (0．59，0．39，0．20 g·mL )的金烫宝烧烫伤 喷雾剂和阳性药物 ，模 型组动物皮肤涂抹等容量的赋形剂 。结果 ：金烫宝烧烫伤喷雾剂 1．76 g／只能 明显促进 浅 Ⅱ度烫伤大 鼠 模型皮肤创面的愈合，病理组织检查结果显示能够促进浅Ⅱ度烫伤大鼠皮肤皮损伤和真皮胶原纤维束排列紊乱的修复，促 进真皮毛囊增生，减轻炎症细胞对烫伤皮肤的浸润，对烫伤皮肤具有明显的修复作用；金烫宝烧烫伤喷雾剂 0．12 g／只和0．08 g／只能明显减少小鼠实验性烫伤足部组织含水量 ；金烫宝烧烫伤喷雾剂 0．70 g／只对角叉菜胶所致大鼠足肿胀有明显的抑制 作用 ；金烫宝烧烫 伤喷雾剂 0．12 g／只对 甲醛引起 的小鼠疼痛具有 明显镇痛作用 。结论：金烫宝 烧烫伤喷雾剂 具有促进烧烫伤 创面愈合和抗炎镇痛作用 。 [关键词】 金 烫宝烧烫伤喷雾剂 ；浅 Ⅱ度烫伤 ；抗 炎作用 ；镇痛作用 ’ [中图分类号] R285．5 [文献标识码] A [文章编号] 1005—9903(2011)O7．0186-04 Experiment Study on W ound Healing Mechanisms of Jintangbao Spray for Treating Burn Injury LUO Xian—qin ，LIU Jian—yi，HUANG Si—xing，HE Pei—lin，MEI Xiao—li，ZHANG Li (Institute of Pharmacology and Toxicology，Chongqing Academy of Chinese Materia Medica，Chongqing 400065，China) [Abstract] objective：To investigate the wound healing effect of Jintangbao Spray for promoting superficial second degrees burn，as well as anti—inflammatory and analgesic actions．M ethod：The effect of wound healing was investigated through superficial second degrees burn model in rats and feet burn model in mice．Anti inflammatory effect was investigated through carrageenan—induced swelling of rat toes． Analgesic effect was investigated through formaldehyde—induced pain in mice．Result：Compared with the model group，Jintangbao Spray could remarkly promote healing of cutis in the trauma with superficial second degrees burn in rats． The pathomorphological evidences of hepatic tissue showed thatJintangbao Spray could remarkably repair cutaneous epidermis injury and the disorganized collagen fiber—bundle of dermis， and promote dermal follicle proliferation， as well as lighten inflammatory cell intihration．It could significantly reduce water content in the feet burn model in mice，inhibit the earrageenan—induced swelling of rat toes and lighten the pain caused by formaldehyde in mice． Conclusion： Jintangbao Spray carl remarkly promote healing of cutis in the trauma and has anti—inflammatory and analgesic effects，and the evidences provide the basis for clinical application of the medicine． [Key words] Jintangbao Spray；superficial second degrees burn；anti—inflammatory effect；analgesic effect [收稿 日期] 2010101 8(012) [通讯作者 ] 罗先钦 ，助理研究员 ，硕士学位，主要从事中药药效学和 中药毒理学研究 ，1、el：023—89029152，E·mail：|xq_0203@163 corn · l86 - 罗先钦，等：金烫宝烧烫伤喷雾剂治疗烧烫伤创面愈合的研究 烧烫伤是 Et常生活 中一种常见的损伤，烧烫病 人多为 Ⅱ度烧烫伤 ，其中大部分是 中小面积烧烫伤 的患者。金烫宝烧烫伤喷雾剂主要 由冰片 、大黄 、黄 柏等组成 的中药复方制剂 ，临床主要用 于 Ⅱ度烧烫 伤。因此本研究主要通过抗炎镇痛和浅 Ⅱ度烧烫伤 动物试验 ，对金烫宝烧烫伤喷雾剂进行药效学研究 ， 旨在对金烫宝烧烫 伤喷雾剂抗炎镇痛 、促进烧烫伤 创面愈合的功效进行评价 。 l 材料 1．1 动物 SD大 鼠和 KM小 鼠，SPF级动物 ，合格 证号 SCXK(渝)20020004号 ，重庆 市中药研究 院动 物室提供。试验时在重庆市中药研究院实验动物实 验室[合格证号 SYXK(渝)2007—0003号]饲养及 观察。 1．2 药物 金烫宝烧烫伤喷雾剂所用药材为冰片、 大黄、黄柏等 ，均购 自重庆桐君阁股份有 限公 司，按 处方 中各药材 比例加 5倍量 70％乙醇 1 000 mL浸 泡 5 d，每天搅拌 1次 ，滤过 ，得提取液。浓度以生药 量计 为 0．59，0．39，0．20 g·mL～，批 号 20080605。 烧伤灵酊 ：石家庄乐仁堂制药有限责任公司提供 ，批 号 070803。磺胺嘧啶银乳膏 ：重庆科瑞 制药有 限公 司生产 ，批号 080301。复方醋酸地塞米 松乳 膏：汕 头市五环制药厂有限公 司生产 ，批 号 080603。 1．3 试剂 甲醛 ：重庆川东化工 (集团 )有限公司 化 学试 剂 厂 生 产 ，批 号 20080719。角叉 菜 胶 ：由 Sigma公 司提供 ，批号 SL07101。 1．4 仪器 BS224电子天平 ：北京赛多利斯仪器系 统公司。HH．SY21一Ni电热恒温水浴锅 ：北京市长风 仪器仪 表公 司生产 。XMTA一7000P电热鼓 风 干燥 箱：重庆银河试验仪器有限公司。7140型足容积测 定仪 ：PLETHYSM0MRETER，由 UGO BASILE S．R． IJ|生产。 2 方 法 2．1 对实验性 浅 Ⅱ度烫伤 大 鼠模 型的影 响 。。 SD大 鼠 60只，雌雄 各半 ，大鼠适 应性观察后将 用 10％硫化钠脱毛其背部 ，面积约为 9 cm X6 cm；次 日 ip 0．9％戊巴比妥钠 45 nag·kg～，麻醉后仰卧位将其 四肢用橡皮筋固定在木板 (30 cm X 12 C11'1×0．8 Onl， 中问挖一个长轴为 8 cm，短轴 为 5 cm的椭圆形孔) 上 ，使裸露的背部皮肤暴露在木板孔 内，然后将木板 放置在电热恒温水浴锅上 ，裸露的皮肤浸泡在 (70± 0．5)cC的水中持续 15 S，使之造成浅 Ⅱ度烫伤模 型，烫伤面积为(3．14 cm X 4 cm X 2．5 cm)，即 31．4 cm ；随后立即 ip灭菌生理盐水 5 mL／只；次 日用硫 酸纸描绘皮肤烫伤面积 的图形 ，在 电子天平上称取 烫伤面积 图纸的质量 ，以该质量表示烫伤皮肤面积 ， 将因操作造成 烫伤面 积差异 的大 鼠调整并 分为 6 组 ，即：模型对照组 ，金烫宝烧烫伤喷雾剂高 、中、低 剂量组 ，烧伤灵 酊组 ，磺胺 嘧啶银乳 膏组 ，每组 1 O 只。每天给药次数为造模后前 3 d，每次间隔 2 h涂 抹给药量约为 3 mL，每天共 5次 ；造模后第 4天至给 药结束，每次间隔4 h涂抹给药量约为3 mL，每天共 3次 ，其中模型对照组 给予赋形剂，给药剂量以每天 给药 3次计算，磺胺嘧啶银乳膏组涂抹给药0．4 g， 每 日2次 。连续用药 20 d；每 5 d用透明硫酸纸描 绘皮肤烫伤面积 的图形 1次 ，称取烫伤皮肤面积 图 纸的质量，以该质量变化表示皮肤烫伤面积的变化， 并将用药前的图纸质量减去用药后的图纸质量比用 药前的图纸质量，得到图纸减重百分率作为烫伤皮 肤愈合百分率，并计算开始脱痂天数和愈合天数，以 此评价受试药物 的作用 ；末次用药后次 日监测大 鼠 血像 ，然后脱 颈 处死 ，剪 取烫 伤 部位 皮肤 ，固定 于 10％甲醛溶液中，石蜡包埋切片 ，HE染色，显微镜下 观察 比较各组大 鼠烫伤皮肤 的表皮修复 、真皮胶原 纤维束修复、真皮毛囊增生、真皮及皮下组织炎症细 胞浸润的愈合程度。 2．2 对小鼠足部烫伤创 面组织含水量 的影响 KM小鼠 50只，雌雄各半 ，体重 I8～22 g。调节水浴 箱中热水温度 ，使保持在(55±0．5)oI=，将小鼠左后 足浸入热水中 20 S后取出 ，2 h后小 鼠左 足出现红 肿疼痛 ，随机分为 5组 ，即模 型对照组，金烫宝烧烫 伤喷雾剂高、中、低剂量组，烧伤灵酊组。给药方法 为间隔 3 h将左足浸泡 给药 1次，每次浸泡 时间为 30 S，每天共 4次(约 0．2 mL)，连续 2 d，其中模型对 照组给予赋形剂 。最后 1次用药后 1 h脱颈处死 动 物 ，用剪刀 自膝关节平面剪下左后肢 ，立即称量左后 足湿质量 ，然后放入 烘温 箱 内，100℃连续烘干 16 h，称量其干质量，计算组织含水量 =(组织湿质量 一 组织干质量)。 2．3 对角叉菜胶所致大 鼠足肿胀 的影 响 取大 鼠6O只 ，雌雄各半 ，随机分 为 6组 ，即模 型对照组 ， 金烫宝烧烫伤喷雾剂高 、中、低剂 量组 ，烧 伤灵 酊喷 雾剂组 ，复方醋酸地塞米松组 ，每组 10只。给药方 法为每次问隔4 h将左足浸泡给药 1次，每次浸泡 ． 1 87 ． 第 l7卷第 7期 2011年 4月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vo1．17．NO．7 Apr．，201I 时间为 30 S，每天共 3次(约 1．2 mL)，连续 3 d，其 中模型对照组给予赋形 剂，给药剂量 以每天给药 3 次计算 ，醋酸地塞米松组涂抹给于 0．2 g，每 日 1次。 末次给药前测定大 鼠正常足容积(2次 ，取均值 )，末 次给药后 30 min，于大鼠左足部 SC 1％ 的角又 菜胶 0．05 mL致炎，分别测定致炎后 1，3，6，8 h的大鼠足 容积 ，计算足肿胀率。 2．4 对甲醛所致小 鼠足部疼痛的影响 j 昆明种 小鼠60只，体重 1 8～22 g，雌雄各半，随机分成 5 组 ，即赋形剂对照组 ，金烫宝烧烫伤喷雾剂高 、中、低 剂量组 ，烧伤灵酊喷雾剂组 ，每组 10只。给药方法 为每隔 30 min将小鼠左足浸泡给药 1次 ，每次浸泡 时问为 30 S，共 4次 (约 0．2 mL)。末 次给药后 30 rain于左前足背部 SC 2．5％甲醛 ，注射后按 4级记分 法记分 ：0分 ，注射 甲醛侧的前足与另侧未注射的前 足均接触地面，走动 自如 ；1分 ，注射 甲醛侧 的前足 轻微接触地面 ，身体重心移放于未注射侧足一边 ，走 动时明显跛行 ；2分 ，注射 甲醛侧 的前足抬起，不接 触任何表面；3分 ，小 鼠舐 、咬或抖动注射侧 的前足。 分别在注射甲醛后 1，15，30，60，90 rain记录小鼠的 疼痛反应记分 。 2．5 统计学处理 实验各组所得数据均采用 ±S 表示，计量资料进行单因素方差分析 ，计数资料的比 较采用 Ridit分析 ，上述检验方法均采用 SPSS13．0 统计软件计算。P<0．05有统计学意义。 3 结果 3．1 对大 鼠烫伤模型烫伤的影响 3．1．1 对大鼠烫伤模型烫伤面积和愈合时间的影 响 金烫宝烧 烫伤 喷雾剂 各剂量组 (5．27，3．51， 1．76 g／只)的烫伤面积愈合百分率在用药后不同时 段均明显高于模型对照组，具有明显统计学差异(P <0．05或 P<0．01)；与模型对照组 比较 ，各剂量组 烫伤皮肤的愈合时间明显缩短 ，其中低剂量组 (1．76 g／只)的愈 合时间有 明显统计 学意义 (P<0．05)。 提示金烫宝烧烫伤喷雾剂可促进浅 Ⅱ度大鼠烫伤皮 肤的愈合 ，并对烫伤部位的炎症有一定的抑制作用。 见表 1。 表 1 金烫宝烧烫伤喷雾剂对大鼠烫伤模 型烫伤面积的影响(i±s，n=10) 注：与模型对照组比较”<0．05， P<0．O1； 剂量为mL／只(表 2～4同)。 3．1．2 对大 鼠烫伤模型烫伤皮肤病理学 的影 响 造模 20 d皮肤病理组织切片检查结果显示 ，模 型对 照组大鼠烫伤皮肤表皮坏死 ，真皮胶原纤维束排列 紊乱 ，内有大量炎症细胞浸润 ，未见毛囊增生或少量 增生。用 Ridit分析进行统计，金烫宝烧烫伤喷雾剂 3个剂量组能够促进烫伤皮肤表皮损伤和真皮胶原 纤维束的修复，促进真皮毛囊增生，减轻炎症细胞对 烫伤皮肤的浸润，其 中以金烫宝烧烫伤喷雾剂低剂 量组 (1．76 g／只 )对皮肤损 伤的修复作用最 显著。 提示金烫宝烧烫伤喷雾剂对浅 Ⅱ度大鼠烫伤皮肤损 伤具有明显 的修复作用。 3．2 对小鼠足部烫伤创面组织含水量的影响 金烫 宝烧烫伤喷雾剂高、中剂量组(0．12，0．08 g／只)能明 显减少小鼠实验性烫伤组织含水量，与模型对照组比 较有显著性差异。提示金烫宝烧烫伤喷雾剂对小鼠 ． 1 8R ． 实验性烫伤组织有抗渗出作用。结果见表 2。 表 2 对小鼠实验性烫伤创面组织含水量的影响(i± ，n=10) 3．3 对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的影响 金烫宝 烧烫伤喷雾剂高剂量组 (0．70 g／只)对注射角叉菜 胶后 6，8 h的大鼠足肿胀率有 明显的抑制作用 ，与 模型对照组比较有显著性差异。结果见表 3。 3．4 对甲醛所致小 鼠足部疼痛 的影响 金烫宝烧 烫伤喷雾剂高剂量 组(0．12 g／只)对 甲醛所致小 鼠 足 部疼 痛在60，90rain有明显的抑制作用 ，能明显 罗先钦 ，等 ：金烫宝烧烫伤喷雾剂治疗烧烫伤 创面愈合的研究 减少 甲醛刺激引起的小 鼠足部疼痛分数 ，与赋形剂对 照组 比较有显著性差异。结果见表 4。 4 讨论 金烫宝烧烫伤喷雾剂系临床验方制剂 ，能收湿敛 疮 ，清热解毒 ，主要用于各种原 因引起 的烧烫伤 ：I度 伤 1～3 d可治愈 ，浅 Ⅱ度伤 7～10 d，深 Ⅱ度伤 10～ 27 d可治愈。用药后创面很快形成保护膜 、保护创面 润而干燥 ，有清凉感 ，有效控制创面液体外渗 ，避免和 减少津液流失 ，保证有效循环量和体 内酸碱平衡 ，改 善局部微循环，抑 菌，防止病原微生 物与对创 面的侵 入 ，避免包扎对创 面新生皮肤损害 ，促使上皮细胞生 长 ，新皮肤形成后药膜 自然分离 ，破损坏死 的组织痂 逐渐脱离 ，恢复健康皮肤 ，疗效独特。 实验性烧烫伤 的损害程度取决于致伤温度 的高 低 、致伤时间的长短 、烧烫伤组织的伤前情况 以及实 验动物的机体反应性 。为保持致伤条件恒定一致，复 制出损害程度一致的模型，以便于进行重复和对比， 应针对致伤时间、致伤温度和致伤后各种可能的影响 因素 ，采取相应的措施 ，最大限度地 减少各种 因素的 影响 ，所 以采用恒温水浴锅热水浸泡复制大 鼠浅 Ⅱ 度烫伤模型。烧烫伤后创面愈合时间 、创面愈合面积 百分 比和病理组织学检查是评价创 面愈合 的一个综 合性指标 ，烧伤创面愈合过程包括炎症反应 、细胞增 殖、结缔组织形成、创面收缩和创面重新塑造，且这些 过程相互交叉 ，不可分割 ，共同参与创面愈合 ，其 中细 胞增殖起着最重要的作用 。 在本实验中金烫宝烧烫伤 喷雾剂各剂量组 能明 显使大 鼠浅 Ⅱ度烫伤模型创面面积缩小 ，增加烫伤面 积愈合百分率，明显缩短愈合时 问，同时病理组织切 片检查结果显示各剂量组对浅 Ⅱ度烫伤大鼠皮肤表 皮损伤和真皮胶原纤维束排列紊乱 的修复，促进真皮 毛囊增生 ，减轻炎症细胞对烫伤皮肤 的浸润 ，对烫伤 皮肤具有 明显 的修复作用 ，个别指标优于公认 的烧烫 伤治疗药磺胺嘧啶银乳膏和烧伤灵酊喷雾剂，为临床 应用提供 了科学依据 ；对小 鼠实验性烫伤组织有抗渗 出作用 ；对注射角又菜胶后 6，8 h的大鼠足肿胀率有 明显的抑制作用 ；对甲醛所致小鼠足部疼痛在 60，90 min有明显的抑制作用 ，能明显减少 甲醛刺激引起的 小 鼠足部疼痛分数。 通过以上烧烫伤药效学试验 ，结果表明金烫宝烧 烫伤喷雾剂具有促进烧烫伤创面愈合和抗炎镇 痛等 药理作用。 [参考文献] [1] 冯世杰 ，花兰女 ，金 曙雯 ，等．大鼠烫伤 模型 的制作 [J]． 上海第二医科大学学报 ，1995，15(2)：195． [2] 朱清如 ，郭 寿延 ，王宝美 ，等 ．大 鼠浅 Ⅱ度烫 伤实验 模型 的病理 研究 [J]．上 海第 二医科 大学 学报，1998，17 (1)：54． [3] 吴继禹 ，王志强 ，黄学荪．紫草喷雾剂的研制及 药效学观 察 [J]．福建 中医药 ，2004，35(5)：43． [4] 叶建勋 ，叶伟洪 ，蔡立 民，等．创面 灵治疗 烧烫 伤的 药效 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