HIF-2α、CA9在肾透明细胞癌表达的临床意义

中外医学研究 201 1年 3月 第 9卷 第9期 CHINESE AND FOREIGN MEDICAL RESEARCH I|． HIF一2 、CA9在肾透明细胞癌达的临床意义 崔旭 谢泽铨 许庆均 叶烈夫 福建医科大学2008级研究生(福建 福州350001) 福建医科大学省立临床医学院 【摘要】 目的 探讨乏氧诱导因子 HIF～2 0【、CA9在肾细胞癌中的表达情况及临床意义。方法 应用免疫组化染色，检测110 例肾细胞癌组织中HIF一2 0c、CA9的表达情况。结果 HIF一2 在肾细胞癌中表达阳性率87．3％，CA9在肾细胞癌 中表达阳性率为 90％，与对照组织相比有显著差异(P<0．001)；HIF一2 0【表达强度与临床分期及病理核分级呈正相关(P<0．05)，CA9表达强度与 肾细胞癌临床分期、病理核分级无明显关系(P>0．05)；两个因子表达与患者年龄、性别，无明显相关(P>0．05)。结论 HIF一2仅、 CA9在肾细胞癌中表达阳性率高，其中HIF一2a与肾透明细胞癌临床分期、病理核分级明显相关，可以作为预测肾细胞癌患者预后 的分子标记物，并可能成为非常有潜力的生物治疗靶点，CA9则可能作为预测患者预后及治疗疗效的标记物之一。 【关键词】 肾细胞癌； 分子标记； HIF一2 0【； CA9； 生物治疗 The clinical significance of HIF一2 ，CA9 combined express in the renal clear cell carcinoma CU／Xu，XIE Ze—quan，XU Qing～ jun，YE Lie～ ．Yufian Medical University，Graduate Class of2008，Fuzhou 350001，China ’ 【Abstract】 Objective We discussed the expression and clinical significance of the HIF一2ct，CA9 in the renal clear cell carcinoma (ccRCC)．Methods We checked these factors in the morphological expression leve1．We detected HIF一2or，CA9 in 1 10 tissues of renal cell carcinoma by immunohistochemistry．Results HIF一2 o【had a expressing positive rate of 87．3％ ，CA9 had a rate of 90％ in the ccRCC， which had significant deviation with the control group(P<0．001)．The intensity of HIF一2or expression had positive correlation with clinical stage，pathological nuclear classification(尸<0．05)．HIF一2a had much positive relevant expression(P<0．001)；The intensity of CA9 ex— pression had no relationship with clinical stage，pathological nuclear classification(P>0，05)；The expression of these two factors were not re— lated to the patients’ages，gender and the side of tumors(P>0．05)．Conclusion HIF一2ct，CA9 had high positive expressing rate in ccRCC．HIF一2d may become predicting factors for the RCC patients’prognosis．They even could be patent bioremediation target point．CA9 could be a factor of prognosis and therapeutic effect for the ccRcc patients． 【Key words】 Renal cell carcinoma； Molecular； HIF一2 0【； VEGF； Bioremediation 肾细胞癌占了肾原发性肿瘤的 80％，1／3的患者在确诊时 已经转移，其对放化疗均不敏感，以手术治疗为主。近年来，肾 肿瘤分子生物学研究进展迅速 ，为肾癌的诊断和治疗提供了更 好的方法。 HIF一2仅⋯是近年来发现 的 HIF—lct的蛋白同系物，与 HIF一1ct48％的氨基酸序列相同。在缺氧微环境中，肿瘤细胞 通过上调基因 HIF表达 ，诱导一系列反应如：糖酵解 ，血管增生 等 。与 HIF一1 相比，HIF一2a更倾向于诱导肾细胞癌血管 的生成 ，在肾细胞癌的形成及进展中发挥了重要作用。 碳酸酐酶 Ix是 CA家族 中的一员，其表达与缺氧有关，定 位于细胞膜上，在缺氧条件下调节细胞增殖 ，参与肿瘤的发生和 发展。CA IX作 为肿瘤相关抗原，在 RCC中选择性表达 J。 BUI等 认为 CA IX是判断 RCC预后的独立的预测因子。 本实验使用免疫组化染色方法，对 110例肾透明细胞癌患 者术后标本中HIF一2ct、CA9的表达情况及相关性、临床意义进 行了研究。 1 资料与方法 1．1 一般资料 收集 2009年 1O月 ～2010年 10月笔者所在科 室因肾透明细胞癌行肾肿瘤根治性切除及部份切除的1 10例标 本，其中男性患者77例，女性患者 33例，比例约为 3：2；年龄 18～77岁，平均57．4岁；左侧肿瘤 66例，右侧肿瘤 44例 ；其中 通讯作者：叶烈夫 T1期肿瘤64例， 期肿瘤4l例，T3期肿瘤5例；病理核分级方 面，Furhman I级肿瘤 35例，Furhman II级肿瘤 56例，Furhman Ⅲ级肿瘤 l9例 ，所有病例均经过病理科诊断证实为肾透明细胞 癌，对照标本选取远离肿瘤及肿瘤切缘基底部的正常肾脏组织。 1．2 试剂 用于免疫组化染色一抗：购 自美国 ABCAM公司的 兔抗人HIF一2、CA9单克隆抗体。ENVISION二步法检测试剂 盒及 DAB购自北京中杉金桥生物技术公司。 1．3 免疫组化染色 1．3．1 使用经过 POLY—L一赖氨酸处理后的玻片，对玻片进行 标记，分为肿瘤组 ，正常组织对照组，PBS阴性对照组。 1．3．2 石蜡切片63．5℃烤箱孵育过夜 ，常序进行脱蜡、透 明、水化及抗原修复。 1．3．3 经过预实验，HIF一2 实验浓度为 1：100，CA9为 1：50， 滴加一抗后置于37℃温箱中孵 育 1 h，滴加二抗，37℃温箱孵 育 30 min，现配 DAB试剂滴加，苏木素复染 2 min，HCL分化沾 洗 3～4次，100％酒精浸泡 5 min脱水。63．5℃烘箱烘干玻片， 中性树脂封片。 1．4 结果判定 免疫组化染色结果判定：以细胞核或细胞 质成棕黄色为阳性，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5个 视野，每个视野计数 200个细胞，共计 1000个，阳性染色细胞定 义为：细胞结构清晰，阳性颗粒定位好，着色与背景对比清楚，阳 性与阴性根据染色细胞所占面积及染色强度来判断。染色评 定：无细胞染色为“一”；50％细胞染色，且染色较淡为“低表 — — 1 —— 论 中外医学研究 2011年3月 第9卷 第9期 者 。毒 |≯冬≯||≯ 量誊|≯ |≯|毒 |l_誊．． 曩| | 达”；50％细胞染色 ，染色较深为“高表达”。 2 结果 2．1 免疫组化结果图片 2．1．1 HIF一2cL在肿瘤组织表达情况见图 1和图2。 2．1．2 CA9在肿瘤组织中表达情况见图 3和图4。 图1 HIF一2cx高表达 图2 HIF一2 低表达 图3 CA9高表达 图 4 CA9低表达 2．2 肿瘤组织免疫组化表达结果见表 1、表 2；正常组织 HIF一 一 8 一 CHINESE AND FOREIGN MEDICAL RESEARCH | 一 。 | 。 一 | 誊 ’鼍|_ 鼍 0 ‘墨 || 2oL、CA9免疫组化结果均为阴性。 表 1 HIF一2 0【在肾透明细胞癌中表达情况 n(％) 2．3 统计学分析 2．3．1 HIF一2 在肿瘤组织中的阳性率为 87．3％，CA9则为 90％。HIF一2仅肿瘤组织表达情况与正常组织对照，PEARSON 卡方值 130，P<0．001，差异有统计学意义；CA9肿瘤组织表达 情况与正常组织对照，PEARSON卡方值 59．69，P<0．001，差异 有统计学意义。 2．3．2 HIF一2cx在肿瘤细胞中表达情况与核分级，临床分期相 关 ，非参数相关性检验，有统计学意义 (P<0．01)，与性别、患 侧、年龄无明显相关，差别无统计学意义(P>0．05)；HIF一2ct在 不同TNM临床分期，不同的病理核分级的肾肿瘤 中表达不同， 有统计学意义(P<0．001)；H1F一2 0【于 T1与 rI2期，Tl与 r乃 期，1、2与 13期肿瘤中表达均有差异，P均小于 0．05；HIF一2 0【 在核分级 Furhman I与 Furhman II之问表达无明显差异(P> 0．05)，在 FurhmanⅢ与 FurhmanⅡ及 Furhman m与 Furhman I 问表达有明显差异(P<0．001)；CA9在肿瘤细胞中表达情况与 核分级、临床分期 、性别 、患侧 、年龄无明显相关，差别无统计学 意义(P>0．05)。 3 讨论 RCC是泌尿系常见恶性肿瘤之一，约有 20％ ～30％的患者 在就诊时己有转移。RCC的生物学特性复杂 ，其对放化疗均不 敏感，以手术治疗为主。近年来，。肾肿瘤分子生物学研究进展迅 速，为肾癌的诊断和治疗及预后判断方面提供了更好的方法。 成熟的 正常 肾 脏及 早 期 的细 胞损 伤，细胞 主要 表 达 HIF一1 ，透明细胞癌则表现出向 HIF一2 转变的过程。有学 者研究表明：肾透明细胞癌中 HIF一2ct表达较肾乳头状癌及肾 嫌色细胞癌为高，HIF一2 0l mRNA水平与肾透明细胞癌核分级 水平呈负相关 ]。另有学者研究则得出相反结论，即肾透明细 胞癌中 HIF一2 表达水平与病理核分级，临床分期呈正相 关 。学术界对此尚无定论。 CA9是由酸性氨基酸组成的跨膜糖蛋白，最早是由 Der等 中外医学研究 201 1年3月 第 9卷 第9期 CHINESE AND FOREIGN MEDICAL RESEARCH 在肿瘤相关的HeLa细胞中发现此蛋白。CA9参与调节细胞内 外 pH值 ，对维持细胞内环境的稳定有重要作用。此外 ，CA9对 肿瘤的生长、进展 、浸润和转移也有重要作用。大部分正常组织 不表达 CA9或表达极低，而在一些恶性肿瘤细胞 中，如 RCC、膀 胱癌等有异常表达。 本实验使用免疫组化的检测方法 ，研究了 HIF一2 0【、CA9在 肾细胞癌中的表达情况 ，研究发现：正常组织中无 CA9表达， CA9与肾透明细胞癌的临床分期、分级，患者性别 、年龄 、患侧无 明显相关性 ；HIF一2仅在肿瘤细胞 中表达明显高于正常组织 ，有 统计学意义 ，HIF一2 表达与核分级，临床分期相关 ，与性别 ，患 侧，年龄无名显相关性，HIF一2eL在不同组织学分型，不同 TNM 临床分期，不同的病理核分级的肾肿瘤中表达不同，HIF一2 于 Tl与 1’2期，T1与 1’3期，T2与 期肿瘤 中表达不同，及 13期 二者的表达率高于Tl，T2期的肿瘤；HIF一2 在核分级 Furhman I与FurhmanⅡ之间表达无明显差异 ，在 Furhman llI与 Furhman Ⅱ及 Furhman 11I与 Furhman I间表达有明显差异。 本次试验结果与部分学者得出结果相近，CA9不能作为肾 透明细胞癌的临床分期，分级的诊断因子，但是有相关研究表 明，其与肾透明细胞癌患者的预后及对 IL一2的反应有密切关 系 。HIF一2ct表达与肾细胞癌的组织学类型，临床分期，病理 核分级有关，对于预测临床预后及转归能够起到重要作用 ，二者 可能可以作为独立或联合的肾细胞癌分子标记而广泛应用于临 床。HIF一2 与 VEGF关系密切，VEGF可能受 HIF一2cl直接调 控，具体机制有待今后研究进一步明确。以 VEGF为治疗靶点 的分子靶向药物贝乏朱单抗 ，是人类源性单克隆抗体 ，可以结合 并中和 VEGF的大多数亚型。在 Ⅱ期临床试验中，进展期而早 期应用大剂量IL一2治疗失败的RCC患者，应用贝乏朱单抗可 达到明显延迟进展时间的效果。HIF一2ct可能可以作为潜在的 著 分子靶向治疗靶点 ，在临床上获得更广泛的推广应用。 参考文献 [1]Li Chen，Alexander Endler，Futoshi Shibasaki．Hypoxia and an— giogenesis：regulation of hypoxia—inducible factors via novel binding factors．EXPERIMENTAL and MOLECULAR MEDI— CINE，2009，12(41)：849—857． [2]Sandlund J，Ljungberg B，Wikstr6m P，et a1．Hypoxia—induc— ible factor——2alpha mRNA expression in human renal cell Carci-- noma．Acta Oncologica，2009，48(6)：909—914． [3]Liao S，Aurelio O，Jan，K，et a1．Identification of the MN／CA9 protein as a reliable diagnostic biomarker of clear cell carcinoma of the kidney．Cancer Res，1997，57：2827． [4]Bui M，Visapaa H，Seligson D，et a1．Prognostic value of carbonic anhydrase IX and KI67 as predictors of survival for renal clear cell carcinoma．J Urol，2009。171：2461—2466． [5]Sudarshan S，Linehan WM，Neckers L．HIF and fumarate hydratase in renal cancer．British Journal of Cancer，2007，96： 403—407． [6]Toschi A，Edelstein J，Rockwell P，et a1．HIFa expression in VHL——deficient renal cancer cells is dependent on phospho·· lipase D．Oncogene，2008，27(19)：2746—2753． [7]Atkins M．Mcdermot D，Mier J，et a1．Carbonic anhydrase 1X (CAIX)expression predicts for renal cell cancer(RCC)patient respense and survival to IL一2 therapy．Proc Am Soc Clin On— col，2004，23：383． 【收稿日期】 2011—01—26 (本文编辑：陈春梅) 慢性阻塞性肺疾病急性发作期的细菌性分析 武正洲 达州市中西医结合医院(四川 达州1 635000) 【摘要】 目的 探讨慢性阻塞性疾病(COPD)急性发作期的病毒性感染的关系及在其发病机制中的应用。方法 选择笔者所 在医院 自2009年 10月 一2010年 l1月收集的41例 COPD的急性发作期患者为治疗组(A组)，选择 36例稳定期患者为观察组(B 组)，32例正常者作为对照组(c组)，采用间接的酶联免疫吸附实验(ELISA)对三组患者的血清进行呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱 疹病毒 I型(HSV—I)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)、肺炎衣原体(cP)的特异性抗体 IgM、IgG进行检测。结果 治疗组的 IgM 抗体阳性率高于观察组及对照组，三组间比较差异有统计学意义(P<0．01)；三组患者的IgG抗体的阳性率比较，治疗组与观察组间 比较无统计学差异(尸>0．05)，治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P<0．01)。结论 对引发慢性阻塞性肺疾病急性发作的病 因进行充分的认识，细菌性病毒感染是 COPD急性发作的期的重要的诱因，与 COPD的发病具有相关性。 【关键词】 慢性阻塞性肺疾病； 急性发作； 病毒感染； 呼吸道病毒 Infection in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease WU Zheng—zhou．Dazhou Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine ，Dazhou 635O00，China 【Abstract】 Objective To investigate the effect of viral infections of the respiratory tract on the acute exacerbation of chronic 0bstruc tive pulmonary disease．Methods Our hospital from October 2009 to November 2010 collected 41 cases of acute exacerbation of COPD pa- tients for the treatment group，36 patients with stable patients in the observation group ， 32 normal patients as control group．ELASA were used 一 9 一