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乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白

2012-03-14 2页 pdf 206KB 109阅读

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乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白 医学信 息 2011年5,q 第24@ 第5期 医学影像与检验 豢 乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白 昊 明 【摘要】目的:应用美国临床实验室标 准化委 员会(NCCLS)的标准化评价方案 对乳胶增强免疫 比浊法测定血清肌 红蛋 白(Mb)进行初 步评价 。 方法 :分析乳胶增强免疫比浊法测定血清肌 红蛋白的精密度、准确性、线性范围和干扰 因素。结果 :此方法枇 内 CV < 6.0 ,批阎 CV < 7.0%。 抗干扰性强,Hb≤4.0 g/L、胆红素 ≤ 400~mol/L、类风湿子≤ 2000 IU/...
乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白
医学信 息 2011年5,q 第24@ 第5期 医学影像与检验 豢 乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白 昊 明 【摘要】目的:应用美国临床实验室标 准化委 员会(NCCLS)的化评价 对乳胶增强免疫 比浊法测定血清肌 红蛋 白(Mb)进行初 步评价 。 方法 :分析乳胶增强免疫比浊法测定血清肌 红蛋白的精密度、准确性、线性范围和干扰 因素。结果 :此方法枇 内 CV < 6.0 ,批阎 CV < 7.0%。 抗干扰性强,Hb≤4.0 g/L、胆红素 ≤ 400~mol/L、类风湿子≤ 2000 IU/L对测定无影响;与进口试剂对比,y 0.9985x+ 0.0131,r=0.9995,两 者相关性 良好 。结论:乳胶增强免疫比浊法测定血清 Mb,具有方法简便 、快速、灵敏的优点,且结果准确,可用 自动分析仪测试,适合临床检验应用。 【关键词】乳胶增强免疫比浊法;肌红蛋 白(Mb);方法学评价 Nanopartlcles boost the imm une turbidimetric determination of M b M ing H [Abstract]0bjective To evaluate an Nanoparticles boost the immune turbidimetry for determining serum myoglobin(Mb)with the National Corn- mittee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)projects,.Methods The precision,accuracy,specificity,linearity and interference of the Nanoparti— cles boost the immune turbidimetry were analyzed.Results W ithin— day CV and between-- day CV of the method were less than 6.0 and 7.0 re— spectively.The performance of anti—jamming was strong,which hemoglobin(up to 4.0g/L),bilirubin(up to 400/~mol/L),rheumatoid facto(up to 2000 IU/L).A comparison between imported Mb(Y)and this kit(x)gave following results:Y一 0.9985x+ 0.0131,r=0.9995.There was good cot— relation between them,According to the statistical date.Condusions:The Mb assay kit is convenient,fast and accurate and suitable for automation a— nalysis.Conclusion The method of Nanoparticles boost the immune turbidimetry can be applied on automatic analyzer for detection of Mb in the set— um . [Key words]Nanoparticles boost the immune turbidimetry;myoglobin;methods evaluation 【中国分类号]R446.11 【文献标识码】A 【文章编号11006—1959(2011)05—0274~02 肌红蛋 白(Mb)是组 成骨 骼肌 和心肌 的 主要 蛋 白质,分子量 为 167o0KD,由于 Mb分子量小 ,当肌肉损伤时,可以很快从破损的细胞 中 释放出来,在急性心肌梗死 (AMI)发 病后 1~3小时血中浓度迅速上 升 ,6~7小时达峰值,I2小时 内几乎所有 AMI患者 Mb都有升高,升高 幅度大于各心肌酶,因此 可以作为 AMI的早 期诊断标志物。同时 Mb 半寿期短(15rain),胸痛发作后 6~12小时不升高,有助于排除 AMI的 诊断 ,是筛查 AMI很好的指标。本研究应用 NCCLS标准化评价方案 对乳胶增强免疫比浊法测定血清肌红蛋白的精密度 、准确性、线性范 围 和干扰因素进行了评价 。 1 和方法 1.1 样品均为我院门诊和住院病人。 1.2 试剂和仪器 :试剂 l(R1):甘氨酸缓 冲液 50mmol/L、氯化钠 4.5g/L、聚乙二醇 60003.0g/L、稳定剂和防腐剂适量;试剂 2(R2):含乳 胶共价结合的羊抗人 Mb抗体、Mb标准液及低值、高值室 内质控液(均 来源于浙江伊利康生物技术有 限公司)。干扰物质 :600/zmol/L胆红素 标准液、5 g/L血红蛋白溶液。仪器为日立 7600生化分析仪。 1.3 方法原理 :将含有 Mb样本与共价结合在乳胶上的 Mb抗 体 在缓冲液中结合,形成稳定的抗原 一抗体复合物 ,并产生一定的浊度,通 过测定一定时间后吸光度变化 ,与同样条件下校准液相 比较 ,即可计算 出样本中 Mb的浓度 。 】.4 主要分析参数 :样本 9 vl,R1 150 l,R2 5O 1,主波长 505 nm,两点速率法。反应温度:37℃ ,测光点 22~28点 。 1.5 操作 方法:根据 分析 参数在 仪器 上编制 检测程 序,在 日立 7600生化分析仪上完成检测 。 1.6 统计学方法 :采用 Statal0.0软件进行统计学处理。 2 结果 2.1 精密度 :根 据 NCCLS EP5一A2文 件对于精 密度评价 的要 求i1],分别测定低值 ,中值和高值三种水平的 Mb浓度 。2 h内各水平连 续测定 2O次,计算均值(x)、标准差 (s)、(cv批内) 每天测定 1次 ,连 续测定 2O d,计算(x)、(s)、(CV 日间)。批 内精密度和 日间精密度结果 见表 l。 表 1 批内和 日问精密度结果(ng/m1) 标本 次鼓 — 次敷 ——ij ——— 低值 20 42 213 5.07 20 46 2 81 6il 中值 20 86 2.88 3 35 20 89 3 55 3 99 高值 20 207 3 42 1 65 20 210 5 64 2 69 2.2 回收试验 :取低值和高值新鲜血清样品各 1份,以不同比例混 合 ,成为分析样品,然后分 别测定 Mb的浓度,计算 回收率 ,结果 见 表 2。 表 2 回收实验结果 标本号 理论浓度(n m1] 涮定浓度 (ng:m1) 回收率 (%) 47 76 136 189 293 405 50 80 14I 192 288 395 — 274 一 *血清 Mb的平均回收率为 102.1 。 2.3 对 比实验 :将血清样品 (N= 40)同时用该法与日本进口原装 Mb试剂分别测定测定范围为 5—500 ng/ml的样品,计算出回归方程为 Y= 0.9985x+ 0.0l31(x为 日本进口原装 Mb试剂试剂),相关系数 r 一 0.9995,经 t检验得 P>0.05,表 明两组结果无统计 学差异 ,高度 相关 。 2.4 干扰因素 :用稀释好的不同浓度的血红蛋白、胆红索和类风湿 因子分别与含 Mb浓度较高的血清和生理盐水做回收试验,以回收率的 好坏判断是否存在干扰。结果见表 4。 表 4 回收试验结果 2.5 线性范 围测定 :按 NCCLS(EP6P)文件作线性评价标准,取 一 高浓度 Mb标 品(500 ng/m1)和一低浓度 Mb标品(50 ng/m1),然后 把 2份样本等量混匀产生中间值 ,再分别将 中间值和低值 ,中间值 和高 值等量混匀 ,共产生 5个不同浓度的样品。在分析仪上用本试剂从低值 到高值 ,然后从高值到低值对 5个不同浓度 的标本分别 平行测定 5次, 求得均值为 Y,以理论值 为 x,经 线性 回归分析 ,得 回归方程 为:Y 0.9905x+ 0.0398,R2— 0.9999,本试剂 Mb浓度在 500 ng/ml范 围内线性 良好 。 3 讨论 AMI是指冠状动脉急性闭塞 ,血流中断,所引起的局部心肌的缺血 性坏死 ,是临床常见的急性重症疾患 ,其预后有赖于早期诊断和适宜的 治疗。诊断心梗指标的研究近年来 已成为国内外医学界最热 门的话 之一。而肌红蛋 白作为诊断 AMI的敏感指标 ,其临床应用价值也得到 相应的研究 ],Mb与 cTnI联合应用可提高其特异性 ,被认为是 当前 早期诊断 AMI的最佳搭配之一 ]。目前最常用 的方法是免疫比浊法 和化学发光免疫分析法 ,这两种方法的性能国内学者进行过很多报道和 评价[s--7]。本文将 日立 7600全 自动生化仪、Mb试剂,配套标准品,组 成一个新的检测 Mb的检测系统 ,采用 NCCLS标准化评价方案对乳胶 增强免疫 比浊法测定 Mb试剂进行评价,结果显示,该方法 Mb在 500 ng/ml内线性范围良好,批 内 CV%< 6.0 ,批间 CV < 7.0 。Hb ≤4.0 g/L、胆红素≤ 400~mol/L、类风湿子≤ 2000 IU/L对测定无影 响;与日本原装试剂比对具有 良好的相关性。该方法是利用包被在乳胶 上的抗 人 Mb抗体与 Mb抗原反应产生浊度 ,其浊度与 Mb浓度成正 比。该法在 HITACHI 7600全 自动生化分析仪上有较高的精密度,良 好准确度 ,较宽线性范围,在抗干扰方面也有良好操作性能 ,可见本法完 全可符合临床检验使用要求。 % % % % 蝽 % mⅢ Ⅲ呲 医学彩像与检硷 2011年5月 第24卷 第5期 医学信息 i 前 S 抗原与 HBV—DNA在乙型肝炎病毒检测中的相关性讨论 赵莉平 权志博 【摘要】目的:通过对乙肝病毒前 s1抗原与 HBV~DNA的检测进行对比分析 ,从而对其相关性进行讨论 。方法:采 用 ELISA 法检测 126份 患 者血清标本前 s1抗原、乙肝表面抗原(HBsAg);采用荧光定量 PCR法检测 HBV—DNA。结果:对 126份 HBsAg阳性的血清标本进行检测及分析 发现,前 s1抗原阳性的血清标本 HBV—DNA的检 出率为 65.9 ,前 s1抗原 阴性的血清标本 HBV—DNA 的检出率为 24.4 ;HBV—DNA 阳性 的血清标本前 s1抗原的检 出率为 75.8 ,HBV—DNA 阴性的血清标本前 s1抗原的检出率为 58.3 。结论 :前 s1抗原与 HBV—DNA 密切相 关, 其阳性可作为 HBV复制的一个重要依据,结合 HBV—DNA的检测能较为准确地检测病毒在机体 内的复制状况,一定程度上反映了机体感染 HBV 的传染性的强弱,其对乙肝的早期诊断具有重要意义,有利于临床分型、治疗。 【关键词】前 S1抗原 ;HBV—DNA;乙肝表 面抗原;相关性 【中图分类号]R446.11 【文献标识码】B 【文章编号]1006—1959(20l1)05—0275—01 我国 HBV感染 的发病率 已高达 10 ,且 HBV感染是引起肝硬化 及肝细胞癌的重要因素,因此 HBV感染的早期诊断及其传染性强弱的 检测尤为重要。目前 认为病 毒在机体内的拷贝数越高其传染性越强 。 在 HBV感染 中,HBV—DNA 检测 阳性 通常 作为 HBV复 制 的金标 准[1]1。本实验 以 HBV—DNA的 PCR结果 为基准 ,来讨论 Pre— S1抗 原与 HBV—DNA复制的相关性。 1 材料 与方 法 1.1 材料 1.1.1 血清标本 :来源于 126例 2010年 8月至 20l1年 2月陕西 中医学院第一附属医院门诊及住 院的乙型肝炎患者。 l_1.2 试剂和仪器 :血清乙肝表面抗原 (HBsAg)测定:试剂购 自 上海科华生物技术有 限公 司提供的 EI IsA试 剂盒。前 SlAg测定 :试 剂购 自上海阿尔 法生物技 术有 限公 司,采用双抗 体夹 心 ELISA法 。 HBV—DNA测定:试剂购 自广 州达安 公司提 供,检 测采用 荧光定 量 PCR法。酶标仪型号为 DG一3022A,PCR扩增仪型号为 PE一9000。 1.2 方法 1.2.1 将待检血液标本 37℃温浴 10分钟,然后 3000r/min离心 5分钟,取上层血清 ,严格按 照仪器及试剂说 明书操作,分别进行 HB— sAg、Pre--s1抗原及 HBV—DNA定量检测。 1.2.2 HBV—DNA定量结果判断标准 :HBV—DNA≥10s copy/ ml为阳性 ,HBV~DNA< 10 copy/ml为阴性 ;HBsAg、Pre— s1Ag结 果判断标准 :样品 OD值 S/CO≥1者为阳性,样品 OD值 S/CO
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