正交设计法优选复方咪康唑乳膏处方

中国药师 2008年第l1卷第3期 Ct1ina Pharmac ist 2008，V()】．1 1 No．3 表 5 溶化性得分 表 6直观分析 ，RB>RA>RD，影响因素的优先顺序为 B>A>D，最佳成型工艺为 A2B2DI。因此，最佳成型工艺为 浸膏粉：可溶性淀粉 =1：3，用 70％乙醇作为润湿剂 ，浸膏粉 水分含量应当控制在1．5％左右。 将表 6数据用正交试验助手 Ⅱ软件包处理，见表 7。 表 7 综合评价方差分析 正交设计法优选复方咪康唑乳膏处方 盛国荣 (南通市皮肤病性病防治所 江苏南通226006) 2．6 正 趸验 证 试 验 按照最佳成型工艺的方案进行验证 ：分别取 10 g的浸 膏和 30 g的可溶性淀粉各 3份 ，按 A B D 成型条件进行试 验 ，按上述评分标准，其综合得分为 87。其结果与正交试验 相一致，表明优选的成型工艺合理、可行。 3 讨 论 颗粒剂的制备方法目前有：『I1药提取液喷雾=F燥后干法 制粒 、流化喷雾干燥制粒法 、以及可溶性淀粉、甘露醇、乳糖、 微晶纤维素或可溶性糊精作为辅料制粒等方法。根据治咽 颗粒浸膏的特点，我们采用加辅料制粒的方法。 因为治咽颗粒药方 中的麦冬 、桔梗含有大量的多糖，而 且甘草本身味甘，所以在其颗粒剂处方中未加矫 味剂，但其 口感 良好。最佳成型工艺所得的 日服j{j量为38 g，该 日服用 量基本可以满足临床和相关病人的需求。通过稳定性实验 证实该法制得的治咽颗粒无论是在高温、高湿还是强光照射 的条件下其稳定性良好。 、 综上所述 ，治咽颗粒成型工艺为 ：药材提取液 55℃减压 浓缩，冷冻干燥，浸膏粉的水分含量应该控制在1．5％左右； 取浸膏粉 1份 、可溶性淀粉 3份，混匀，用适量的70％乙醇润 湿制成软材 ，制粒，烘干，整粒即得。 参 考 文 献 1 张光杰 药用辅料应用技术[M]．北京：巾网科技“；版社，t99 23，69．70 2 酋维安，蒙毅，黄品莲．正交法试验比较 草浸膏的提取工艺[J]．中国 中药杂志，t994，t9(5)：283-284 3 伞⋯丛，陈学静，土忠壮．降精冲剂的制备 I 艺研究[J] 中成药，t999， 2I(3)：t10—1t2 (20o7-07-06收稿 20074)8-24修旧) 摘 要 目的：筛选复方咪康唑乳膏处方中最佳药物用量。方法：采用正交试验设计法，考察不同处方的复方咪康唑乳膏治 疗豚鼠皮肤石膏样毛癣菌感染模型的作用和体外抑菌效果，根据考察数据设计最佳处方 结果：复方咪康唑乳膏的最佳处方 为每 l 000 g乳膏中含氯霉素 10 g，薄荷脑20 g，硝酸咪康唑 20 g，月桂氮革酮30 g。结论：正交试验设计法优选复方咪康唑乳 膏的，方法可行，收效满意 关键词 正交设计；复方咪康唑乳膏；处方筛选；石膏样毛癣菌感染模型；抑菌试验 中图分类号：R978，5 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2008)03-0307-04 Optimization the Formula of Compound M iconazole Cream by Orthogonal Test Sheng Guorong(Nantong Clinic for Dermatosis and Venereal Disease prevention，Jiangsu，Nantong 226006，China) 基金项目：南通市指令性社会发展科技汁划项目(编 号$2007026) 作者简介：盛国荣，男，副主任药师 ，主要从事医院新制剂研发工作。 Tel：13615202386 E-mail：sgr85682366@126．C0i"H 维普资讯 http://www.cqvip.com www·zgys·org 研究 ABSTRACT objective：To choose the best formula for compound miconazole cream．Method：Orthogonal experiment was used to study the clinical effects of different form ula to treat of trichophyton gypseum infection in guinea pig model and the effect of extraorgan bacteriostasis was studied．The best form ula was designed according to the result of these studies．Result：The form ula was chloromy． cetin 10 g，menthol 20 g，miconazole nitrate 20 g and laurocapram 30 g per 1 000 g cream．Conclusion：The design of the formula is reasonable and proves effective． KEY W ORDS Orthogonal design；Compound miconazole cream；Form ula optimization；Trichophyton gypseum infection model；Bac— teriostasis test 手足癣、体股癣等浅部真菌病是皮肤科的常见病、多发 病，临床治疗大多选用咪唑类抗真菌药，且多以局部外用为 主，疗效确切。但由于浅部真菌病常伴有不同程度的细菌感 染⋯，搔抓时可增加感染的程度，需配伍抗菌药物联合治 疗l】l2 。笔者根据浅部真菌感染性皮肤病的发病机制以及 临床表现并结合多年的临床治疗经验，以硝酸咪康唑、氯霉 素、薄荷脑为主要成分，并辅以透皮促进剂，研制了皮肤科外 用制剂复方咪康唑乳膏。为了选择最佳处方 ，达到控制真 菌、细菌感染、不良反应小的治疗 目的，本文采用正交试验设 计法 J，并以豚鼠皮肤石膏样毛癣菌感染模型的治疗效果 和体外抑菌试验结果为指标进行了试验研究。 1 试验 1．1 试 药 硝酸咪康唑(徐州恩华药业有限公司，批号：060620)，氯 霉素(南京 白敬宇制药有限责任公司，批号：061109)，薄荷脑 (南通薄荷油厂有限公司，批号 ：060702)；月桂氮革酮(南京 海霞精细化工有限公司，批号：20051010)，复方咪康唑乳膏 (本所制剂室)。 1一 动物 白色豚鼠，300～400 g，雌雄各半(南通大学医学院实验 动物中心提供 ，生产许可证 ：SCXK2002-0019)。 1．3 菌种和培养基 石膏样毛癣菌(中国医学科学院皮肤病研究所提供 )， 金黄色葡萄球菌(江苏省疾病预防控制中心提供)，培养基 (中国药品生物检定所提供)。 2 方法与结果 2．1 处方因素及其水平的选择 2．1．1 因素水平的确定 根据预试验，处方由硝酸咪康唑、 氯霉素、薄荷脑 、月桂氮革酮和 o／w乳膏基质组成。前 3种 药物对疾病治疗起主要作用，试验时每个因素用4个水平， 月桂氮革酮主要起透皮促进作用，试验时用2个水平，各因 素具体试验的水平，见表 1。 表 1 因素水平表(1 O00g乳膏中药物含量／g) 2．1．2 各 因素水-,y-~选择 表 1是一个4。x2 的试验，拟 选用 L (4。×2 )的正交表。因在表 1中每个因素的水平都 是由小到大按顺序排列的，按正交表试验，所有 1水平要碰 在一起，这种极端的组合易增加试验误差，因此本文对起主 要治疗作用的前3个因素的水平进行了随机化。见表2。 表2 随机化因素水平表 2．2 豚鼠皮肤毛癣菌感染模型的治疗试验 2．2．1 菌液制备 取石膏样毛癣菌种恢复其致病力，接种于 沙堡琼脂斜面试管 ，26℃培养 7～10 d后，用接种钩取成熟 菌落，加到含0．1％吐温一80的0．9％无菌氯化钠溶液 中，制 成约(1～5)x 10。cfu·ml 的孢子混悬液备用L6 J。 2．2．2 豚 鼠感染模型的制备 取白色豚鼠 120只。用 10％ 硫化钠霜背部脱毛，脱毛面积约 5 am x 6 am。24 h后用细纱 纸轻轻磨擦去毛皮肤 。在去毛区中央制备有轻微出血的粗糙 面，面积约2 am x2 am，将已制备好的石膏样毛癣菌混悬液 用棉签均匀地涂抹于破损皮肤区，每天观察皮肤感染情况， 接种菌液 5～7 d后，选择接种部位出现类似人体体癣症状 (如局部红肿、渗 出、皮肤出现鳞片样改变)的豚 鼠，进行真 菌学检查(包括直接镜检和培养)为阳性后，确定造模成功 ， 挑选其中造模质量较高的80只豚鼠用于试验治疗。 2．2．3 用药剂量设置 7 J 与人用量等效时，豚 鼠用量为 1．73×10 am x0．25 g／5 am x0．031÷532 am =0．25 g／5 am 。式中：1．73×10 am 为人体表面积，0．25 g／5 am 为 使用的推荐剂量，0．031为豚鼠与人按体表面积折算的等效 剂量换算系数，532 cnl 为豚鼠的体表面积。 2．2．4 治疗方法 将上述 80只造模豚鼠随机分成 16组 ， 每组 5只，分笼存放并编号，按表 3试验号中对应的处方药 物用量制备的复方咪康唑乳膏在上述相应编号的每只豚鼠 皮损处涂药 ，用量为0．05 g·am～，bid。局部涂药时，至少应 超过皮损边缘0．5 am，共给药4周，治疗期间，每隔1周记录 感染部位的皮损程度 ，同时观察受试动物反应。 2．3 对金黄色葡萄球菌的抑菌作用 2．3．1 菌液制备 取经 35℃培养24 h的金黄色葡萄球 菌的肉汤新鲜培养物 1 ml，加入 9 ml 0．9％无菌氯化钠溶液 中，10倍系列稀释至使菌数约为 100～200 cfu·ml 的菌液。 取此菌液 1 ml注入直径为9 am的平皿中，立即倾注营养琼 脂培养基 25 ml混匀并均匀摊布，35℃培养 24 h观察 ，在整 个碟底可见到金黄色、圆形凸起、边缘整齐的菌落生长。 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药师 2008年第11卷第3期 China Pharmaeist 2008，V。1．11 N。．3 2．3．2 抑菌试验 分别取表 3试验号中对应的处方量制 备的复方咪康唑乳膏 1 g加纯化水 5 ml溶解制成供试液 ，用 直径 12 mm消毒滤纸片分别浸入上述供试液 中，取出沥干 后分别贴于菌碟中，35℃恒温 24 h，观察抑菌圈情况 ，每一 处方共 5只菌碟 ，抑菌圈取 5只菌碟平均数。 2．4 评价标准 为了便于埘最佳处方提供评价依据，本文对豚鼠皮肤毛 癣菌感染模型的治疗作用和体外抑菌效果的试验数据分别 进行了分级量化评定。 2．4．1 豚鼠感染模型皮损分级评分 以豚鼠皮肤感染的 损害程度为判断标准，分为4级。即：0级 ，去毛皮肤无任何 感染迹象 ，皮损分数记为 0分 ；I级，接种真菌部位出现少量 红斑与丘疹，色泽淡，皮损分数记为 1分；Ⅱ级，红斑面积大 ， 伴脱屑或丘疹范围大，皮损分数记为 2分；Ⅲ级 ，炎症反应明 显，有严重红斑，局部渗出或脓肿 ，有鳞片样改变，皮损分数 记为 3分。治疗效果以Y。表示，即 Y。=(治疗前积分值 一治 疗后积分值)／治疗前积分值 X 100％，优为 Y ≥90％，良为 90％ >Yl>t60％，中为 60％ >Y】>t30％，差为 YI<30％ 2．4．2 抑菌试验的量化评分 体外抑菌试验考察药物的 抗菌效果，观察抑菌圈的直径 ，以 Y 表示 ，优为 Y 40mm， 良为40mm>Y2≥25ram，中为 25ram>Y2≥15mm，差为 Y2< 15mm 。 2．5 正 交试验 方案与结果 正交试验方案与观察结果 ，见表 3。 表 3 正交试验方案与结果 编号 A B C D YI Y2 由表 3可见，以豚鼠毛癣菌感染模型的治疗作用为评价 指标时，各因素对结果的影响大小顺序为 C>A>B>D，不 同因素内各水平对结果的影响强弱为 A >A >A。>A，；B >B3>B1>B2；c3>CI>C2>C4；DI>D2。其最佳因素水平 组合为：A B C，D。。在以体外抑菌效果为评价指标时，各因 素对结果的影响大小顺序为 A>B>C>D，直观的最佳因素 水平组合为：A。B C。D。。两个指标的差异为 C因素，即硝酸 咪康唑的用量。 2．6 方差分析 将表3的 Y 值和 Y 值进行方差分析 ，见表 4。 表4 方差分析 注 ：F(】 ． 05(3,5) = 5．41，F0 0】(3 ， 5) 12．06，F0 05(I ． 5) 6．61， Fo 0 Jf】 5) 16．26。 由表4可见，当以豚鼠感染模型的治疗作用为评价指标 时，因素 c对结果有极显著性差异(P<0．01)，影响强度及 最佳因素水平组合均与直观分析结果相一致 ，即 C>A>B >D和 A B C，D 。以抑菌效果为评价指标时，仅因素 A对 结果有极显著性差异(P<0．01)，而因素 B、C、D对结果均 无明显影响(P>0．05)。综合直观分析和方差分析 ，最佳因 素水平组合为：A B C D 。 2．7 优 选处方的验证 根据筛选结果，按最优组方 A B C，D。制备 3批复方咪 康唑乳膏，以验证对豚鼠皮肤石膏样毛癣菌感染模型的治疗 作用和体外抑菌效果，见表 5。 表5 优选处方的验证 由表 5看出，最佳处方制备的复方咪康唑乳膏对豚 鼠 皮肤石膏样毛癣菌感染模型具有 良好的治疗作用 ，皮损消退 率均 >90％，体外抑菌试验也显示 良好的抗菌效果，抑菌圈 直径均 >40 mm，都达到了预定评价指标要求。 3 讨论 根据试验目的，治疗豚鼠皮肤石膏样毛癣菌感染模型的 作用是主要的观察指标，而体外抑菌效果属兼顾、从属性指 标，试验目的是能较好控制浅部真菌感染性皮肤病混合或继 发细菌感染的前提下，充分发挥抗真菌感染的作用。由试验 结果和相关分析来看 ，A、B两因素均以第 4水平为最佳，D 因素以第 1水平为好，在治疗豚鼠感染模 型中 C因素以 C 4 4 4 7 2 9 4 3 6 7 4 2 5 6 4 加 2 2 2 2 2 2 2 2 踟 眦 舢 2 3 4 2 4 3 3 4 2 4 3 2 强 孤 9 7 4 5 7 O 4 3 2 3 4 2 3 4 2 3 4 2 3 4 孤珏 2 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 2 4 5 6 7 8 9 ¨ R R 维普资讯 http://www.cqvip.com www·zgys·org 研究报告 为最佳，且影响最突出(P<0．01)，在体外抑菌试验中以C 为最好，如取 C 时值为28．5，取 C，时，值为28．0，差异无显 著性，都能满足试验要求。因此经综合考虑 ，最佳因素水平 组合为：A4B4C3D1。 由试验结果和分析可知 ，复方咪康唑乳膏最佳处方为每 1 000 g乳膏中含氯霉素 10 g，薄荷脑20 g，硝酸咪康唑 20 g， 月桂氮革酮30 g。各因素选出的最佳水平，除月桂氮革酮在 试验中只安排了2个水平，评选时2者选1外，其余对治疗 起主要作用的三个因素的最佳水平都处于试验方案的中间， 说明试验方案中各因素水平的确定是合适的。 硝酸咪康唑对许多致病真菌的深部、浅部感染均有良好 的抗菌作用，对葡萄球菌等革兰阳性菌有抑菌作用 J，薄荷 脑具有局部 的止痛、止痒和 收敛、温和 的防腐和抑 菌作 用 ，氯霉素为广谱抗菌药 ，与薄荷脑可协同起到抑制细 菌感染以及由于瘙痒所致皮肤损害而引起继发感染的作用。 以上药物合理配伍制备成本乳膏治疗皮肤浅部真菌病，特别 是混合细菌感染性浅部真菌病可起到标本兼治的作用。 本试验采用正交试验设计法优选复方咪康唑乳膏的配 方，以对豚鼠皮肤石膏样毛癣菌感染模型的治疗作用和体外 抑菌效果作为评价指标，采用统计学方法分析计算，较好地 筛选出复方咪康唑乳膏的最佳处方 ，方法可行 ，收效满意，为 临床应用提供了试验依据。 参 考 文 献 1 靳培英，皮肤病药物治疗学[M]．北京：人民：[J生出版社，2004．56-57 2 赵辨．临床皮肤病学[M]．第3版．南京：江苏科学技术出版社，2003．421． 425 3 施峰，王光忠，刘焱文．正交设计法优选红花渗漉工艺[J]．中国药师，2007， 10(1)：13—14 4 方积乾．医药数理统计方法[M]．第 2版．北京：人民教育出版社，1995． 267-276 5 陆鸿．_T：交试验设计[J]．河南预防医学杂志，1999，10(2)：63-65 6 郭宁和，吴绍熙，沈永年，等，特比奈芬治疗豚鼠皮肤癣菌感染的疗效[J]， 新药与临床，1996，15(6)：339—341 7 徐淑云，卞如濂，陈修．药理实验方法学[M]．第3版．北京：人民卫生出版 社 ，2002．202-203 8 郭江江，张春瑛．咪唑类抗真菌乳膏微生物限度检查方法学验证[J]．中国 药师，2007，10(6)：602—603 9 陈新谦，金有豫，汤光．新编药物学[M]．第 l5版．北京：人民卫生出版社， 2o03．86—124 lO王筠默．中药药理学[M]上海：一J：海科学技术出版社，1985．126—127 (2007-06-04收稿 2007-08-20修回) 多索茶碱、洛贝林、尼克刹米、甲泼尼龙琥珀酸钠注射剂配伍稳定性研究 徐帆 冯恩富 (成都军区昆明总医院 昆明650032) 赵正英 (昆明医学院) 摘 要 目的：考查多索茶碱、尼克刹米、洛贝林、甲泼尼龙琥珀酸钠注射剂的配伍稳定性。方法：观察及测定4种注射剂在 5％葡萄糖氯化钠注射液和0．9％氯化钠注射液中配伍后室温放置8 h内的外观、不溶性微粒及 pH。采用HPLC法测定配伍液 室温放置 8 h内的含量变化。结果：与配伍0h比较 ，配伍液放置 8 h内的外观色泽、不溶性微粒及含量均无明显变化，pH略 有变化。配伍液中各药含量在 8 h内保持在90％以上，且配伍8 h内无新物质产生。结论 ：多索茶碱 、尼克刹米、洛贝林、甲泼 尼龙琥珀酸钠注射剂在 5％葡萄糖氯化钠注射液和0．9％氯化钠注射液中配伍后于室温放置 8 h内质量基本稳定。 关键词 多索茶碱 ；尼克刹米 ；洛贝林；甲泼尼龙琥珀酸钠；配伍；稳定性 中图分类号：R942 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008-049X(2008)03-0310-04 Stability of Doxofylline Injection，Nikethamide Injection，Lobeline Injection and Methylprednisolone Sodi- am Succinate for Injection in Compatibility Solutions Xu Fan，Feng Enfu(Kunming General Hospital of Chengdu Military Region，Kunming 650032，China)；Zhao Zhengying(Kunming Medical College) ABSTRACT Objective：To study the compatible stability of Doxofylline for Injection，Nikethamide injection，Lobeline Hydrochoride injection and methylprednisolone sodium succinate for Injection．Method：The changes in appearance，particles and pH of the mixture of the four injectioBS in 5％ glucose and sodium chloride injection and 0．9％ sodium chloride injection within 8 hours at ambient tem— Derature were observed．the concentrations of the mixture of the four injections in 5％ glucose and sodium chloride injection and 0．9％ sodium chloride injection were determined by HPLC within 8 hours．Result：Compared with the solutions at 0h of mixing，no signifi— cant changes were noted in color，clarity，particles and concentration within 8 hours mixing．However，there were a few changes in their pH value8．Conclusion：The mixture of doxo~rlline for Injection，nikethamide injection，lobeline hydrochoride injection and methylprednisolone sodium succinate for injection in 5％ glucose and sodium chloride injection and 0．9％ sodium chloride injection is stable in quality within 8 hours mixing at ambient temperature． KEY W ORDS Doxofylline：Nikethamide；Lobeline；Methylprednisolone sodium succinate；Compatibilitiy 作者简介：徐帆，男，主管药师，主要从事临床药学。 Tel：(0871)477493 E—marl：XU～fan@126．com 维普资讯 http://www.cqvip.com