正交设计优选复方环磷腺苷乳膏处方中药物用量的研究

中国药事 2007年第21卷第 6期 407 药品检验 ·药品质量 正交设计优选复方环磷腺苷乳膏处方中药物用量的研究 盛国荣 (江苏省南通市皮肤病性病防治所，南通 226006) 摘要： 筛选复方环磷腺苷乳膏处方中最佳药物用量。采用正交试验法，考察不同处方制备的乳膏治疗盐 酸普萘洛尔所致豚鼠背部皮肤银屑样皮损模型的效果，根据考察数据设计最佳处方。该处方设计合理，制 备的复方环磷腺苷乳膏对实验性银屑病动物模型具有良好的治疗作用。 关键词： 复方环磷腺苷乳膏；动物模型；正交试验法；处方筛选 中图分类号：R954．73 文献标识码：A 文章编号：1O02—7777(2007)06—0407—03 Orthogonal Experimental Study of Optimization for Ingredient of Compound Adenosine Cyclophosphate Cream Sheng Guorong(Nantong Clinic for Dermatosis and STD，Jiangsu Province，Nantong 226006) ABSTRACT For choosing the best formula of compound Adenosine Cyclophosphate cream，orthogonal experiment was used for studying the clinical effects of different formula on treating psoriasis vulgaris． The best form ula was designed according tO the result of this study． The design of the form ula is reasonable and the clinical effect of the cream treating psoriasis vulgaris is good． KEYWORDS compound Adenosine Cyclophosphate Cream；Animal model；Orthogonal experiment； form ula optimization “复方环磷腺苷乳膏[1]处方由环磷腺苷、维 A 酸、尿素以及促透剂月桂氮革酮和二甲亚砜等组 成，目前正在进行临床前研究，本文是处方用量筛 选的实验研究。为了选择最佳处方的药物用量，从 而达到治疗银屑病疗效好，副反应小的目的，采用 正交试验[2]的方法并运用实验性银屑病动物模型对 此进行了研究。 1 实验 环磷腺苷 (江苏省南通宏慈制药有限公司，批 号：20050202)，维 A酸 (东北制药总厂，批号： 20050615)，尿素(湖南省芙蓉联合制药厂，批号： 0511020)，复方环磷腺苷乳膏(本所制剂室)。 清洁级昆明种豚鼠，体重 400~450g，雌雄兼 有 (南通大学基础医学院实验动物中心)。 2 试验因素及其水平的选择 2．1 试验因素的确定 近年来关于银屑病皮损内缺乏环磷腺苷的研究 较多[3]，但治疗银屑病的环磷腺苷外用制剂尚未见 面市。《中国药典》[4]收载有尿素乳膏和维 A酸乳 基金项目：江苏省南通市社会发展科技项目 (编号：S2006029) 膏，其规格尿素乳膏有 10 g：0．1 g，10 g：1 g， 10 g：2 g三种，维 A酸乳膏有 20 g：20 mg。本 处方中影响银屑病治疗效果的主要是这 3种药物， 考虑到月桂氮革酮和二甲亚砜具有药物透皮促进作 用，可提高药物的治疗效果，试验中也作为考察因 素。为了使各种药物的配方用量筛选得精确些，试 验时尽量使各药物的水平数多一点。随着各因素水 平数的增多，试验的次数也要相应地增加。实验中 既要考虑各因素的水平数，又要考虑动物实验的实 际效果，因此本实验选用L。6(4。×2。)的正交表。 结合 《中国药典》收载的尿素乳膏和维 A酸 乳膏的规格以及环磷腺苷与银屑病关系的理论研究 成果，这 3种药物均安排 4个水平，月桂氮革酮和 二甲亚砜主要起透皮促进作用，因此各安排 2个水 平，并根据临床治疗经验确定各因素试验的水平，见 表 1。 2．2 各因素水平的选择 配方时把因素维 A酸的各个水平随机化，见 表 2。 维普资讯 http://www.cqvip.com 408 中国药事 2007年第 21卷第 6期 表 1 因素水平表 3 实验方法与结果 3．1 实验方法 3．1．1 5 盐酸普萘洛尔乳搽剂的制备 取盐酸 普萘洛尔 5 g置 100 mL量瓶中，加 5O 乙醇 6O mL溶解，再加入月桂氮革酮 ：丙二醇 (1：1)5 mL作混合促进剂，加入聚乙烯吡咯烷酮 5 g为成 膜材料使混匀，最后添加 5O 乙醇至足量，搅匀 即得。 3．1．2 动物模型制作 取体重 400～45O g豚 鼠 120只，雌雄各半，在给药前 24 h将豚鼠背部脊 柱两侧毛脱去，每侧脱毛面积约为 20 cm2，去毛 后 24h检查去毛皮肤是否因去毛而划破，如皮肤受 伤，该动物不作实验用。用于受试的每只动物用玻 璃棒以5 盐酸普萘洛尔乳搽剂涂于豚鼠背部脱毛 皮肤处 (O．1 mL／cm2)，每 日2次，连用 2周。挑 选造模质量较高的即红斑、皮疹较明显的豚鼠 8O 只，并每只造模豚鼠的皮损面积备用。 3．1．3 用药剂量设置[7 与人用量等效时，豚鼠 用量为 1．73×10 cm2×0．25 g／5 cm2×0．031÷ 532 cm2=O．25 g／5 cm2。式中：1．73×10 am2为 人体表面积，0．25 g／5 cm2为使用的推荐剂量， 0．031为豚鼠与人按体表面积折算的等效剂量换算 系数 ，532 cm2为豚鼠的体表面积。 3．1．4 治疗方法 将上述 8O只造模豚鼠随机分 成 16组，每组 5只，分笼存放并编号。按表 3试 验号中对应的处方药物用量制备的复方环磷腺苷乳 膏在上述相应编号的每只豚鼠红斑、皮疹处涂药， 用量为 0．05 g／cm。，每日 2次，模拟人体用药， 每 2天用温水清洗残留乳膏后再涂药，连用 4周后 评价疗效。 3．2 疗效评价 为了使实验结果便于统计，本文采用量化 的数字进行治疗效果评价，即治疗效果 (Y)= (红斑、皮疹消退的面积／治疗前皮损面积)× 100％。 3．3 试验方案和临床观察结果，见表3。 表 3 试验方案与试验结果 试验方案的设计矩阵 试验号 维 A酸 尿素 Y( ) 41．25 46．5O 72．OO 69．75 54．75 59．5O 57．5O 57．75 表 3中皮损消退值为 5只豚鼠皮损消退的平 均值，且只取整数，小数部分四舍五入，表中K。、 Kz、Ks、I<4分别为各个因素试验结果的平均值。 4 试验结果的统计分析 4．1 方差分析 对试验结果采用方差分析的方法，找出影响疗 效的主要因素，并选出最佳的处方水平，方差分析 结果见表 4。 表 4 试验结果的方差分析 铝 弘 卯 ∞ 的 “ 弘 卵 一 耋耋 ． ．一 5 5 5 O 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 5 O 5 O 1 1 2 2 3 3 4 4 1 1 2 2 3 3 4 4 W 3 1 1 3 2 4 4 2 2 4 2 4 1 3 1 3 0 0 0 n H 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国药事 2007年第 21卷第 6期 409 由表 4看出，环磷腺苷各水平的变化对治疗 效果的影响非常显著，尿素、维 A酸、月桂氮革 酮和二甲亚砜的平方和很小，其均方都小于误差项 的均方，认为它们各水平的变化对治疗效果影响不 大，可以和误差项合并，共同计算均方。 4．2 各因素最佳水平的评选 4．2．1 因素环磷腺苷水平的评选 将表 3最下面 的环磷腺苷 k值变化作图，见图 1。 水下 图 环磷腺苷用量与治疗效果关系图 由图 1看出，当环磷腺苷用量由0．3 g增加到 0．5 g时，治疗效果随用量的增加而显著提高，用 量由0．5 g增加到 0．6 g，治疗效果反而有所下降， 因此环磷腺苷选择第 3水平。 4．2．2 其它各因素水平的评选 综合表 3、表 4 进行分析，维 A酸、尿素、月桂氮革酮、二甲亚 砜各个水平的变化对治疗效果的影响都不十分突 出，原则上可以任意选取，但为了使评选尽量准确 些，根据表 3中的k值并结合第 14试验组的结果 选取维 A酸为第 2水平 ，尿素为第 3水平，月桂 氮革酮为第 2水平，二甲亚砜为第 1水平。 5 讨论与小结 本文为临床前研究，因此，选择动物病理模型 进行研究；本文也未做有效率的研究，故未设阴性 对照试验。根据正交实验的设计方案，因素水平确 定以后，应选择 1～2个因素进行随机化，使各因 素水平分布更趋于合理[2]，本文选择用量处于中间 水平的维 A酸作为随机因素。 由试验结果及分析可知，复方环磷腺苷乳膏最 佳处方用量为每 1000 g乳膏中含环磷腺苷 0．5 g， 维A酸 1．0 g，尿素 200．0 g，月桂氮卓酮 30．0 mL，二甲亚砜 50．0 mL。各因素选出的最佳水平， 除月桂氮革酮和二甲亚砜在试验中只安排 了 2个 水平，评选时 2者选 1外，其余 3个因素的最佳 水平都处于试验方案的中间，说明试验方案中各因 素水平的确定是合适的。 银屑病是一种易复发的慢性疾病，常常难以获 得皮损彻底消退的治疗效果和较长期的缓解，所以 治疗应全面权衡药物的临床疗效和不良反应。许多 知名学者认为较安全的策略是将皮损控制在一定的 范围，而不是追求皮损的完全消退[8]。由于银屑病 的高复发率和口服药物的系统性不良反应，提倡对 轻中度寻常型银屑病患者使用具有不同作用机制、 不同作用靶位和不良反应无重叠的药物组成的复方 外用制剂是临床治疗的上策[9]。 目前治疗银屑病的外用药物多以皮质激素制剂 为主，虽在短期内能减轻银屑病的症状，但长期使 用难以避免激素类制剂引起的皮肤萎缩、毛细血管 扩张、多毛、反跳等多种激素性副反应，因而临床 使用受到限制。鉴于激素类药物的副反应以及口服 药物系统性不良反应，本文依据银屑病病因学理论 以及病理学特征，运用环磷腺苷、维 A酸、尿素 等非激素类药物并配伍混合促透剂，研制了复方环 磷腺苷乳膏，适宜作为治疗寻常型银屑病的长期用 药。 本文的实验结果显示，运用最佳处方药物用量 制备的复方环磷腺苷乳膏用于治疗盐酸普萘洛尔药 源性银屑病模型，可迅速改善皮损症状，起到了良 好的治疗作用，为临床应用提供了实验依据。 参考文献： [1] 盛国荣 ，谢 勇，于葆华 ．复方环磷腺苷乳膏质量控制[J]． 中国医院药学杂志 ，2006，26(6)：716 [2] 方积乾．医药数理统计方法 [M]．第 2版 ．北京：人民教 育出版社，1995：267 [3] 赵 辨 ．临床皮肤病学 [M]．第 3版 ．南京：江苏科学技 术出版社，2001：1860 [4] 中国药典 IS]．一部，2005：279，662 [5] 黄 畋，张淑芝，孙 令 ．心得安涂药造成豚鼠耳部银屑病 样病理变化 [J]．中华皮肤科杂志，1991，24(2)；96 [6] C,aylarde P M，Brock A P，Sarkany L P~fiasiform changes Tm gui~ --pig from mpropranol~[J]．Clin F~per l：kmatol， 1978，3(2)：157 [7] 徐淑云 ．药理实验方法学 [M]．第 3版 ．北京：人民卫生 出版社，2001：1860 [8] 韩永智，孙建芳 ．外用药物联合治疗银屑病的进展 [J]． 中华皮肤科杂志，2005，38(3)：192 [9] A1--Suwm~nSN，Feldman SR aear撇 is not a realistic expectation of p~fiasis treatment[J] ．J Am Acad Dermatol，2000，42(5)：796 维普资讯 http://www.cqvip.com