肝肾阴虚证大鼠下丘脑_垂体_甲状腺轴的变化及中药对其调节作用

2001年10月第8卷第10期 中国中医药信息杂志 ·21· 肝肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴 的变化及中药对其调节作用△ 樊蔚虹 岳广欣 任小巧 卢跃卿 唐 宋 (河南中医学院 郑州 450008) 提 要 目的：探讨肝肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的变化及中药对其调节作用。方法：以激怒法制 造大鼠肝肾阴虚模型,研究下丘脑-垂体-甲状腺轴(HPT)各项指标的变化。结果：肝肾阴虚模型大鼠下丘脑TRH增 高,血清TSH、FT3、FT4水平均降低(P<0.05),而血清rT3浓度升高(P<0.05)；运用滋补肝肾方能够减轻这种激怒应 激反应,滋补肝肾方药组各指标与模型组比差异显著(P<0.05),与正常组比较无显著差异,而柴胡疏肝散无明显作 用。结论：下丘脑-垂体-甲状腺轴的部分抑制是肝肾阴虚证形成的关键。 关键词 肝肾阴虚证 下丘脑-垂体-甲状腺轴 Change Which a Rat Model with Yin-diffiency of Liver and Kidney Induced by Slow Irritation on Hypothalamus-Pituitary-Thypoid Gland and Regulatory Effect of Herbs Fan Weihong Yue Guangxin Ren Xiaoqiao,et al (Henan College of Traditional Chinese Medicine Zhengzhou 450008) Abstract Objective: To explore change which a rat model with Yin-diffiency of liver and kidney induced by slow irritation on hypothalamus-pituitary-thypoid gland and regulatory effect of herbs. Methods：To study change of various indexes which a rat model with Yin-diffiency of liver and kidney was made by way of slow irritation. Results：The TRH(thyrotropin-releasing-hormone) of secretion from hypothalamus increase. FT3(3,3',5-traiodothyronine),FT4(3,5,3',5-tetraiodothyronine) and TSH in blood decreased (P<0.05), but rT3 in blood increased (P<0.05), various indexes of nourishing liver and kidney fangyao control group could improved more effective with model group, but it could proved more effective with normol, but chaihushugansan could improved more effective. Conclusion：The key to the question of Yin-diffiency of liver and kidney is a part of restrain in HPT. Key Words Yin-diffiency of liver and kidney； HPT 肝肾阴虚证是临床上常见的复合证型,对于其本质的研 究有诸多报道,但都只反映了这种状态的一个侧面,而从整体 上、本质上反映肝肾阴虚证内涵的研究则鲜有报道。肝肾阴 虚证临床见多汗、喜凉怕热、消瘦、颧红、烦躁不安、多梦、 肌肉震颤等症状,此与现代医学下丘脑-垂体-甲状腺轴功能 紊乱相关。故我们从下丘脑-垂体-甲状腺轴方面较全面探索 该证的本质。 1 实验材料 1.1 实验动物 健康 SD大鼠,雄性,体重 220g±20g,共 33只,河南医科 大学实验动物中心提供,饲养条件为室温 20～28℃,每天黑 暗12h,光照12h,普通饲料喂养。 △河南省教委自然科学基金项目(№.98360003) 1.2 药品 滋补肝肾方：生地黄、熟地黄、北沙参、当归、麦冬、 川楝子、丹参、生麦芽、山药、山萸肉、牡丹皮等；柴胡疏 肝散：柴胡、陈皮、香附、川芎、枳壳、白芍、甘草。上药 均由河南省药材公司提供,滋补肝肾方常规煎煮 3次,滤渣, 浓缩至2.0g/ml(含原药材)。柴胡疏肝散经蒸馏,提取挥发油 后,浓缩至0.75g/ml(含原药材),兑入挥发油。 1.3 主要试剂 游离 3,3’,5-三甲碘原氨酸(FT3)试剂盒、游离甲碘原氨 酸(FT4)放射免疫试剂盒、3,3’,5-三碘甲状腺原氨酸(rT3)放 射免疫试剂盒、血清甲状腺(TSH)放射免疫试剂盒、促甲状腺 激素释放激素(TRH)放射免疫试剂盒,均由北京生物技术所生 产,批号9809。 2 实验方法 ·22· 中国中医药信息杂志 2001年10月第8卷第10期 2.1 分组及造模 按随机数字法将大鼠分为空白对照组(8只),肝肾阴虚 模型组(9只),滋补肝肾方治疗组(8只),柴胡疏肝散治疗组 (8只)。除空白对照组外,余组大鼠均双后肢束缚,固定于盖 网上,每2只一笼,以引起明显激怒,表现为粗叫、扭打和嘶咬, 每日1次,首次维持应激20min,以后隔日增加10min, 共20d, 对照组除不固定后肢外,余处理同其他组。 2.2 给药方法 按人和大鼠体表面积系数换算方法计算,滋补肝肾方治 疗组从造模第 1天起以 20g/(kg·d)剂量灌服滋补肝肾方浓 缩液,柴胡疏肝散治疗组以 7.5g/(kg·d)剂量灌服柴胡疏肝 散,空白对照组和肝肾阴虚模型组灌服生理盐水,剂量为 10ml/(kg·d),共20d。 2.3 取材与制备 于第 21、22d 9：00～11：00将动物处死,处死前 2h间 断给予铃声刺激20min,每次2min,做为新异刺激,为避免时差, 把各组动物配组处死,断头取血。①采血分2管,一管中预先 加入TRH抗灭活剂50μl,放入冰水浴中,采血1～2ml后,摇动, 迅速放回冰水浴中,15min内低温离心,取上清液,放-40℃冰 箱保存,待测 TRH。另一管取血 3～4ml,低温下退缩后离心, 取血清,低温冰箱保存,待测 TSH、FT3、FT4、rT3。②大鼠处 死后,迅速打开颅脑,分离出垂体和大脑,置沸腾的生理盐水 中烧 5min,用小打孔器在大脑腹侧视交叉后,打孔取组织柱 2～3mm(即下丘脑),称重后,加入HCl 1 mol/L 2ml,匀浆1min, 以NaOH 1mol/L 2ml中和,离心后取上清液置-40℃冰箱保存, 待测下丘脑 TRH；将垂体去除后叶后称重,加入 1mol/L HCl 1ml,匀浆1min,以1mol/L NaOH 1ml 中和,离心后,取上清液 置-40℃冰箱保存,待测垂体TSH[1]。 3 结果(见表1) 4 讨论 表1 长期激怒大鼠FT3、FT4、rT3、TSH、TRH的变化及滋补肝肾方对其影响( — x±s,n=8/9) 组 别 血清 FT3(pmol/L) 血清 FT4(pmol/L) 血清 rT3(ng/L) 血清 TSH(μIU/ml) 垂体 TSH(μIU/mg) 血清 TRH(pg/ml) 下丘脑 TRH(pg/mg) 空白对照组 2.12±0.75 7.69±3.67 5.37±2.57 0.82±0.12 1.92±0.67 44.43±5.28 8.23±1.62 模型组 1.04±0.48△△ 3.14±1.23△ 7.68±1.85△ 0.67±0.11△ 1.25±0.39△ 40.22±5.49 21.37±9.09△△ 滋补肝肾方组 1.75±0.45 5.68±1.88 5.65±2.56 0.75±0.12 1.69±0.55 45.00±4.74 11.39±2.92△* 柴胡疏肝散组 1.17±0.43△△ 4.23±1.49△ 7.89±1.94△ 0.67±0.11△ 1.53±0.41 40.78±6.65 13.39±3.17△* 注：与空白组比较,△P<0.05,△△P<0.01；与模型组比较,*P<0.05 普遍认为在应激状态下,各种刺激通过传入神经通路进 入大脑皮层边缘系统,再通过下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴使 肾上腺皮质激素分泌增加,儿茶酚胺、皮质酮水平升高,并抑 制生长和生殖轴,以适应机体需要。最近资料表明,急性脑血 管疾病应激状态下,血清T3、FT3、TSH均下降,T4、FT4无显著 变化[2、3]。有实验证明,束缚应激状态下,大鼠血浆中 T3、T4 明显下降,注入TRH后血浆中T3、T4浓度恢复正常[4]。本实验 结果显示长期激怒状态下,血清 FT3、FT4、TSH均下降,rT3升 高,与以上报道相似,本研究还显示肝细胞核 T3RBmax增高 (另文发表),表明应激状态下存在着HPT轴的紊乱。提示各种 环境、心理应激不仅影响下丘脑肾上腺系统(HPA),而且也影 响到了HPT系统。现代研究表明,肾上腺功能与中医学之肾脏 的某些功能十分相似,应用糖皮质激素塑造肾虚模型的成功 及临床应用糖皮质激素所出现阴虚内热的副反应也说明了这 一点。另外,情绪心理应激从中医脏象理论分析,当主要责之 于肝,肝主疏泄最主要的生理作用之一是和情绪调节相关[5]； 肝脏亦通过影响甲状腺激素的运转、储备、代谢而调节着循 环血中甲状腺激素水平,显示肝脏在影响甲状腺内分泌中占 重要地位[6、7]。应激状态下 HPT、HPA两个系统同时受累,这 也许就是肝肾同源的本质所在。 本实验中,在长期激怒应激状态下,低水平 FT3、FT4与低 水平TSH同时存在,而下丘脑TRH含量却升高,在运用滋补肝 肾药后,大鼠皮毛光泽,活动能力增强,FT3、FT4、TSH恢复正 常或接近正常,说明滋补肝肾方对该轴的功能紊乱有调整作 用。亦说明此轴功能紊乱可能是肝肾阴虚证本质之一。然TRH 变化不明显,可能为激怒应激原长期存在,仍对TRH释放起抑 制作用有关。从中医学角度看,情志以脏腑气血为物质基础, 激怒刺激则主要伤及“肝血”,一方面使肝脏有形之质耗伤, 进而影响甲状腺激素的代谢；另一方面疏泄失常,导致精神情 志的改变,通过神经内分泌系统,进一步影响 HPT系统,说明 HPT轴紊乱是肝肾阴虚证的关键所在。实验中低水平FT3、FT4 未刺激 TSH升高,亦可能与下丘脑、垂体 T3受体(T3R)数量增 多、亲合力增高,而Ⅱ型5'-脱碘酶活性下降有关[8]。故激怒 模型组大鼠呈现出HPT轴受抑制的现象。 本实验显示,长期激怒状态下,血清 FT3、FT4水平降低, 与推测的结果相反,可能是由于机体细胞核 T3R数目增加,亲 和力提高,使T3效应加强的结果,故表现出一种虚性亢奋状态, 其中机理有待进一步研究。 参 考 文 献 1 张新民,沈自尹,王文健,等.补肾对神经内分泌老化调节作用研究 (Ⅰ).中医杂志,1991,37(11)：43 2 刘俊艳,赵淑蓉,王汝圭,等.急性脑血管病患者下丘脑-垂体-甲状腺 轴的功能改变.中华神经精神科杂志,1993,26(1)：31 3 彭 康.乌龙丹治疗脑梗塞及对下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响.中国 中西医结合杂志,1998,18(3)：135 2001年10月第8卷第10期 中国中医药信息杂志 ·23· 乙肝Ⅱ号对小鼠免疫性慢性肝损伤 的抗自由基损伤作用△ 钱涯邻 孙沛毅* 孙 云* (江苏省苏北人民医院 扬州 225001) 提 要 目的：研究乙肝Ⅱ号对免疫性肝损伤小鼠抗自由基的作用及其机理。方法：取异种动物的肝提取物 作为抗原免疫纯系小鼠产生抗肝抗体,形成慢性实验性免疫性肝损伤,观察小鼠血清丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧 化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的变化以及乙肝Ⅱ号对MDA、SOD和GSH-PX变化的影响。结果：乙 肝Ⅱ号组与模型组相比,小鼠血清MDA含量下降,SOD活力上升,GSH-PX活力上升,变化的程度与用药量呈量效关系, 且抗自由基作用优于阳性对照乙肝宁颗粒剂组。结论：乙肝Ⅱ号对免疫性肝损伤小鼠具有抗自由基损伤的作用。 关键词 免疫性肝损伤 乙肝Ⅱ号 谷胱甘肽过氧化物酶 丙二醛 超氧化物歧化酶 Antioxidation of Prescription №. II for Anti-hepatitis B in Experimental Mice with Chronic Immuno-Hepatic Injury Qian Yalin Sun Peiyi Sun Yun (Jiangsu Province Subei Hospital Yangzhou 225001) Abstract Objective：Prescription №.Ⅱ for anti–hepatitis B(PⅡAHB),was studied for its antioxidation in immono-hepatic injury. Method：The chronic hepatic injury was induced by injection with antigen from liver extraction of heterogenous animal. The blood samples were taken and measured for the level of malonyldialdehyde(MDA), and for the change of superoxide dismutase(SOD) in blood and glutathione peroxidase(GSH-PX) in blood. Result：Compared with control animals, PⅡAHB showed some inhibitory effect on changes of SOD,MDA and GSH-PX. Therefore the hepatic injury was alleviated. Conclusion：It is suggested that the therapeutical action of PⅡAHB on hepatitis B be associated with its antioxidation . Key Words hepatic injury； Prescription №.Ⅱ for anti–hepatitis B； glutathione peroxidase； malonyldiadehyde； superoxide dismuase 本实验采用乙肝Ⅱ号防治由异种动物肝提取物作为抗原 免疫纯系小鼠产生抗肝抗体发生慢性实验性肝损伤,同时探 讨自由基和脂质过氧化反应在慢性敏感损害与肝疾病发生发 展过程中的变化,以及乙肝Ⅱ号对慢性肝损害过程中脂质过 氧化改变的影响,并与国家保护中药乙肝宁颗粒剂(长沙九芝 △江苏省科委指导性课(BS96355) *扬州大学医药研究中心 堂制药厂生产)进行比较,以寻求针对性治疗乙肝病人的有效 药物。 1 实验材料 1.1 药品与试剂 弗氏完全佐剂：液体石蜡5.5ml,无水羊毛脂1.5ml,100 ml/ml的卡介苗 0.375ml(卫生部上海生物制品研究所提供, 批号99-1-11)研磨成乳剂；肝提取物：以 SD大鼠(扬州大学 医学院动物中心)断头处死 , 用生理盐水从门静脉冲洗肝 4 刘振秀,王秀荣.促甲状腺激素释放激素对抗大鼠束缚应激的作用.中 国医学科学院学报,1992,14(2)：118 5 陈家旭,杨维益.神经-内分泌-免疫网络研究概况及其与中医肝脏关 系的探讨.北京中医药大学学报,1995,18(4)：7 6 罗振麟.肝脏与甲状腺.临床肝胆病杂志,1986,2(2)：79 7 钟永亮,唐容德.肝主疏泄与甲亢病机的关系初探.湖南中医学院学 报,1994,14(3)：14 8 卢跃卿,任小巧.肝肾同源与神经内分泌免疫网络关系探讨.实用中西 医结合杂志,2000,(16)：385 9 张安琪,马 泰.不同组织 T3的来源、调节及病理生理研究进展. 青 岛医学院学报,1987,23(3)：75 (收稿日期：2001-06-06)