大豆异黄酮滴丸的制备工艺及质量标准

第32卷第 1O期 2007年 5月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica Vo1．32，Issue 10 May，2007 大豆异黄酮滴丸的制备工艺及质量 蒋蔡滨 ，林亚平 ，余丽梅 (1．贵阳中医学院 中药系，贵州贵阳550002； 2．贵州省食品药品监督管理局，贵州 贵阳550004； 3．遵义医学院 药理教研室，贵州 遵义563000) [摘要] 目的：确立大豆异黄酮滴丸的最佳成型工艺和研究建立大豆异黄酮滴丸剂质量标准。：采用均 匀法和单因素比较的方法，对提取物与基质的用量，药料温度，滴距等进行优选。采用薄层色谱法对大豆异黄 酮提取物及滴丸中的大豆异黄酮进行定性研究。以uV法在262 nm测定原料及滴丸中大豆异黄酮含量。结果：根 据实验所确定的工艺，制备的3批样品，符合《中国药典>>2005年版关于滴丸的规定。大豆异黄酮可以用薄层色谱 鉴别；大豆异黄酮在0．407—4．072 Ixg·mL 线性关系良好，r=0．999 8；高、中、低浓度加样回收率分别为96．54％， 97．27％，97．2l％，RSD分另IJ为 1．3％，0．71％，0．78％(rt=3)。结论：优选的制备工艺方法简便可行，所建立的质量 标准能检测和评价滴丸及原料中大豆异黄酮含量，且方法简便、快速、准确、稳定可靠。 [关键词] 大豆异黄酮；金雀异黄素；滴丸；均匀设计法；制剂工艺；紫外分光光度法；薄层色谱法 [中图分类号]R 943 [文献标识码]A [文章编号]1001-5302(2007)10-0906-04 大豆异黄酮(soybean isoflavones，SIF)是一类从 大豆中分离提取的活性成分，特别是其中的金雀异 黄素(genistein)和大豆素(daidzein)，具有抗氧化、 抗肿瘤、改善心血管功能、抗骨质疏松等活性⋯。 但大豆异黄酮在水中溶解性差，本研究考虑用固体 分散法制备成高效高生物利用度剂型——滴丸剂使 用。作者在 自行设计的滴丸装置上 ，重点考察了 药物与基质的配比、基质种类、料液温度、滴距 4个 因素的影响，以丸重差异、圆整度为测评指标，用均 匀设计法 对制剂工艺诸条件进行优选，经重复试 验验证，确定了最佳工艺条件；采用紫外分光光度法 对大豆异黄酮滴丸中的大豆异黄酮进行了质量控制 研究。 1 制备工艺研究 1．1 实验条件 大豆异黄酮提取物(由遵义医学 院药理教研室提供)；金雀异黄素(SIGMA公司)； PEG(天津 市科 密欧化 学试 剂开 发 中心，批号 20040619)；95％乙醇 (成都金 山化学试剂有限公 [收稿日期】 2006-01一10 [基金项目】 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目[黔 省专合字(20o5)143号] [通讯作者】 ‘林亚平，Tel：13608536440，E—mail：lypgz@126． COrfl · 906· 司，批号 20050426)；液体石蜡(重庆北碚精密化工 厂，批号20040618)；752型紫外光栅分光光度计；超 级恒温器；METIER AE240电子分析天平；色谱用硅 胶 G(青岛海洋化工厂)；所用玻璃仪器均已校正。 1．2 制剂工艺条件优选 均匀设计表 U (6 )由微 机程序 JYSYSJ提供。相应的实验实施方案见表 1。 表 1 试验方案 按试验方案称取计算量基质(各号实验药物与 基质总重为 10 g，制成滴丸约200粒)，水浴熔融后， 与计算量药物搅拌均匀，迅速转移至滴丸装置的贮 液器中；贮液器夹套用各试验相应料液温度的恒温 热水循环保温；固定其他因素为：冷却液液体石蜡 (相对密度0．835～0．855)，冷却柱长1．2 in，冷却剂 温度 10～15℃ ；滴 口内外径(1．35／3．15 mm)，滴 速以滴丸每次能均匀滴出的最大速度；然后按表 1 所示各实验条件滴制；滴制完成后，取出滴丸，沥于， 用滤纸吸除表面冷却剂，装瓶密闭备用。 维普资讯 http://www.cqvip.com 第32卷第 1O期 2007年5月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medics Vo1．32，Issue 10 May，2007 从各号试验样品中，随机抽取 1O粒，称取 1O粒 总重、各粒丸重( )，计算平均丸重、标准差及 RSD； 并测量各粒滴丸的最长径( )和最短径(S)，用下列 公式处理后，取 值(RSD)作为丸重差异的测评值， y，(S／L)作为圆整度的测评值。相应结果见表 1。 将均匀设计方案中各试验各变量的相应取值及 各对应 yl，y2值输入计算机进行二次多项式逐步回 归(因子选人剔除阈值为2．0)。对 y。，考察因素中 没有一个是显著的；对 y2，回归方程 Y2=一0．836+ 0．23x4 +0．01X。X (r=0．970)。综合 yl，y2的期望 方向及生产实际，初步确定工艺条件为药物比例 40％，PEG 40％，料液温度9O℃，滴距6 cm，冷却液 温度 1O℃，冷却柱长度 1．2 m。 试验中发现滴距实际上会对试验结果有所影 响，在固定其他因素的条件下，改变滴距，以y。和y2 作为测评指标进行比较，试验结果见表2。 表 2 不同滴距对滴丸成型性的影响 方差分析表明，滴距对丸重差异、圆整度均无显 著性影响，但滴距的增大会使滴丸到达液面击碎而 产生细小颗粒，原料浪费且影响滴丸外观。综合以 上分析结果确定最佳制剂工艺条件为含药量40％， PEG占基质总重40％，滴距 2 cm，料液温度 9O℃。 按此最佳工艺条件重复制备 3批滴丸，各批制备量 10 g，测定并计算各样品的y。，y2值为 Y。=2．7％， Y2=0．976 5土0．003 3，可见该工艺条件的结果及重 现性良好，其丸重差异、溶散时限等各项指标均符合 2005年版药典滴丸剂通则要求。 2 质量标准研究 2．1 薄层鉴别 取滴丸粉末 0．1 g，加少量95％乙 醇，水浴溶解，室温放冷后，用95％乙醇定容作为供 试品溶液。同时制备大豆异黄酮滴丸阴性对照液 (不含提取物)及大豆异黄酮提取物溶液。另取对 照品，加95％乙醇制成每 mL含 0．26 mg的溶液，作 为对照品溶液。吸取对照品溶液 1O L，提取物溶 液3 p．L，供试液与阴性对照液各 5 分别点于同 一 硅胶 G薄层板上，以甲苯一甲酸乙酯一甲酸(5：4：1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液。供 试品色谱中，在与对照品和提取物溶液色谱相应的 位置上，显示相同颜色的斑点，且阴性对照液不显示 相应斑点。 2．2 原料药的含量测定 大豆异黄酮的测定，已报道的有紫外分光光度 法、高效液相色谱法等，参照文献[4]，研究采用紫 外分光光度法测定滴丸中大豆异黄酮含量。 2．2．1 对照品溶液的制备 精密称取金雀异黄素 对照品 1O．18 mg，以95％乙醇溶解并定容至25 mL， 摇匀，临用时取该液 1 mL用 95％乙醇定容至 5O mL，得金雀异黄素对照品溶液(8．144 p．g·mL )。 供试品溶液的制备 精密称取大豆异黄酮提取 物 1O．19 mg按对照品溶液方法制备。 2．2．2 线性范围考察 分别精密吸取对照品溶液 0．0，0．5，1．0，2．0，2．5，3．0，4．0，4．5，5．0 mL于 1O mL量瓶中，精密加入95％乙醇1．0 mL，用蒸馏水定 容。以第 1个样品液为空白，在 262 nm处测定吸光 度，以吸光度值(A)对样品浓度(C)作图，得一直 线，回归得标准曲线方程 A=0．169 5C+0．007 1， r=0．999 8。表明在0．407 2～4．07 2 p．g·mL 具有 良好的线性关系。 2．2．3 稳定性考察 依法对同一供试品溶液每隔 1 h测定 1次吸光度，结果表明，供试液在 6 h内稳 定，RSD 0．27％( =6)。 2．2．4 精密度考察 精密吸取对照品溶液3．0 mL 5份，按 3．3项下的方法测定吸光度，RSD 0．11％， 表明仪器精密度良好。 2．2．5 方法精密度试验 分别取同一批原料药 5 份，按3．3项下的方法测定并由标准曲线计算含量， RSD 1．23％，表明方法精密度良好。 2．2．6 加样回收率试验 精密量取已测定含量的 供试品溶液适量，分别精密加入金雀异黄素对照品 溶液适量，按上述测定方法测定，计算加样回收率， 结果见表3。 2．2．7 原料药的含量测定 如上制备供试品液，并 依法测定，计算含量，得大豆异黄酮含量以金雀异黄 素计为5O％，RSD 0．41％。 3 制剂的含量测定 3．1 背景干扰考察 取自制大豆异黄酮滴丸2O 粒，研细，精密称取适量溶解于 100 mL量瓶中，用 95％乙醇定容，作为样品液。同法制备不含大豆异 黄酮的空白滴丸的阴性样品溶液、金雀异黄素对照 品溶液。照3．3项下方法对以上 3种溶液在 200～ · 907· 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 32卷第 1O期 2007年 5月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica V01．32．Issue 10 May，2007 表3 金雀异黄素加样回收率 次数 样品中含量 ／ 回收率 ／％ 102．67 10o．15 101．41 99．58 97．57 10o．59 98．11 97．70 103．08 9．439 l1．80o 14．156 400 nm进行扫描。结果，样品液和对照品液在 262 nm处有较好吸收，吸光度稳定，而阴性样品液在 262 nm处无明显吸收，表明背景基本无干扰。 3．2 方法学考察 同原料药方法学考察，结果方法 精密度 RSD 0．45％。稳定性 RSD 2．42％，表明样 品液在5 h内稳定。回收率结果见表4。 表4 加样回收率 次数 加 ／ 测 ／ g 量 回 ／ w／O 率 平均值 RSD ，％ ％ 97．21 0．78 7．737 7．737 7．737 13．030 13．030 13．030 17．917 17．917 17．917 2O．117 20．176 20．235 25．428 25．251 25．31O 29．794 29．854 30．208 96．45 97．21 97．97 98．02 96．66 97．12 95．66 95．99 97．97 97．27 O．71 96．54 1．3 注：样品中含量均为 12．655 3．3 制剂含量测定 对3批滴丸进行含量测定，结 果平均值 12．258 g／粒，RSD 1．45％。 4 小结与讨论 4．1 加样回收率有多种不同的做法，笔者试验了2 种方法：1种以测得含量的40％，50％，60％为基本 本底，然后分别加人相等量对照品后测定并计算加 样回收率；另 1种以测得含量的50％为基本本底， 然后分别加人相当于基本本底 6o％，100％，140％ 的对照品量，测定并计算加样回收率。结果表明，对 本项研究而言，2种方法所得的回收率均符能合要 求，RSD<3％，选择何种方法可视方法的简便而定。 4．2 料液温度对滴丸成型性有比较明显的影响，温 度过高，滴出速度较快，但滴丸在成型后易粘结；温 度过低，则滴出速度较慢，且滴丸在冷却液中还未完 全收缩成型已经冷却，圆整度差。建议结合提高生 产率可考虑运用梯度冷却的方式。 4．3 滴距对滴丸外观有比较明显的影响。滴距过 大，滴丸易击碎且气泡难以逸出；滴距过小，易产生 连珠状或大丸粒。故滴距应控制适当。 4．4 制剂成型工艺中，发现不同厂家生产的 PEG 对滴丸的成型性和外观有极显著影响，应注意严格 控制 PEG质量，从而保证滴丸质量。 [参考文献] [1] 毛峻琴，宓鹤鸣．大豆异黄酮的研究进展[J]．中草药，2000，31 (1)：61． [2] 林亚平，邱德文．用均匀设计法优选米槁心乐滴丸的制剂工艺 条件[J]．中国中药杂志，1995，20(4)：219． [3] 方开泰．均匀设计一一数论方法在试验设计中的应用[J]．应 用数学学报，1980，3(4)：363． [4] 张玉梅 ，孙学斌，高旭年，等．紫外分光光度法测定大豆异黄酮 的含量f J1．中国食品卫生杂志。2000。12(4)：7． Preparation and quality control of soybean isoflavone dropping pills JIANG Cai．bin ，LIN Ya．ping ，YU Li．mei (1．Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China； 2．FDA of Guizhou province，Guiyang 550004，China；3．ZunYi Medical College，Zunyi 563000，China) [Abstract] Objective：To establish the optimized preparation procedure and study the method to determine the content for soy。 bean isoflavone(SIF)Dropping Pills．Method：The preparation conditions，such as the proportion between SIF and PEGs，the temper。 ature of mixture of SIF and PEGs。dropping distance，etc．，were studied with Uniform Design and One-way ANOVA．SIF Was identi- fied bv TLC and the content of SIF was determ ined by UV spe ctrometry at 262 nm detection wavelength．Result：Three batches of the preD products meet the standards of the Chinese pharmacopoeia on dropping pills． SIF Can be identified by TLC． Using UV spe c。 trometry．the linear range of SIF was 0．4O7 2 to 4．072 g·mL-。an d the correlation coefficient Was 0．999 8．In high，middle and low concentration．average recovery were 96．54％，97．27％ and 97．21％，respectively(RSD wefe 1．3％，0．78％ and 0．71％ )．Con。 clusion：Th e preparation procedureisfeasible，simpleand suitable，themethod establishedinthis paper Can be adoptedforthe quality · 908· 蚰％一 o R／一L L 值 ， 石 ∞ 髓 测 ，一 勰 勰勰 暹 曙一 瞠 加 ，一9 9 9 “ “ ¨ ¨ H ¨ 维普资讯 http://www.cqvip.com 第32卷第 1O期 2007年5月 中 国 中 药 杂 志 China Journal of Chinese Materia Medica Vo1．32，Issue 10 May，2007 control of SIF dropping pills，and the determination method is simple，relatively fast and accurate． [Key words] soybean isoflavones；genistein；dropping pill；uniform design method；technology of preparation；UV spectropho· tometry；TLC [责任编辑 鲍 雷] 复方配伍共煎对三七中皂苷类成分的影响 黄呜清，李卓明，李湘力，谢友良，赵学军，苏子仁 (广州中医药大学 新药研究开发中心，广东 广州510405) [摘要] 目的：探讨复方配伍共煎对三七中皂苷类成分的影响。方法：以三七皂苷 R。、人参皂苷 Rg。，Re，Rb。 以及 pH为指标，考察不同配伍复方提取液加热 2 h后三七皂苷含量变化及其与 pH的相关性。结果 ：三七与女贞 子、三七与土鳖虫、三七与地龙的配伍药液以及缺水蛭脂糖降方药液pH在5．7以上，其三七皂苷保留率均高于 90％；三七与丹参、三七与赤芍、三七与桔梗、三七与牛蒡子的配伍药液 pH在4．5—5．5，其三七皂苷保留率在 60％一85％；三七与水蛭的配伍药液，pH下降至3．4，三七皂苷保留率仅为38．4％；采用0．1％NaOH溶液调节脂糖 降方药液的pH至6．3，三七皂苷保留率显著提高至97％。结论：与三七配伍的其他中药提取液的pH值大小，对三 七皂苷的稳定性有重大影响。 [关键词] 三七；中药配伍；pH；三七皂苷 [中图分类号]R 284．1 [文献标识码]A [文章编号]1001-5302(2007)10-0909-04 脂糖降验方是由三七、丹参、赤芍、女贞子、牛蒡 子、桔梗、地龙、土鳖虫、水蛭等1O余味中药组方而 成，主要用于治疗高血脂、高血糖等常见老年病。方 以三七为君，主含皂苷类成分，如三七皂苷 R。、人参 皂苷 Rg。，Re，Rb。等，具有多种生理活性，如抗疲劳、 抗衰老、抗肿瘤、提高机体免疫力、促进血液循环等 作用⋯。作者在本方生产工艺研究过程中，以三七 总皂苷提取率为考察指标，发现三七在与复方提取 过程中，总皂苷含量不断下降。本实验以三七皂苷 R。、人参皂苷 Rg。、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb。为考 察指标，研究复方中其他中药对三七皂苷类成分的 影响及其与药液 pH之间的相互关系。 1 仪器与试药 DIONEX SUMMIT高效液相色谱仪(配有PD一 100检测器、STH585柱温箱、P680 HPLC泵、ASI一 100 自动 进 样 器 )，Chromeleon色 谱 工 作 站， KQ3200DE型医用数控超声仪(昆山市超声仪有限 公司)，KL一009型袖珍数字显示酸度计(科力龙电 [收稿日期] 2006-03-15 [通讯作者] ’苏子仁，Tel：(020)36585814，E-mail：suziren@ g*htem．edu．cn 子有限公司)，GIA5型密闭耐压瓶(SCHOTr)。 三七皂苷 R。(批号 110745-200313)、人参皂苷 Rg。 (批号 110703-200322)，Re(批号0754-9911)，Rb。(批号 110704-2(1Y318)，均购自中国药品生物制品检定所。乙 腈是色谱纯，甲醇、NaOH、冰醋酸为分析纯。 三七、丹参、赤芍、女贞子、牛蒡子、桔梗、地龙、 土鳖虫、水蛭等药材，均购 自广西玉林药材有限公 司，经广州中医药大学陈建南研究员鉴定，均符合 《中国药典))2005年版一部各有关项下规定。 2 含量测定方法 2．1 色谱条件 Phenomenex Luna Cl8色谱柱(4．6 mill X250 mln，5 m)；流动相 A乙腈．B水，梯度洗 脱(0—35 min，19％A；35—55 min，19％ 一29％A； 55—70 min，29％A；70—100 min，29％ -40％A)；检 测波长203 nm；流速 1．0 mL·min～；柱温27 oC(70 win时降为2O℃)，进样量 lO L。三七皂苷 R。、人 参皂苷 Rg。，Re，Rb。在上述色谱条件下与其他成分 实现了基线分离，见图 1。 2．2 标准曲线的绘制 取三七皂苷 R。对照品、人 参皂苷 Rg。，Re，Rb。对照品适量，精密称定，加甲醇 分别制成每 1 mL含三七皂苷 Rl 0．188 mg·mL～、 · 909 · 维普资讯 http://www.cqvip.com