巨噬细胞原代培养

巨噬细胞原代培养 2008-06-12 00:00   来源：生物医药网   点击次数： 217 关键词： 1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。 2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。 3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。 4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。 5．用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。 6．小心拔出针头，把液体注入离心管中，250g ，4℃离心10分钟，去上清，加10 ml Eagle培养基。 7．计数细胞，每只小鼠可产生20～30×105个细胞细胞，其中90%为巨噬细胞。 8．为获取3×105个帖附细胞/平方厘米，需接种2.5×106个/ml。 9．为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1-2次后，再加新Eagle培养液置37℃ CO2温箱中培养。 http://www.biomart.cn/experiment/430/488/490/493/27186.htm 正常大鼠巨噬细胞的培养 实验材料： 1.  成年大鼠或小鼠，采用腹腔取材法 2.  不含Ca2+和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2 3.  培养基：RPMI1640、Ham`s F12等均适于巨噬细胞的培养。大多数巨噬细胞的培养可加10%-40%的血清，小鼠巨噬细胞加10%小牛血清，用无血清培养基亦可。新生小牛血清中含有抗体，能刺激巨噬细胞成熟，也可用乳清蛋白培养 4.  动物解剖台或蜡板1个，带钩眼科镊子2支，解剖剪1个，10ml注射器1个，针头数支，离心管2支，吸管数支，培养瓶数个，血细胞计数器1个，Eagle液，肝素（10U/ml）30ml，Eagle培养液（含10%小牛血清和青霉素、链霉素）50ml 实验方法： 1.  实验前3d，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml； 2.  引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁； 3.  再用70%乙醇擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同时从两侧用手揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动； 4.  用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹壁中液体集中于针头下吸取入针管内。小心拔出针头，把液体注入离心管中，1000r/min，离心10min后，去上清，加10ml Eagle培养基； 5.  计数细胞，每只小鼠可产生2×107 —3×107 个细胞，其中90%以上为巨噬细胞。为纯化培养细胞，去除其他白细胞，接种数小时后，去除培养液，用Eagle液冲洗1—2次后，除去漂浮的细胞，得到贴壁的巨噬细胞。再加新Eagle培养液置37℃、5%CO2 温箱中培养。