鲤鱼粘液细胞类型的研究

参 � 考 � 文 � 献 [ 1 ] � 国家计委国土开发与地区经济研究所和国家计委国土 地区. � 96中国人口资源环境.北京:中国环境科学 出版社, 1996. 151. [ 2 ] � 沈韫芬,章宗涉, 龚循矩等,微型生物监测新技术. 北 京:中国建筑出版社, 1990. 524. [ 3 ] � Page, F. C. , F. J. Siem ensma. Nackte Rhizopoda und Heliozoea. Gustav Fischer Verlag, S tut tgar, 1991. 297. [ 4 ] � Ogden, C. G. , R. Hedlay. An at las of freshwater testate amoebae. London: Oxford University Press, 1980. 222. [ 5 ] � 沈韫芬,顾曼如.武昌东湖原生动物生态初步研究.水 生生物学集刊, 1965, 5( 2) : 146~ 181. [ 6 ] � 龚循矩.从原生动物变化看武汉东湖富营养化的发展. 水生生物学报, 1986, 10( 4) : 340~ 352. [ 7 ] � 沈韫芬,冯伟松,顾曼如等.河流的污染监测.北京: 中 国建筑工业出版社, 1994. 308. [ 8 ] � Foissner, W . Soil protozoa: fundamental problems, eco- logical significance, adapt ions in ciliates and testaceans, bioindicators, and guide to the lit eratures. Progr . Pr oti- sol . , 1987, 2: 69~ 212. [ 9 ] � 宁应之,沈韫芬.中国典型地带土壤原生动物: �� 区系 特征和物种分布.动物学报, 1998, 44( 1) : 5~ 10. [ 10] � 宁应之,沈韫芬.中国典型地带土壤原生动物: �� 生态 学研究.动物学报, 1998, 44( 3) : 271~ 276. � * 山东省自然科学基金资助项目 � No. Q94D0222; � 第一作者介绍:尹 � 苗,女, 1975年生,山东邹平县人, 硕士, 研究细胞生物学; � 收稿日期: 1998-07-14,修回日期: 1998-11-19 鲤鱼粘液细胞类型的研究* 尹 � 苗 � 安利国 � 杨桂文 � 孟广勋 � 冯程强 (山东师范大学生物系 � 济南 � 250014) 摘要 :以阿新蓝-过碘酸雪夫氏染色方法( AB-PAS)观察了鲤鱼粘液细胞的形态和类型。根据 AB-PAS 染 色结果将鲤鱼粘液细胞分成四型 : � 型为红色, AB 阴性, PAS 阳性, 含中性粘多糖; �型为蓝色, AB 阳 性, PAS 阴性, 含酸性粘多糖; �型为紫红色, AB 与 PAS 均为阳性, 同时含有中性粘多糖和酸性粘多糖, 但以中性粘多糖为主; �型为蓝紫色, AB与 PAS 均为阳性,同时含中性粘多糖和酸性粘多糖, 但以酸性 粘多糖为主。 关键词:鲤鱼( Cyp rinus carp io) ;粘液细胞 中图分类号: Q954�6 � 文献标识码: A � 文章编号: 0250-3263( 2000) 01-08-02 � � 人们很早就发现鱼类的体表、口腔、鳃和消 化道中存在着大量的粘液细胞。国外曾有人对 非洲肺鱼、鳟鱼、河鲈等鱼的粘液细胞的形态和 成分进行了一定的研究[ 1~ 4] , 但是只有 Sibbing 和U ribe对鲤鱼粘液细胞的分布和功能进行了 初步的探索[ 5] , 尚缺少系统性的观察与研究。 本实验选择我国主要淡水养殖品种鲤鱼为实验 材料, 以AB-PAS 染色方法,对粘液细胞的形态 和分型进行比较全面的、系统的研究,以期对鲤 鱼的基础研究提供参考。 1 � 材料与方法 1�1 � 实验材料 � 鲤鱼( Cyp r inus carp io) 5尾, 2龄,体长 30~ 40 cm, 体重 500~ 700 g, 正常, 无损伤, 1997 年 5月初购自济南市水产市场。 饲养于 40 cm � 50 cm � 110 cm 的玻璃鱼缸中, 通气,定期换水, 稳定 3天。 1�2 � 实验方法 � 处死,取皮肤、口腔上皮、鳃、 消化道、肝胰脏、肾脏、脾脏、心脏、生殖腺等组 织, 0�6%生理盐水冲洗, Bouin� s液固定, 常规 石蜡切片, AB-PAS 染色( AB 染液 pH2�6) [ 6] , 对不同部位上皮中粘液细胞的数量、着色和形 态进行观察。对有鳞片的皮肤, 必须先用 Von Ebner脱钙液脱钙软化[ 7]。 �8� � � � 动物学杂志 � Chinese Journal of Zoology 2000 35( 1) � 2 � 结 � 果 粘液细胞经 AB-PAS染色后可呈现四类不 同的颜色:红色、蓝色、紫红色和蓝紫色。我们 根据 AB-PAS染色结果的不同将鲤鱼的粘液细 胞分为四型: �型, AB-PAS 染色呈红色, 含有 PAS阳性的中性粘多糖(图版 � : 1, 见封 2, 下 同) ; �型,AB-PAS 染色呈蓝色, 含有 AB 阳性 的酸性粘多糖(图版 �: 2) ; �型, AB-PAS 染色 呈紫红色, 主要含有 PAS 阳性的中性粘多糖, 同时含有少量 AB阳性的酸性粘多糖(图版� : 3) ; �型, AB-PAS染色呈蓝紫色, 主要含有 AB 阳性的酸性粘多糖, 同时含有少量 PAS阳性的 中性粘多糖(图版� : 3)。 3 � 讨 � 论 最早对鱼类粘液细胞进行研究的是 Kitzan 和 Sw eeny ( 1968) , 他们根据 PAS 反应颜色的 深浅不同将非洲肺鱼上皮组织中的粘液细胞分 为三型, �型为亮红色, �型为淡红色, �型为 深红色[ 1]。这种分类方法仅根据 PAS 反应颜 色的深浅不同来划分类型,标准很难掌握,也不 能准确地反映粘液细胞中成分的复杂性。Sib- bing和 U ribe( 1985)根据粘液细胞的形态将鲤 鱼咽部的粘液细胞分为梨状、囊状和杯状三种 类型[ 5]。这种分类方法缺陷很大, 第一, 仅凭 细胞形态分类, 不能反映粘液细胞中的成分, 而 粘液细胞的功能与细胞内的粘多糖的成分是密 切相关的;第二,粘液细胞由于分布位置不同可 以有多种形态,因而仅凭细胞形态很难将全身 各处的粘液细胞统一为一个划分标准; 第三, 由 于粘液细胞是立体的, 因而在切片平面上出现 的形态不一定能代表细胞的整体形态,具有很 大的片面性。 我们在多年反复试验的基础上, 对多种染 色方法进行比较, 认为根据 AB-PAS 反应的颜 色将鱼类的粘液细胞分为四种类型是比较科学 和实用的。pH2�6 时, AB 主要对酸性粘多糖 着色, PAS反应主要显示中性粘多糖,将 AB和 PAS的染色结果结合起来便能根据所显颜色 不同比较好地反映粘液细胞中酸性粘多糖和中 性粘多糖的含量变化,从而达到区别不同类型 的粘液细胞的目的。粘液细胞中粘多糖性质的 不同直接反映了粘液细胞功能的差异, 它比依 据细胞形态划分类型更有意义。 粘液细胞在形成初期所含成分单一, 在靠 近基底膜处刚开始分化的粘液细胞多数为只含 中性粘多糖的�型细胞和只含酸性粘多糖的� 型细胞, �型和�型细胞很少。随着粘液细胞 的逐渐发育成熟, 它所含的成分也日趋复杂。 在靠近表层的上皮中,同时含有酸性粘多糖和 中性粘多糖的�型和�型粘液细胞数目增多。 参 � 考 � 文 � 献 [ 1] � Kitzan, S . M . , P. R. Sweeny. A light and elect ron micro- scope study of the st ructure of Protop ter us an nec tens ep-i dermis. I. Mucus production. Can . J. Zool . , 1968, 46: 767~ 772. [ 2] � Harris, J. E. , S . Hunt. T he Fine St ructure of the Epidemis of T wo Species of Salmonid Fish, the At lant ic Salmon ( Salmosalar L. ) and the Brow n Trout ( Salmo tr ut ta L. ) . Cell T iss . R es . , 1975, 163: 535~ 543. [ 3 ] � Noaillac- Depeyre, J. N . Gas. Ult rastural and Cytochemical Study of the Gastric Epithewlium in a Fresh Water T eleostean. Fish ( Per ca Fiu viati li s) , 1978, 10 ( 1 ) : 23~ 37. [ 4] � Harris, J. E. , A. Watson, S. Hunt . Histochemical analysis of mucous cells in the epidem is of brow n t rout Salmo trut ta L. J . Fish Biol . 1973, 5: 345~ 351. [ 5] � Sibbing, F. A. , R. Uribe. Regional specializat ions in the ero- pharynegeal w all an d food processing in the carp ( Cypri- nus carpio L. ) Netherland J. Zool . , 1985, 35 ( 3) : 377~ 422. [ 6] � Jones, R. , L. Reid. T he ef fect of pH on Alcian Blue staining of epithelial glycoproteins. I. S ialomucins and sulphomucins ( single or in simple combinat ions) . H istochemical Jour nal , 1973, 5: 9~ 18. [ 7] � Drury, R. A. B. , E. A. Wallington, S. K. Czmeon. Carleton� s Histological T echnique. 4th ed. Oxford: Oxford University Press. 1967, 140. �9�� 2000 35( 1) 动物学杂志 � Chinese Journal of Zoolog y � � � � � � � 尹 � 苗等:鲤鱼粘液细胞类型的研究 图版� YIN Miao et al . : Study on the Type of Mucous Cells in Carps( Cyprinus carpio) Plate � 图 1 � 鲤鱼口腔上皮横切 � AB- PAS染色,示�型粘液细胞 � � 200 图 2 � 鲤鱼中肠横切 � AB- PAS染色,示�型粘液细胞� � 200 图 3 � 鲤鱼鳃弓部横切 � AB- PAS染色,示�型粘液细胞� � 400