顺铂诱导肾性贫血大鼠模型的建立

中国公共卫生2006年4月第22卷第4期ChinJPublicHealthA妒2006Val22No．4 文章编号：1001．0580【2006)04—0459．02中圉分类号：R556 文献标识码：A 顺铂诱导肾性贫血大鼠模型的建立“ 高丽萍1一，马润宇1，周俊波1 【实验研究】 摘要：目的建立顺铂(DDP)诱发肾性贫血的大鼠模型。方法给大鼠尾静脉注射8mg／kgDDP，采用胎肝细 胞3H—TdR渗入法检测大鼠血清红细胞生成素(EPO)的含量，并观察大鼠肾组织在光镜及电镜下形态的改变及重组 人红细胞生成索(rhEPO)对DDP诱发贫血的影响。结果DDP可引起大鼠红细胞(RBc)、血红蛋白(Hb)．网织红细 胞(Ret)及血清EPO水平明显降低，血清尿素氮(BUN)水平显著升高。病理切片也证实DDP可引起大鼠明显的肾损 伤。rhEPO能明显升高大鼠Hb的水平．并有明显的量效关系。结论8mg／kgDDP可诱导大鼠肾性贫血模型。 关键词：顺铂(DDP)；肾性贫血；红细胞生成索(EPO)；大鼠模墅 EstablishmentofratmodelofDDP—inducedrenalanemiaGA0Liping，MARunyu．ZHoU如nbo．BeijingUniversity oftheChemicalTechnology，HebeiUniversityofEngineering(Handan056029，China) Abstract：0bjectiveToestablishtheratmoddofcis—diamine～diehlom—platinum(DDP)一inducedrenalanemia． MethodsTheratswreintravenouslyinjectedwithDDP(8mg／kg)。and5erllmEPOlevelsweremeasuredby’H—TDRin— corporationinfetalmotlsehepatocytesMoreover。thechangesofrellaltissuewerestudiedbylightmicroscopeandelectronmi— croscope．ResultsThenumberofredbloodcdl，hemoglobinc。ncent博南n，redculocytesandSEFUITterythropoietin(EP0) weregreatlydecreased．∞d&lmureanitrogenelevatedsignificantly，pathologicalfindingsrevealedthatDDPmightsignificandy causerenaldamageinrats．ConclusionRatmodelofrenalanemiacouldbeinducedbyDDP． Keywort％：cis—diamine—dichloro—platinum(DDP)；erythropoietln(EPO)；ratmodel 腰铂(eisplatin)全称为烦式二氯二甄铂(cisdiammine dichloroplatinum,CDDP或DDP)，为一金属居中的平面络合 物。研究明，DDP抗癌作用强，是目前较有希望的一种抗 癌药物，但DDP具有明显的毒副作甩。临床应用DDP治疗肿 瘤患者常常引起贫血，为了验证药物对此种贫血的治疗作用， 需要建立一种DDP诱发贫血的动物模型。我们成功迪用 DDP在大鼠体内诱发了贫血．并用重组人红细胞生成索 (rhEPO)治疗这种贫血。观察EPO改善大鼠贫血的作用。 l与方法 1．1实验动物健康SD大鼠50只，体重(150±10)g,雄性， 由北京大学实验动物中心提供。 1．2药品与试剂顺铂(山东德州制药厂)；尿索氮测定试剂 盒(南京建成生物技术研究所)；氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (5H—TDR)放射性浓度为1ci／L，放化纯度>95％(中国原子 能科学研究所)；重组人红细胞生成素(rhEPO)1000u，L (AMGEM产品)。 1．3实验分组覆观察实验动物常规喂养1周后，箍机分为 正常对照组、DDP组、治疗1组、治疗2组、治疗3组。正常对 照组注射等容积的生理盐水．DDP组及3个治疗组一次性尾 静弥注射DDP8mg／kg，从注射DDP第15d开始到第27d，3 个治疗组分别给大鼠尾静脉注射rhEPO，隔日注射1次，注射 剂量分别为：治疗1组50u／k、治疗2组100U／kg、治疗3 组200u／kg．于注射DDP后第7，14，21d．在动物清醒状态 下，正常对照组、DDP组大鼠心脏取血按常规方法测全血血 红蛋白(1lb)、红细胞(RBC)、网织红细胞(Ret)、血清尿素氮 *基金项目：河北省邯郸市科委基金资助项目(98012—9) 作者单位：1．北京化工大学生命科学与技术学院．北京100029； 2．河北工程学院医学院。邯郸056029 作者简介：高丽萍(1962一)，女。河北般郸人．教授，硕士．主要从事 药物毒理方面的研究。 (BUN)、血清红细胞生成素(EPO)的含量，并从每组中随机抓 取一只大鼠断头处死．取出肾脏，做光学显微镜、透射电子显 微镜观察；于注射rhEPO后第7，14，21d，各组动物在清醒状 态下尾静咏取血测全血Hb的含量，在整个实验过程中，每日 计动物饮食饮水量．定期测体重。 1．4血清EPO洲定采用胎肝细胞3H～TDR渗入法“)，选 用怀孕13～14d的BABL／C纯种小鼠，颈椎脱臼处死，无菌 条件下剖取胎肝5-6个，制成细胞浓度为4×105个／IIll胎肝 单细胞悬液。于96孔板内加入胎肝细胞悬液0．1ml，同时标 准组加入己知浓度的人重组EPO(rKEPO)0．1越／孔． rhEPO的浓度分别为100．50．25，12．5，6．25．3．125mU／m1， 每种裱度重复8孔，空白对照组加入无小牛血清的RP— M11640培养渡，样品组加入待测血清0．1ml／子L。每份样品重 复加样3孔，混匀后，将培养板置于37℃、5％C02培养箱中 培养22h后取出，每孔加八3．7x104Bq啊一TDR继续培养 2h。将培养细胞收集于49号玻璃滤纸上．置80℃烘干，移人 闪烁杯中，过夜，置液闪仪中测量每孔中渗入3H—TDR的放 射量，结果用每分钟放射性计数(计数／rain)表示。将不同量 标准EPO(mU／m1)与其相应的每分钟放射性计数(计数／ min)二者进行回归分析，制备标准曲线，以此计算待测样品的 EPO台量。 2结果 2．1一般情况正常对照组大鼠生长良好，饮食正常．体重 增加．健活动．反应灵敏，DDP组太鼠注射DDP当天或第2d 开始出现摄食明显减少，少动闭眼、精神萎靡、卷曲拱背。5d 后形体消瘦，毛色失泽．体重明显低于对照组。 2．2肾脏病理变化在给大鼠注射DDPI周后，血清BUN 浓度明显高于正常对照组，以后血清BUN虽逐渐降低。但至 第21d仍明显高于正常对照组，有明显的氰质血症(表1)。 万方数据 中国公共卫生2006年4月第22卷第4期凸加JPublicHealthA"册嘶Vol22No4 肾脏病理学检查，注射DDP第21d，光镜下观察可见大鼠肾 小球体积变小；近曲小管上皮细胞浊肿。气球样变，部分上皮 细胞脱落；远曲小管明显扩张，管腔直径相当于正常远曲小管 管腔的2倍左右，上皮细胞大部分脱落；肾问质可见少量的淋 巴细胞浸润(图1)。电镜观察可见大鼠近曲小管上皮细胞明 显肿胀．线粒体肿胀，嵴模糊不清，基质呈颗粒状或絮状，空泡 增多．溶酶体及吞饮小泡体积变大。数量增加，微绒毛有脱落 现象，染色质分布不均且固缩(图2)。 表1 DDP对大鼠全血RBC、Hb、Ret及血清EPO、BUN 含量的影响(i±j) 毋别 注射唧 RI；c m Ret EPo 删⋯ 目(d)(x10'*／L)(∥L) (％)(mU／m1)(nm】l／L) 注；n=10；与正常对照组比较．aP<0．05。bP<001 圈1注射21d时DDP组肾组织切片【HElox10 圉2洼射21d时DDP组近曲小瞥ITEMx4000) 2．3顺铂诱导的贫血柞用 在给大鼠注射DDP第7d．大鼠 的Ret数目、血清EP0明显低于正常对照组(P<0．05)；第 14d，大鼠Hb浓度、REC开始降低．且与正常对照组比差异有 统计学意义(P<0．毗)，此时，血清EPO升高至15．61 mU／d．明显高于正常对照组(P<0．05)；第21d，大鼠Hb、 RBC降至最低，血清EPO仍明显高于正常对照组的(P< 0．05)，以后，大鼠Hb有所恢复，但至第49d仍明显低于正常 对照组(P<0．05)(表2)。 2．4 EPO改善贫血的作用在给大鼠注射DDP第14d时． Hb含量、Ret数目明显降低．此时开始进行EPo治疗大鼠的 贫血实验，r11EPO能明显增加Hb古量．停止给rllEPo后1 周，Hb浓度仍明显高于DDP组。并有明显的量效关系(表2)。 表2 rhEPO对贫血大鼠全血Hb(g／L1含量的影响Cx±s 注：”=lO；与正常对厢组比较，aP<0．05，bP<0．0l；与DDP 组比较．cP<0．05。dP<0．01 3讨论 有文献报道，DDP可诱发大鼠明显的肾损伤【z·3】。本实 验开始采用1．3。5mg／kgDDP给大鼠腹腔注射及尾静脉注 射，虽然引起大鼠明显的肾毒性，但Hb下降不明显，8mg／kg DDP尾静脉注射后第2周，I-Ib下降约11％。RBC．下降约 17％．与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0．01)，即8 mg／kgDDP可明显诱发大鼠贫血。本实验结果表明。DDP组 大鼠在给予DDP第7d时出现了明显的肾毒性，此时．血清 EPO降至很低，Ret数目也降低。第21d，DDP组的Hb明显 降低时，血清EPO明显升高，但升高幅度较小，仍低于非肾性 贫血大鼠血清EP0升高水平。提示DDP所致大鼠肾脏损伤 破坏了EPO生成的组织结构，造成EPO生成不足。导致贫 血。实验结果表明，DDP诱发的贫血属于肾性贫血。rhEPO 是治疗DDP诱发贫血的有效药物。 综上所述，8rng／kgDDP诱发大鼠不易恢复的肾性贫血 是研究预防减轻DDP的肾毒性、血液毒性并提高临床疗效的 一个良好的动物模型。 参考文献 (1]张之南．殷得厚．贫血[M]．重庆；科学技术文献出版社重庆分 社．1989：398—400． [2】 陈新志，卢永样．洪新，等．葡甲胺对染铂大鼠肾损害的顶防及机 理初探[J]．中国公共卫生，2002，18(1)53—54． e3j射葬．仲来福大蒜煮对顺铂所致大鼠肾撮害的预防作用“]中 国公共卫生．2003，19(11)：1326—1328． 收稿日期：2005．07．16 (束艳萍编辑张亚莲校对) 万方数据 顺铂诱导肾性贫血大鼠模型的建立 作者： 高丽萍， 马润宇， 周俊波， GAO Liping， MA Runyu， ZHOU Junbo 作者单位： 高丽萍,GAO Liping(北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029;河北工程学院医学院 ,邯郸,056029)， 马润宇,周俊波,MA Runyu,ZHOU Junbo(北京化工大学生命科学与技术学院 ,北京,100029) 刊名： 中国公共卫生 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PUBLIC HEALTH 年，卷(期)： 2006，22(4) 引用次数： 0次 参考文献(3条) 1.张之南.殷得厚 贫血 1989 2.陈新志.卢永科.洪新.关英杰.仲来福 葡甲胺对染铂大鼠肾损害的预防及机理初探[期刊论文]-中国公共卫生 2002(1) 3.刘勇.仲来福 大蒜素对顺铂所致大鼠肾损害的预防作用[期刊论文]-中国公共卫生 2003(11) 相似文献(0条) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgggws200604041.aspx 下载时间：2010年3月26日